(河北港口集團(tuán)有限公司港口醫(yī)院檢驗(yàn)科，河北 秦皇島 066000)

目前，尚無單一檢測指標(biāo)以預(yù)測妊娠高血壓(Gestational hypertension，GH)得到發(fā)生和發(fā)展，而高血壓是診斷GH的主要標(biāo)志[1]。GH患者主要表現(xiàn)為水腫、體重突增、視力模糊和血壓升高等，但有些GH患者表現(xiàn)為無癥狀，因此難以發(fā)現(xiàn)和診治，危及患者及其胎兒健康[2-3]。研究表明，肥胖、年齡及糖尿病病史均為GH的危險因素[4]。因此，本文將對GH患者體內(nèi)白細(xì)胞抗原和T淋巴細(xì)胞的變化及其對免疫反應(yīng)進(jìn)行分析，旨在為臨床診斷和治療GH提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年1月至次年7月于本院分娩的42例GH患者作為觀察組，納入標(biāo)準(zhǔn)：符合GH診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]，擇期進(jìn)行分娩者，入院前2周無服用任何藥物者，同意參與本研究；排除標(biāo)準(zhǔn)：患其他妊娠合并癥，免疫功能和/或血液系統(tǒng)障礙(疾病)者，嚴(yán)重其他臟器疾病者，腫瘤患者。參照觀察組方式，選取同期分娩的50例正?；颊咦鳛閷φ战M，兩組年齡、孕周、體重等一般資料差異不顯著(P>0.05)具有可比性，見表2。

1.2 樣品收集

血樣：于清晨(8∶30前)收取全部患者空腹靜脈血，移入抗凝管后靜置30 min，低溫離心分離血漿，獲取待測液。

組織樣：分娩后，在無菌狀態(tài)下取長寬高均為0.5 cm的胎盤絨毛組織塊5～10塊，用生理鹽水洗凈后摘取血管和膜組織，得到待測樣。

1.3 指標(biāo)檢測

1.3.1 RT-PCR檢測HLA mRNA 使用RT-PCR檢測滋養(yǎng)細(xì)胞中人類白細(xì)胞抗原基因座G(human leukocyte antigen-G，HLA-G)和人類白細(xì)胞抗原基因座C(human leukocyte antigen-C，HLA-C) mRNA表達(dá)。按照試劑盒(Trizol RNA抽提試劑盒，R&D Systems，美國)步驟抽提組織樣總RNA，以NCBI的GenBank中HLA-G、HLA-C和β-肌動蛋白(內(nèi)參)基因序列為參照合成引物(見表1)，cDNA以RNA鏈為模板逆轉(zhuǎn)錄獲得。用20 μL體系進(jìn)行RT-PCR，其中cDNA模板2 μL、EX Taq酶0.2 μL、上下游引物各0.5 μL、dNTP 0.4 μL、10×buffer 2 μL，加無菌水補(bǔ)齊至20 μL。以40個循環(huán)進(jìn)行PCR，反應(yīng)完成后，應(yīng)用軟件計算相應(yīng)熒光反應(yīng)曲線，結(jié)果以循環(huán)數(shù)閾值(Ct值)表示[6]。

表1 HLA-G、HLA-C和β-肌動蛋白引物

1.3.2 酶聯(lián)免疫檢測 使用ELISA(吸附)試劑盒(R&D Systems，美國)檢測患者血清中白細(xì)胞抗原水平。

1.3.3 流式細(xì)胞儀術(shù)檢測 使用流式細(xì)胞儀(CytoFLEX FCM，Beckman，美國)檢測T淋巴細(xì)胞CD3+、CD4+和CD8+T淋巴細(xì)胞百分比。

1.4 數(shù)據(jù)處理

用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，計量數(shù)據(jù)使用(±s)表示，組間兩兩比較采用SNK法或t檢驗(yàn)；計數(shù)資料使用百分?jǐn)?shù)(%)表示，用χ2檢驗(yàn)；以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 兩組患者臨床資料

