劉惠芬 王安皆 劉文光 張鳳林 周麗霞 華麗峰 唐文倩 李云芝

摘要：甲磺酸培氟沙星是喹諾酮類(lèi)的第3代抗菌藥物，對(duì)蘇云金芽孢桿菌和黑胸?cái)⊙挎叨捑腥疽鸬募倚Q細(xì)菌性敗血病，接菌后添食24 h有效防治質(zhì)量濃度最低為5.0 mg/L;先用蘇云金芽孢桿菌對(duì)5齡起蠶進(jìn)行皮下穿刺接菌，8 h內(nèi)添食藥物對(duì)細(xì)菌病有較好的防治效果;采用蘇云金芽孢桿菌對(duì)5齡起蠶進(jìn)行皮下穿刺，接菌后添食2、4、8、12 h的藥葉，最低防治質(zhì)量濃度分別為20.0、10.0、10.0、5.0 mg/L;5齡起蠶添食2、4 h的藥葉后接菌，有效防治質(zhì)量濃度為20.0 mg/L，8 h后喂食試驗(yàn)濃度內(nèi)藥物防治效果已不佳。采用質(zhì)量濃度為200.0、100.0 mg/L的甲磺酸培氟沙星和鹽酸環(huán)丙沙星溶液蘸桑葉飼蠶，其全繭量及繭層率與對(duì)照組比較未見(jiàn)顯著差異。

關(guān)鍵詞：抗菌藥物;甲磺酸培氟沙星;家蠶;細(xì)菌性敗血病;防治效果

中圖分類(lèi)號(hào)：S884.4 ??文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A ?文章編號(hào)：1002-1302（2020）23-0175-03

培氟沙星（Pefloxacin）由法國(guó)Rogeo Bollon公司開(kāi)發(fā)[1]，在臨床上主要采用甲磺酸鹽即甲磺酸培氟沙星，是喹諾酮類(lèi)的第3代新型抗菌藥物，對(duì)革蘭氏陽(yáng)性及陰性菌包括金黃色葡萄球菌、大腸桿菌及對(duì)青霉素、頭孢菌素、氨基糖苷類(lèi)耐藥菌株均有效，對(duì)復(fù)制期及靜止期菌株也有效[2]，培氟沙星具有專一性，作用于DNA促旋酶的A亞基，從而抑制DNA促旋酶的功能，使DNA復(fù)制受阻，影響DNA解鏈、切割和重新封閉等過(guò)程，導(dǎo)致DNA降解及細(xì)菌死亡[3]，是一種廣譜、高效、低毒的藥物，以吸收快、生物利用度好、組織藥物濃度高、體內(nèi)分布廣、維持時(shí)間長(zhǎng)且無(wú)耐藥性為特征[4]。培氟沙星對(duì)家蠶常見(jiàn)細(xì)菌病的防治效果未見(jiàn)報(bào)道，本研究以蠶業(yè)生產(chǎn)上常用的細(xì)菌病防治藥物鹽酸環(huán)丙沙星作為對(duì)照，通過(guò)生物試驗(yàn)研究其對(duì)家蠶細(xì)菌性敗血病的防治效果。

1 材料與方法

1.1 供試藥劑及家蠶和病原菌

1.1.1 藥劑 甲磺酸培氟沙星及鹽酸環(huán)丙沙星均為市售產(chǎn)品，由山東省蠶業(yè)研究所統(tǒng)一采購(gòu)。

1.1.2 家蠶品種 供試家蠶品種為菁松×皓月，由山東廣通蠶種集團(tuán)有限公司提供。蠶卵正常環(huán)境下催青孵化，幼蟲(chóng)在24～28 ℃、相對(duì)濕度約70%環(huán)境下桑葉飼育。

1.1.3 病原菌及其菌懸液 蘇云金芽孢桿菌（Bacillus thuringiensis）、黑胸?cái)⊙挎邨U菌（Bacillus bombysepticus），均由筆者所在研究室保存。將以上2種病原菌的營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物1支，用2 mL滅菌水洗下菌懸液備用。

1.1.4 試驗(yàn)時(shí)間與地點(diǎn) 試驗(yàn)于2019年春季在山東省蠶業(yè)研究所家蠶病理實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。

1.2 甲磺酸培氟沙星對(duì)家蠶細(xì)菌性敗血病的防治效果試驗(yàn)

