王艷煒， 吳變穩(wěn)， 趙天資， 郭亞楠， 苗華為

(1.河北省中醫(yī)院 心內(nèi)科， 河北 石家莊 050011； 2.中國(guó)人民解放軍聯(lián)勤保障部隊(duì)第九八零醫(yī)院， 河北 石家莊 050000)

根據(jù)心血管病數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)的結(jié)果顯示，2016年我國(guó)高血壓患者已達(dá)2.7億人[1]，高血壓損傷的靶器官主要是心臟、腦及腎臟[2]，其中左心室肥厚(left ventricular hypertrophy,LVH)是高血壓的嚴(yán)重心臟損害之一[3]。LVH主要是由于主動(dòng)脈壓力增高，引起心肌細(xì)胞代償性增大，持續(xù)進(jìn)展出現(xiàn)間質(zhì)細(xì)胞增生、膠質(zhì)纖維合成增加，引起心室重構(gòu)[4-6]；在此基礎(chǔ)上，左心室順應(yīng)性進(jìn)行性下降，最終導(dǎo)致心功能不全[7]。目前已被證實(shí)，LVH是心血管事件的獨(dú)立危險(xiǎn)因素[8-10]，在臨床治療的過程中，治療高血壓已從單純的降低血壓、提高到注重逆轉(zhuǎn)LVH、減輕靶器官損害、減少心血管事件的發(fā)生[11]。心肌營(yíng)養(yǎng)素-1(CT-1)得名于其能在體外誘導(dǎo)心肌細(xì)胞肥大[12]，他主要存在于心臟、參與調(diào)節(jié)心臟生理過程，促進(jìn)心肌細(xì)胞增殖、生長(zhǎng)[13]。丹夏降壓顆粒是河北省中醫(yī)院苗華為教授的經(jīng)驗(yàn)方，在臨床治療高血壓的過程中已顯示出顯著的治療效果，本研究旨在觀察其對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)血壓及心室肥厚的影響，為該藥的臨床應(yīng)用提供進(jìn)一步的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1動(dòng)物及分組 16只SHR大鼠，12周齡，雄性，體質(zhì)量200～250 g；8只Wistar大鼠，12周齡，體質(zhì)量270～300 g；均購(gòu)于北京維通利華實(shí)驗(yàn)技術(shù)有限責(zé)任公司。將SHR大鼠隨機(jī)均分為模型組和中藥組，每組8只；8只Wistar大鼠作為對(duì)照組。中藥組大鼠給予以丹夏降壓顆粒溶液灌胃，給藥劑量按照《中藥藥理試驗(yàn)方法學(xué)》按人與大鼠的換算系數(shù)0.018計(jì)算，每日給藥1次；模型組與對(duì)照組大鼠給予同等體積的蒸餾水，均連續(xù)8周。

1.1.2主要試劑及儀器 丹夏降壓顆粒成分：半夏10 g、陳皮10 g、竹茹8 g、枳實(shí)10 g、丹參20 g、川芎12 g、桃仁10 g、紅花10 g，由河北省中醫(yī)院藥劑科提供。CT-1 和 β-actin 抗體(美國(guó) Abcam 公司) ，其余試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純，恒壓恒流電泳儀、凝膠成像系統(tǒng)(美國(guó)伯樂公司)。

1.2 方法

1.2.1大鼠血壓測(cè)定 分別于給藥前、給藥第4周及第8周時(shí)，大鼠在安靜、清醒的狀態(tài)下應(yīng)用無創(chuàng)尾動(dòng)脈儀測(cè)量各組大鼠的收縮壓及心率。每只大鼠測(cè)量3次，每次測(cè)量的時(shí)間間隔5 min，取平均值作為大鼠的收縮壓及心率。

1.2.2心臟指數(shù)(HWI)和左心室指數(shù)(LVMI)測(cè)定 第8周灌胃結(jié)束時(shí)，麻醉大鼠，開胸取出心臟，以4 ℃ PBS沖洗心臟，剪去血管及脂肪組織，用濾紙吸干，稱取全心質(zhì)量。然后剪去心房及右心室，稱取左心室質(zhì)量。HWI為全心質(zhì)量與體質(zhì)量的比值，LVMI為左心室質(zhì)量與體質(zhì)量的比值。

1.2.3CT-1蛋白含量測(cè)定 采用Western blot檢測(cè)大鼠心室肌細(xì)胞CT-1蛋白含量，將心室肌組織剪碎，加入細(xì)胞裂解液，搖勻置于冰上，勻漿30 min，4 ℃離心收集上清，應(yīng)用BCA檢測(cè)法測(cè)定蛋白質(zhì)含量，按比例配置分離膠及濃縮膠，取50 μg蛋白行SDS-PAGE電泳，再將蛋白轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜上，用含5%脫脂奶粉的封閉液于搖床上封閉1 h；按說明書稀釋CT-1一抗抗體，加入一抗抗體，4 ℃過夜；加入辣根過氧化物偶聯(lián)的二抗孵育1 h后洗膜，加入顯影液進(jìn)行曝光、掃描。以心肌細(xì)胞的β-肌動(dòng)蛋白(β-actin)作為內(nèi)參，觀察各組大鼠心室肌細(xì)胞CT-1蛋白的相對(duì)表達(dá)量。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 收縮壓和心率

