黎巧茹 鄒亞偉 賴文英 林春燕 李麗羽

[摘要]目的 明確CD4+細胞與CD8+細胞比值與新生兒缺氧缺血性腦病病情的相關性。方法 選取2015年10月～2018年6月中山市人民醫(yī)院新生兒科住院的60例HIE患兒及同期我院產(chǎn)科出生正常新生兒73例。應用流式細胞儀測定血CD3+、CD4+、CD8+細胞及CD4+/CD8+比值。結果 HIE患兒T細胞亞群的表達均明顯低于正常新生兒（P均<0.05）;重度HIE患兒CD3+、CD4+細胞及CD4+/CD8+比值明顯均低于中度HIE患兒（P均<0.05），中度HIE患兒CD3+、CD4+細胞及CD4+/CD8+比值明顯均低于輕度HIE患兒（P均<0.05），而不同分度HIE的CD8+細胞則無統(tǒng)計學差異（P>0.05）;CD3+、CD4+及CD4+/CD8+與HIE病情分度均呈負相關（P均<0.05）。結論 CD4+/CD8+比值與HIE新生兒的病情危重程度密切相關，可作為患兒病情嚴重程度的有效預測指標。

[關鍵詞]新生兒缺氧缺血性腦病;淋巴細胞;T淋巴細胞亞群;CD4+T淋巴細胞;CD8+T淋巴細胞

[中圖分類號]R722.1

[文獻標識碼]A

[文章編號]2095-0616（2020）01-14-04

新生兒缺氧缺血性腦?。╤ypoxic ischemicencephalopathy，HIE）是各種圍生期窒息所引起的部分或完全缺氧、腦血流減少或暫停而導致的胎兒或新生兒缺氧缺血性腦損傷（hypoxic ischemic braindamage，HIBD）[1]。HIE是新生兒窒息后的嚴重并發(fā)癥，也是圍產(chǎn)期新生兒中樞神經(jīng)系統(tǒng)損害最常見的原因，其病情重、病死率高，并常導致永久性腦損傷或腦功能障礙，給家庭、社會帶來較大負擔。尋找快速、靈敏、高效的HIE診斷、病情嚴重程度和預后評估的指標，是目前研究的一大熱點[2]。但由于新生兒神經(jīng)細胞可塑性較強，在治療時間窗予以積極的治療，可阻止病情進展并且可一定程度的改善已發(fā)生的神經(jīng)損傷，因此早期對新生兒HIE做出診斷和病情嚴重程度的判斷，無疑是提高HIE患兒存活率、降低其致殘率的關鍵，大大減少HIE患兒后遺癥，對預后有著極為重要的意義[3]。目前國內(nèi)外新生兒科仍最常應用Apgar評分來判斷新生兒出生后神經(jīng)系統(tǒng)的狀況，可以初步篩選HIE患兒[4]。后借助影像學手段對疾病進行進一步確診和病情的評估[5]。本研究旨在明確CD4+細胞與CD8+細胞比值與新生兒缺氧缺血性腦病的相關性。

1 資料與方法

1.1一般資料

選取2015年10月～2018年6月于我院新生兒科行住院治療的60例HIE及同期我院產(chǎn)科出生正常新生兒73例。其中HIE組患兒男39例，女21例;輕度19例，中度23例，重度18例;胎齡均為37～42周。缺氧新生兒納入標準：（1）存在明確的圍生期缺氧病史;（2）患者具有腦電圖、顱腦B超或顱腦CT、MR檢查;（3）缺氧新生兒均于生后72h內(nèi)人院;（4）胎齡37～42周，患者均為足月兒;（5）缺氧患兒不合并血液病、自身免疫性疾病等其他可對血細胞組分造成影響的疾病，且亦無該類疾病家族史;（6）母嬰均未使用過影響淋巴細胞測定的藥物。另選取同期在我院產(chǎn)科生產(chǎn)后體檢正常的新生兒73例，作為正常對照。正常對照組男35例，女38例，胎齡均為37～42周。