1.2.1 添食不同質(zhì)量濃度藥葉對(duì)細(xì)菌性敗血病的防治效果試驗(yàn) 取蘇云金芽孢桿菌、黑胸?cái)⊙挎邨U菌，分別對(duì)5齡起蠶進(jìn)行皮下穿刺接菌，然后飼喂噴灑不同藥物及不同質(zhì)量濃度的桑葉，24 h調(diào)查。每區(qū)10頭家蠶，每個(gè)處理重復(fù)2區(qū)，在（25±1） ℃條件下飼養(yǎng)。

1.2.2 接種病原菌后不同時(shí)間添食藥葉對(duì)細(xì)菌性敗血病的防治效果試驗(yàn) 取蘇云金芽孢桿菌對(duì)5齡起蠶進(jìn)行皮下穿刺接菌后，飼喂正常桑葉至6、8、12 h，再飼喂噴灑不同質(zhì)量濃度（320.0、160.0、80.0、40.0、20.0、10.0、5.0 mg/L）藥物的藥葉24 h調(diào)查。每區(qū)10頭家蠶，每個(gè)處理重復(fù)2區(qū)，在（25±1） ℃條件下飼養(yǎng)。

1.2.3 接種病原菌后飼喂不同時(shí)間、不同質(zhì)量濃度藥葉對(duì)細(xì)菌性敗血病的防治效果試驗(yàn) 取蘇云金芽孢桿菌對(duì)5齡起蠶進(jìn)行皮下穿刺接菌后，飼喂不同質(zhì)量濃度（20.0、10.0、5.0、2.5 mg/L）藥葉2、4、8、12 h，再飼喂正常桑葉，24 h調(diào)查。每區(qū)10頭家蠶，每個(gè)處理重復(fù)2區(qū)，在（25±1） ℃條件下飼養(yǎng)。

1.2.4 幼蟲(chóng)飼喂不同時(shí)間、不同質(zhì)量濃度藥葉后接種病原菌的發(fā)病情況 5齡起蠶飼喂不同時(shí)間（2、4、8、12 h）、不同質(zhì)量濃度（20.0、10.0、5.0和 2.5 mg/L）藥葉后穿刺接菌蘇云金芽孢桿菌病原菌，然后飼喂正常桑葉，24 h調(diào)查。每區(qū)10頭家蠶，每個(gè)處理重復(fù)2區(qū)，在（25±1） ℃條件下飼養(yǎng)。

1.3 配制藥液的保存期試驗(yàn)

取蘇云金芽孢桿菌對(duì)5齡起蠶進(jìn)行皮下穿刺接菌，然后飼喂噴灑配制不同時(shí)間（0、48 h）藥液的桑葉，24 h調(diào)查。每區(qū)10頭家蠶，每個(gè)處理重復(fù)2區(qū)，在（25±1） ℃條件下飼養(yǎng)。

1.4 對(duì)繭質(zhì)影響試驗(yàn)

自4齡起蠶，采用質(zhì)量濃度為200.0、100.0 mg/L 甲磺酸培氟沙星和鹽酸環(huán)丙沙星溶液蘸桑葉飼蠶，4齡起每天飼喂藥葉8 h，其余時(shí)間飼喂普通桑葉至上蔟，空白對(duì)照組飼喂普通桑葉至上蔟，上蔟9 d采繭。每區(qū)60頭家蠶，每個(gè)處理重復(fù)3區(qū)，在（25±1） ℃條件下飼養(yǎng)。調(diào)查各區(qū)全繭量、繭層量及繭層率等。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)處理

數(shù)據(jù)采用SPSS 20.0進(jìn)行分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 甲磺酸培氟沙星對(duì)家蠶細(xì)菌性敗血病的防治效果

2.1.1 添食不同濃度藥葉的防治效果 取蘇云金芽孢桿菌、黑胸?cái)⊙謩e對(duì)5齡起蠶進(jìn)行皮下穿刺接菌，然后飼喂噴灑不同質(zhì)量濃度甲磺酸培氟沙星和鹽酸環(huán)丙沙星藥液的桑葉，24 h調(diào)查，由表1可知，添食噴灑甲磺酸培氟沙星和鹽酸環(huán)丙沙星藥液質(zhì)量濃度為5.0 mg/L桑葉，接種病原菌的家蠶發(fā)病率均為0，說(shuō)明上述2種藥物對(duì)蘇云金芽孢桿菌、黑胸?cái)⊙鸬募倚Q敗血病均有很好的防治效果。

