王海燕

我國(guó)中藥材品種繁多，資源豐富，多數(shù)中藥材在歷代中藥本草書籍中有記載，由于歷史記載的變遷經(jīng)緯，同名異物、同物異名、一藥多源等現(xiàn)象普遍存在，典籍記載比較粗略，中藥品種混亂、品種不真、質(zhì)量低劣等現(xiàn)象亦比較嚴(yán)重。中藥材鑒定是在長(zhǎng)期實(shí)踐中產(chǎn)生與發(fā)展起來(lái)的，20世紀(jì)70年代之前，中藥鑒定方法以傳統(tǒng)經(jīng)驗(yàn)鑒別為主，隨著現(xiàn)代儀器分析技術(shù)的不斷發(fā)展，近年來(lái)中藥特征圖譜為中藥材的品種鑒別以及質(zhì)量評(píng)價(jià)提供了新的思路[1]。中藥特征圖譜是指采用現(xiàn)代儀器分析技術(shù)以及分析方法，對(duì)中藥材進(jìn)行相應(yīng)處理后，檢測(cè)并標(biāo)識(shí)中藥材中各種化學(xué)組分群的共有峰的特征圖譜，主要分為化學(xué)成分特征圖譜以及生物特征圖譜，筆者通過(guò)查閱近十年與中藥特征圖譜技術(shù)相關(guān)的研究文獻(xiàn)，對(duì)其在中藥材鑒定中的應(yīng)用展開綜述。

1 中藥特征圖譜技術(shù)