1.2資料采集和觀察指標

收集我院新生兒科住院治療的60例HIE及同期我院產(chǎn)科出生正常新生兒73例的性別、年齡、胎齡、日齡、出生體重、分娩方式（剖宮產(chǎn)、順產(chǎn)、產(chǎn)鉗助產(chǎn)）等基本情況。另外對于HIE新生兒其圍生期缺氧史，低氧原因（宮內(nèi)窘迫、產(chǎn)時窒息），生后有無反應差、發(fā)紺、抽搐、神經(jīng)系統(tǒng)癥狀及體征、臍帶、胎盤情況、羊水污染程度等臨床表現(xiàn)，Apgar評分（1、5min），重要輔助檢查等臨床資料進行收集。

另收集缺氧患兒急性期（出生24h時）以及病情穩(wěn)定后（恢復期，出生14d）T淋巴細胞亞群參數(shù)（CD3+淋巴細胞、CD4+T淋巴細胞、CD8+T淋巴細胞、CD4+/CD8+），同時收集同期正常對照新生兒以上各指標。

1.3檢測方法

T淋巴細胞亞群（CD3+淋巴細胞、CD4+T淋巴細胞、CD8+T淋巴細胞、CD4+/CD8+）的檢測：另采集研究對象靜脈血2mL于1.15% EDTA-K2抗凝的試管中，用貝克曼庫爾特CytoFLEX流式細胞儀，于采血后2h內(nèi)完成測試。

1.4統(tǒng)計學方法

所有數(shù)據(jù)采用SPSS21.0軟件進行統(tǒng)計分析。計量資料以（x±s）表示，多組數(shù)據(jù)若符合正態(tài)分布，采用方差分析法，兩組間比較采用獨立樣本t檢驗分析，計數(shù)資料以[n（%）]表示，采用X2檢驗，Spearman相關性分析淋巴細胞相關參數(shù)與HIE新生兒病情的嚴重程度行相關性分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1HIE組與正常組間淋巴細胞相關參數(shù)比較

HIE組患兒CD3+、CD4+T淋巴細胞所占比例明顯低于正常對照組患兒，差異有統(tǒng)計學意義（P均<0.05）;HIE組患兒CD4+/CD8+比例明顯低于正常對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;但兩組患兒間CD8+T淋巴細胞所占比例差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。見表1。

2.2HIE亞組間淋巴細胞相關參數(shù)比較

重度HIE患兒CD3+、CD4+T淋巴細胞所占比例明顯低于輕度和中度HIE患兒（P均<0.05），而中度HIE組CD3+、CD4+T淋巴細胞所占比例也明顯低于輕度組（P均<0.05）;重度HIE患兒CD4+/CD8+值明顯低于輕度和中度HIE患兒，中度HIE組CD4+/CD8+值也明顯低于輕度患兒（P均<0.05）;但HIE各亞組間CD8+T淋巴細胞所占比例差異無統(tǒng)計學意義（P均>0.05），見表2。

2.3HIE病情與淋巴細胞參數(shù)之間的相關性分析

HIE病情嚴重程度分為輕、中、重度3個等級，對HIE病情與淋巴細胞參數(shù)進行采用Spearman等級相關性分析，結果顯示：T淋巴細胞亞群分析，CD4+T淋巴細胞所占比例與患兒病情嚴重程度呈明顯負相關（r=-0.531，P<0.05），而CD8+T淋巴細胞所占比例與患兒病情嚴重程度無明顯的相關性（P>0.05），CD4+/CD8+比值與患兒病情也呈現(xiàn)一定的負相關（r=-0.436，P<0.05）。見表3。