2.1.2 接種病原菌后不同時(shí)間添食藥葉對(duì)細(xì)菌性敗血病的防治效果 取蘇云金芽孢桿菌對(duì)5齡起蠶進(jìn)行皮下穿刺接菌，先飼喂正常桑葉，經(jīng)不同時(shí)間后再飼喂噴灑不同質(zhì)量濃度藥物的桑葉，至24 h調(diào)查，由表2可知，接種6、8 h后開(kāi)始添食質(zhì)量濃度>20.0 mg/L（320.0～20.0 mg/L）甲磺酸培氟沙星藥液的桑葉對(duì)家蠶細(xì)菌性敗血病有較好的防治效果，接種后 12 h 開(kāi)始添食藥葉，防治效果較差。

2.1.3 接種病原菌后飼喂不同時(shí)間、不同質(zhì)量濃度藥葉對(duì)細(xì)菌性敗血病的防治效果 取蘇云金芽孢桿菌對(duì)5齡起蠶進(jìn)行皮下穿刺接菌，飼喂不同時(shí)間、不同質(zhì)量濃度的藥葉后再飼喂正常桑葉至24 h調(diào)查，表3結(jié)果顯示，接菌后添食2、4、8、12 h的藥葉，最低防治質(zhì)量濃度分別為20.0、10.0、10.0、5.0 mg/L。

2.1.4 添食不同時(shí)間、不同質(zhì)量濃度藥葉后接種病原菌的發(fā)病試驗(yàn) 5齡起蠶添食不同時(shí)間、不同質(zhì)量濃度藥葉后穿刺接種蘇云金芽孢桿菌病原菌，然后飼喂正常桑葉24 h調(diào)查，由表4可知，添食 20.0 mg/L 藥葉2 h和4 h區(qū)防治效果較好，添食 2 h 和4 h區(qū)效果優(yōu)于添食8 h和12 h區(qū)。

2.2 配制藥液的保存期試驗(yàn)

取蘇云金芽孢桿菌對(duì)5齡起蠶進(jìn)行皮下穿刺接菌，然后飼喂配制0 h和48 h的甲磺酸培氟沙星蘸藥桑葉，24 h調(diào)查，由表5可知，配制48 h 20.0、10.0 mg/L藥葉防病效果與配制后即刻使用的藥液相同，5.0、2.5 mg/L的防治效果略差。

2.3 對(duì)繭質(zhì)的影響

按照“1.4”節(jié)方法處理家蠶，4齡起每天飼喂藥葉 8 h，其余時(shí)間飼喂普通桑葉至上蔟，調(diào)查各區(qū)全繭量、繭層率等。由圖1、圖2結(jié)果可知，4～5齡飼喂200.0、100.0 mg/L的甲磺酸培氟沙星和鹽酸環(huán)丙沙星對(duì)家蠶全繭量和繭層率無(wú)顯著影響。

3 結(jié)論

本研究發(fā)現(xiàn)，對(duì)5齡起蠶進(jìn)行皮下穿刺接種蘇云金芽孢桿菌和黑胸?cái)⊙缓箫曃?4 h噴灑不同質(zhì)量濃度甲磺酸培氟沙星的藥葉，對(duì)2種病菌引起的家蠶細(xì)菌性敗血病有效防治最低質(zhì)量濃度為5.0 mg/L;先用蘇云金芽孢桿菌對(duì)5齡起蠶進(jìn)行皮下穿刺接菌，飼喂正常桑葉不同時(shí)間后，再飼喂噴灑不同質(zhì)量濃度藥物的桑葉至24 h調(diào)查，結(jié)果為接菌8 h內(nèi)添食甲磺酸培氟沙星，對(duì)細(xì)菌病有較好的防治效果;采用蘇云金芽孢桿菌對(duì)5齡起蠶進(jìn)行皮下穿刺，接菌后添食2、4、8、12 h藥葉，再飼喂正常桑葉至24 h調(diào)查，最低防治質(zhì)量濃度分別為20.0、10.0、10.0 、5.0 mg/L;5齡起蠶添食2、4 h藥葉再接菌，有效防治質(zhì)量濃度為20 mg/L，8 h后喂食試驗(yàn)質(zhì)量濃度內(nèi)藥物防治效果已不佳，這可能與家蠶生長(zhǎng)或代謝速度加快導(dǎo)致體內(nèi)藥物質(zhì)量濃度降低有關(guān)。

4～5齡家蠶，采用質(zhì)量濃度為200.0、100.0 mg/L甲磺酸培氟沙星和鹽酸環(huán)丙沙星溶液蘸桑葉飼喂，其全繭量及繭層率與對(duì)照組未見(jiàn)顯著差異。本研究初步證實(shí)，甲磺酸培氟沙星可以用于家蠶常見(jiàn)細(xì)菌病的防治。

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