兩組患者年齡、孕周和體重?zé)o顯著差異(P>0.05)，舒張壓和尿蛋白差異明顯(P<0.05)，GH組存在血壓增高，尿蛋白體征。見表2。

表2 兩組患者一般資料

2.2 兩組白細(xì)胞抗原mRNA表達(dá)對比

與對照組相比，觀察組HLA-G和HLA-C mRNA表達(dá)量明顯降低(P<0.05)，說明GH患者免疫耐受降低(見表3)。

表3 兩組白細(xì)胞抗原mRNA表達(dá)對比

2.3 兩組血清白細(xì)胞抗原濃度對比

與對照組相比，觀察組血清組織白細(xì)胞抗原sHLA-G和sHLA-C濃度明顯降低,濃度具體，說明觀察組免疫耐受降低(P<0.05)(見表4)。

表4 兩組血清白細(xì)胞抗原濃度對比

2.4 兩組T淋巴細(xì)胞水平對比

與對照組比較，觀察組T淋巴細(xì)胞亞群CD3+、CD4+和CD8+水平均明顯增高，說明 GH患者機(jī)體內(nèi)產(chǎn)生了不必要的免疫應(yīng)答，見表4。

表5 兩組T淋巴細(xì)胞水平比較

3 討 論

GH主要表現(xiàn)為母體和胎兒綜合癥，包括母體高血壓、蛋白尿并伴體內(nèi)臟器損傷；胎兒會因此生長受限，嚴(yán)重者會因?qū)m內(nèi)窘迫而引發(fā)早產(chǎn)，甚至死亡。目前認(rèn)為，這種疾病是遺傳與免疫相互關(guān)聯(lián)和作用的結(jié)果，且互為因果[7-8]。在妊娠期間，胚胎作為母體的異己，理應(yīng)引起母體免疫反應(yīng)；但母體免疫反應(yīng)又易導(dǎo)致流產(chǎn)，因此在妊娠期間母體存在一定程度的免疫耐受[9]。本研究對比正常妊娠患者和GH妊娠患者間白細(xì)胞抗原水平發(fā)現(xiàn)，GH患者白細(xì)胞抗原HLA-G和HLA-C不論是mRNA表達(dá)水平還是血清水平都明顯低于正常妊娠組。HLA是一種基因復(fù)合物，主要編碼人類組織相溶復(fù)合物蛋白以負(fù)責(zé)細(xì)胞表面蛋白對體內(nèi)免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)[10]。其中HLA-A和HLA-C都是MHC I類分子，它們綁定來自病原體的抗原，將其暴露于細(xì)胞表面呈遞給T細(xì)胞識別[11]。HLAs還能綁定自然殺傷(NK)細(xì)胞使其失效，故當(dāng)體內(nèi)HLAs水平下降時，在病毒感染或異常細(xì)胞介導(dǎo)下，促發(fā)NK細(xì)胞進(jìn)行程序化細(xì)胞死亡[12]。此外，妊娠其前列腺素分泌也能影響淋巴細(xì)胞白細(xì)胞介素-2產(chǎn)生，達(dá)到抑制自然殺傷(NK)細(xì)胞的目的[13]。故HLAs水平降低可能導(dǎo)致免疫耐受降低，從而產(chǎn)生不必要的免疫應(yīng)答。

另一方面，本研究發(fā)現(xiàn)觀察組患者T淋巴細(xì)胞亞群CD3+、CD4+和CD8+水平明顯更高。這一結(jié)果驗(yàn)證了我們上述推測，機(jī)體內(nèi)產(chǎn)生了不必要的免疫應(yīng)答。在功能正常的免疫系統(tǒng)中，只允許不結(jié)合自身肽的T細(xì)胞離開胸腺，因此，T細(xì)胞與外源或異常肽結(jié)合并啟動細(xì)胞凋亡或程序性細(xì)胞死亡，完成對病原體的防御[14]。而GH患者HLAs水平下降，T淋巴細(xì)胞上受體無法與HLAs及其呈遞的肽結(jié)合并相互作用，致使T淋巴細(xì)胞異常活躍，因此高T淋巴細(xì)胞水平表征了機(jī)體內(nèi)高免疫反應(yīng)[15]。換而言之，高T淋巴細(xì)胞水平反應(yīng)了GH患者機(jī)體內(nèi)產(chǎn)生了不必要的免疫應(yīng)答。

總之，妊娠高血壓患者體內(nèi)白細(xì)胞抗原降低，T淋巴細(xì)胞增高，可能是導(dǎo)致妊娠高血壓患者免疫耐受降低的原因。