3 討論

本研究納入HIE患兒T淋巴細胞亞群的相關參數(shù)（CD3+淋巴細胞、CD4+T淋巴細胞、CD8+T淋巴細胞、CD4+/CD8+），以期進一步闡釋HIE患兒的細胞免疫狀態(tài)。HIE有著極為復雜的發(fā)病機制，近年研究表明，HIE的發(fā)生機制與免疫炎癥損傷有關，免疫系統(tǒng)及其功能異常在圍產(chǎn)期窒息和HIE發(fā)病中也起著重要作用[6]。有學者認為，HIE后免疫抑制（淋巴細胞參與）與免疫應答間的平衡一旦被打破，會引起腦缺血進一步加重甚至導致二次損傷[7]。另外有研究報道，新生兒臍血、外周血的淋巴細胞亞群水平低下，窒息可進一步加重新生兒的T淋巴細胞亞群紊亂，而且窒息程度越嚴重，免疫功能降低越嚴重，從而提出了圍產(chǎn)期窒息可導致新生兒免疫功能紊亂[8]。對HIE的T淋巴細胞亞群的變化進行研究，將有利于臨床對于HIE的診治。國內(nèi)有研究顯示，新生兒HIE的CD3+淋巴細胞、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+比值均明顯低于正常新生兒。而且與HIE病情程度密切相關，HIE病情越嚴重，CD3+淋巴細胞降低越明顯，提示缺氧、缺血可導致T淋巴細胞亞群紊亂，表明新生兒HIE時細胞免疫功能受抑制，在HIE發(fā)病過程中免疫介導損傷起著重要的啟動性作用[9-10]。另外，有研究顯示CD3+淋巴細胞和CD4+T淋巴細胞表達與HIE患兒羊水污染存在負相關，而與出生體重和Apgar評分呈正相關，提示羊水污染程度越重，出生體重越低，Apgar評分越低，細胞免疫功能低下越明顯[11]。本研究結果顯示，HIE新生兒其急性期血常規(guī)中的淋巴細胞計數(shù)較無HIE缺氧新生兒和正常對照新生兒明顯降低。HIE新生兒T淋巴細胞亞群的分析顯示，HIE組患兒CD3+淋巴細胞和CD4+T淋巴細胞以及CD4+/CD8+所占比例明顯低于正常對照組患兒;但兩組患兒間CD8+T淋巴細胞所占比例無明顯差異;而HIE重度患兒其CD3+淋巴細胞、CD4+T淋巴細胞以及CD4+/CD8+所占比例也明顯低于中度和輕度HIE患兒，而中度病情患兒其上述指標也較輕度患兒明顯降低，另外，患兒病情的嚴重程度也與患兒以上指標呈明顯的正相關，故CD3+淋巴細胞、CD4+T淋巴細胞以及CD4+/CD8+比值與HIE新生兒的病情危重程度密切相關，可作為患兒病情嚴重程度的有效預測指標。

目前關于HIE患兒T淋巴細胞亞群異常的機制尚不完全清楚。目前認為其可能存在的機制包括：缺血缺氧損傷可誘導淋巴細胞凋亡加速，使T淋巴細胞活性、數(shù)量下降[12]。中樞神經(jīng)系統(tǒng)具有調(diào)節(jié)免疫功能的作用，而HIE常導致中樞神經(jīng)受損[13]。使其免疫調(diào)節(jié)功能下降，從而使T細胞活性降低;同時，當人體處于應激狀態(tài)下時，糖皮質(zhì)激素、兒茶酚胺等水平升高有關會抑制淋巴細胞的產(chǎn)生[14]。另外，有研究顯示，HIE可使NK細胞活性降低，由于NK細胞具有增強T淋巴細胞活性的作用，故NK細胞的活性下降會在一定程度上影響T淋巴細胞亞群的功能[15]。

綜上所述，淋巴細胞計數(shù)尤其CD4+與CD8+比值可用于HIE新生兒的診斷、病情危險度及恢復情況的評價和預后評估多個方面，具有重要的意義。

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（收稿日期：2019-05-13）