與對(duì)照組比較，模型組和給藥組大鼠收縮壓顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；治療后中藥組大鼠收縮壓較模型組顯著降低，第8周時(shí)顯著低于第4周，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。中藥組給藥后收縮壓較給藥前降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。3組大鼠給藥前后的心率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1、表2。

表1 給藥前后各組大鼠收縮壓比較Tab.1 The changes of systolic blood

注：(1)與對(duì)照組比較，P<0.01；(2)與模型組比較，P<0.01；(3)與同組給藥第4周比較，P<0.01。

表2 治療前后各組大鼠心率比較Tab.2 The changes of heart rate in each

2.2 HWI及LVMI

給藥8周時(shí)，模型組和給藥組大鼠的HWI和LVMI均顯著高于對(duì)照組大鼠，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。中藥組大鼠HWI和LVMI較模型組顯著下降，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見表3。

表3 治療8周時(shí)各組大鼠HWI及LVMI比較Tab.3 The comparison of left ventricular

注：(1)與對(duì)照組比較，P<0.01；(2)與模型組比較，P<0.01。

2.3 CT-1蛋白含量

給藥8周時(shí)，大鼠心肌細(xì)胞CT-1蛋白含量比較，模型組(0.428±0.025)和給藥組(0.365±0.008)均顯著高于對(duì)照組大鼠(0.303±0.004)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=16.11，P<0.01)。中藥組大鼠心肌細(xì)胞CT-1蛋白含量較模型組顯著下降，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。

3 討論

LVH與高血壓密切相關(guān)，但降壓并不是逆轉(zhuǎn)心室肥厚的唯一要素。參與這一復(fù)雜的病理生理過程的因素很多，如神經(jīng)、體液、細(xì)胞因子等。CT-1作為IL-6 細(xì)胞因子家族的成員，是1995年P(guān)ennica等[12]發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞因子，得名于其能在體外誘導(dǎo)心肌細(xì)胞肥大，CT-1存在于骨骼肌、卵巢、睪丸等多種組織，主要存在于心臟[13]，主要由心臟的心肌細(xì)胞和非心肌細(xì)胞生成[14-15]，具有廣泛的生物學(xué)活性。CT-1參與調(diào)節(jié)心臟生理過程，促進(jìn)心肌細(xì)胞增殖、生長(zhǎng)。在高血壓、心肌梗塞、心力衰竭、心肌炎等多種病理情況下，CT-1引起心室肥厚，一方面它能誘導(dǎo)心室肥厚的發(fā)生，且不同于α腎上腺素受體激活引起的心肌肥厚，CT-1誘導(dǎo)的心肌肥厚主要是心肌細(xì)胞拉長(zhǎng)[16]。另一方面，CT-1通過刺激心肌成纖維細(xì)胞的增殖及膠原蛋白的合成，加速心肌纖維化，從而影響心室重構(gòu)[17-18]。目前發(fā)現(xiàn)CT-1影響LVH的最重要機(jī)制是CT-1通過Janus激酶(janus kinase，JAK)-信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄活化因子(signal transducer and activator of transcription，STAT)即JAK-STAT途徑引起心臟肥大，CT-1與其心肌細(xì)胞膜上的特異性跨膜受體即gp130/白血病抑制因子受體(LIFR)結(jié)合[19-20]，激活胞漿內(nèi)與Jak激酶家族成員Jakl、Jak2 及Tyk2相關(guān)的酪氨酸激酶，使酪氨酸激酶磷酸化[21]，最后激活信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3(STAT3)，形成二聚體，轉(zhuǎn)導(dǎo)胞內(nèi)信號(hào)。CT-1通過JAK-STAT3通路可激活血管緊張素原基因的啟動(dòng)子，上調(diào)腎素-血管緊張素系統(tǒng)，促使血管緊張素原mRNA 產(chǎn)生增多誘導(dǎo)心肌細(xì)胞肥大[22]。

中醫(yī)理論認(rèn)為，痰濁、瘀血是引起高血壓左室肥厚的重要病理因素高血壓引起LVH的機(jī)制是痰濁和瘀血[23]，痰濁、瘀血阻塞脈道，膠結(jié)血脈，心氣營(yíng)運(yùn)不暢，氣、血、痰膠結(jié)遂導(dǎo)致心肌肥厚[24-25]。鑒于此，丹夏降壓顆粒中的主要成分是半夏、陳皮、竹茹、枳實(shí)，功效即是燥濕、清熱、化痰，輔以丹參、川芎、桃仁、紅花等活血化瘀理氣藥，諸藥合用旨在通過清熱化痰，活血化瘀以達(dá)到降壓、逆轉(zhuǎn)心室肥厚的目的。本研究結(jié)果表明，中藥組給藥后收縮壓較給藥前降低(P<0.01)；給藥8周時(shí)，模型組和給藥組大鼠的HWI和LVMI均顯著高于對(duì)照組大鼠(P<0.01)；中藥組大鼠HWI和LVMI較模型組顯著下降(P<0.01)；大鼠心肌細(xì)胞CT-1蛋白含量比較，模型組(0.428±0.025)和給藥組(0.365±0.008)均顯著高于對(duì)照組大鼠(0.303±0.004)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=16.11，P<0.01)。中藥組大鼠心肌細(xì)胞CT-1蛋白含量較模型組顯著下降，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。

綜上所述，丹夏降壓顆粒降壓效果明確，但對(duì)于心率的影響不大，可以有效的降低HWI及LVMI，丹夏降壓顆粒不僅能改善心室肥厚，亦能在分子水平抑制CT-1表達(dá)。