1.1 中藥化學(xué)成分特征圖譜技術(shù)中藥化學(xué)成分特征圖譜是基于中藥化學(xué)成分研究，采用現(xiàn)代儀器分析技術(shù)以及化學(xué)成分分析方法，發(fā)現(xiàn)同一種中藥材的化學(xué)組分群的相似性，通過(guò)對(duì)中藥特征圖譜中主要特征峰的峰面積、吸收峰強(qiáng)弱等進(jìn)行量化檢測(cè)，可以對(duì)中藥材的品種優(yōu)劣、真?zhèn)蔚冗M(jìn)行鑒別。中藥化學(xué)成分特征圖譜主要分為光譜特征圖譜與色譜特征圖譜，主要采用色譜法、光譜法以及聯(lián)用技術(shù)進(jìn)行測(cè)定。色譜法是一種物理或物理化學(xué)分離分析方法，根據(jù)中藥材中化學(xué)成分在流動(dòng)相與固定相兩相中分配系數(shù)差異對(duì)化學(xué)成分進(jìn)行分離與分析。主要分為薄層色譜法、高效液相色譜法、氣相色譜法、高效毛細(xì)管電泳法等，最常用的是高效液相色譜法。薄層色譜法具有操作簡(jiǎn)便、快速的特點(diǎn)，可以提供中藥材在可見光下或者熒光下的直觀圖像[2]。在中藥材鑒定中應(yīng)用薄層色譜法，一般選用中藥材所含的已知化學(xué)成分的對(duì)照品或者對(duì)照藥材的相同提取物為對(duì)照組，在同一展開劑環(huán)境下，中藥材樣品組應(yīng)與對(duì)照組在相應(yīng)的位置上，有相同顏色的斑點(diǎn)或者主要斑點(diǎn)顯現(xiàn)。近些年來(lái)還有研究應(yīng)用薄層掃描法用于中藥材的鑒別，提高了鑒定的靈敏性。章睿等[3]對(duì)不同產(chǎn)地的牡丹皮建立薄層掃描特征圖譜，并進(jìn)行相關(guān)系數(shù)分析，不僅可以反應(yīng)牡丹皮的特征性成分，還可以直觀鑒別牡丹皮。高效液相色譜法具有應(yīng)用范圍廣、流動(dòng)相可選擇范圍大、色譜柱可以重復(fù)使用等優(yōu)點(diǎn)，在中藥材鑒定以及質(zhì)量分析方面具有廣泛的應(yīng)用價(jià)值。李慧等[4]采用相似度評(píng)價(jià)、聚類分析以及主成分分析等3種方法，建立了茜草的HPLC指紋圖譜，并標(biāo)記了12個(gè)共有峰，指認(rèn)了大黃酚、1,8-二羥基蒽醌、羥基茜草素以及大葉茜草素等4個(gè)成分的共有峰，為茜草的鑒定提供了科學(xué)依據(jù)。張丹等[5]應(yīng)用高效液相色譜法測(cè)定防風(fēng)藥材及其偽品中升麻素苷、5-O-甲基維斯阿米醇苷、升麻素、亥矛酚苷等4個(gè)色原酮類成分的含量，并建立指紋圖譜，分析防風(fēng)及其偽品在化學(xué)定量指標(biāo)上的差異，為防風(fēng)的鑒定提供新的思路。高效液相色譜鑒定方法具有很高的靈敏性與準(zhǔn)確度，但是由于鑒定成本較高，故限制了其在基層單位的應(yīng)用。高效毛細(xì)管電泳法主要適用于蛋白質(zhì)、氨基酸等成分的分析與鑒定，一些動(dòng)物類以及果實(shí)種子類中藥材的鑒別可以使用高效毛細(xì)管電泳法。光譜法為通過(guò)測(cè)定中藥材在特定波長(zhǎng)或者一定波長(zhǎng)范圍內(nèi)對(duì)光的吸收度對(duì)中藥材進(jìn)行鑒定、分析的方法。目前，主要有紫外分光光度法、可見分光光度法、紅外分光光度法以及原子吸收光譜法等。紫外分光光度法主要用于測(cè)定主要成分在200～400 nm下有吸收的中藥材[6]；可見分光光度法主要用于測(cè)定主要成分在400～850 nm下有吸收的中藥材。紅外分光光度法在中藥材的鑒定上具有很高的專屬性與準(zhǔn)確性，在測(cè)定中藥材方面，需要對(duì)樣本進(jìn)行提取。目前，已經(jīng)有許多研究報(bào)道將紅外分光光度法直接應(yīng)用于中藥材粗提物的品種鑒定，近紅外光譜技術(shù)可用于中藥材的快速真?zhèn)舞b定，具有操作無(wú)損、環(huán)保等優(yōu)勢(shì)，已有研究者將近紅外光譜技術(shù)用于通草、三七、紅參[7]等中藥材的真?zhèn)舞b定。胡軼娟等[8]采用近紅外光譜技術(shù)與化學(xué)計(jì)量學(xué)方法結(jié)合，收集6個(gè)主產(chǎn)地的前胡以及7種常見的前胡偽品，采集各組樣品的近紅外光譜圖，結(jié)合化學(xué)計(jì)量法建立了一種快速、無(wú)損傷的前胡藥材真?zhèn)舞b別方法。但是由于操作復(fù)雜、鑒定費(fèi)用較高，對(duì)于一些含有相似成分的中藥材則很難進(jìn)行鑒定分析。原子吸收光譜法在對(duì)中藥材微量元素的測(cè)定方面具有專屬性，如膠類中藥材。膠類中藥材是由動(dòng)物的皮、甲、鱗等經(jīng)過(guò)熬制后制成固體膠入藥的一類中藥材。微量元素是膠類中藥材的主要成分之一，原子吸收光譜法可用于膠類中藥材的摻偽鑒定。籍國(guó)霞等[9]應(yīng)用原子吸收光度法對(duì)不同廠家生產(chǎn)的阿膠質(zhì)量進(jìn)行檢測(cè)，還可應(yīng)用到膠類中藥材摻假的鑒別。隨著現(xiàn)代儀器分析技術(shù)的發(fā)展，色譜與質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)已經(jīng)成為一門新技術(shù)。劉雯雪等[10]采用氣相色譜法建立了郁金藥材揮發(fā)油的指紋圖譜，采用氣質(zhì)聯(lián)用技術(shù)確定了指紋圖譜的22個(gè)特征峰，不同產(chǎn)地的郁金的揮發(fā)油含量存在差異，同一產(chǎn)地不同批次的郁金的揮發(fā)油含量也有一定差異。聯(lián)用技術(shù)擴(kuò)大了中藥化學(xué)成分特征圖譜技術(shù)在中藥材鑒定領(lǐng)域的應(yīng)用前景。

1.2 生物特征圖譜技術(shù)在中藥材鑒定方面，DNA特征圖譜應(yīng)用相對(duì)廣泛。DNA特征圖譜技術(shù)在中藥材鑒定中的應(yīng)用，是基于中藥材品種的DNA序列的特異性，使用分子生物學(xué)技術(shù)，建立DNA特征圖譜。同一種藥材品種在DNA序列上的表達(dá)相似，不同科屬的中藥材具有特異的DNA條帶圖譜，DNA特征圖譜在中藥材鑒定方面具有良好的應(yīng)用前景，目前常用的DNA特征圖譜技術(shù)主要有：隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA技術(shù)、PCR技術(shù)、限制性內(nèi)切酶片段長(zhǎng)度多態(tài)性分析技術(shù)(RFLP)等。PCR技術(shù)可用于鑒別正品與混淆品存在明顯種間序列差異的中藥材的鑒定，蔣超等[11]通過(guò)研究設(shè)計(jì)了蛤蚧的PCR鑒別引物，這一引物對(duì)蛤蚧正品具有高度特異性，可實(shí)現(xiàn)對(duì)蛤蚧及其偽品的快速鑒別。梁新合等[12]對(duì)烏梢蛇的鑒別研究展開綜述分析，目前在烏梢蛇的鑒定上，基于PCR技術(shù)，已經(jīng)研發(fā)出一系列高效、快速、準(zhǔn)確的分子鑒別方法。堿裂解法是一種DNA快速提取技術(shù)，不需要使用大型儀器，可用于蛇類藥材、冬蟲夏草等[13]多種動(dòng)物藥材的快速鑒定，為現(xiàn)場(chǎng)鑒定提供技術(shù)支持。隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA技術(shù)具有簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)，袁天翊等[14]使用隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA技術(shù)繪制了甘草、延胡索、當(dāng)歸等8種中藥材的DNA圖譜，具有較好的重現(xiàn)性與可行性，可為未知中藥材的鑒定提供依據(jù)。限制性內(nèi)切酶片段長(zhǎng)度多態(tài)性技術(shù)具有標(biāo)記數(shù)目無(wú)限、不受環(huán)境影響等優(yōu)點(diǎn)，缺點(diǎn)是準(zhǔn)確度較低，可用于中藥材的品種鑒定。近年來(lái)DNA指紋鑒定法在一些中藥材的鑒定中得到推廣應(yīng)用，DNA指紋鑒定法是使用PCR技術(shù)、RFLP技術(shù)以及凝膠電泳法等分子生物學(xué)技術(shù)，建立特異性DNA條帶圖譜。孫麗媛[15]等使用PCR技術(shù)與RFLP技術(shù)結(jié)合，建立川貝的DNA指紋圖譜，在川貝藥材的真?zhèn)舞b別方面具有很高的專屬性，但是由于PCR技術(shù)要求的實(shí)驗(yàn)條件比較嚴(yán)格，故限制了該法在基層單位的使用。

2 小結(jié)

與傳統(tǒng)中藥經(jīng)驗(yàn)鑒定方法相比，中藥特征圖譜方法不受藥材樣品的形態(tài)限制，但是，中藥特征圖譜方法需要現(xiàn)代儀器分析技術(shù)、特征圖譜分析軟件、數(shù)據(jù)庫(kù)系統(tǒng)等，該法在基層單位得不到很好的推廣[16]。目前在我國(guó)，特征圖譜技術(shù)尚停留在實(shí)驗(yàn)研究的階段，還沒(méi)有形成系統(tǒng)的方法學(xué)體系，還需要在道地中藥材特征圖譜數(shù)據(jù)庫(kù)、中藥材特征圖譜方法學(xué)體系以及特征圖譜分析軟件等方面進(jìn)行研究與完善，以充分發(fā)揮中藥特征圖譜技術(shù)在中藥材鑒定領(lǐng)域的應(yīng)用價(jià)值。