容文婷，李遠球，潘發(fā)光，曾陽金，黃林生，易綺斐

(1.中國科學院華南植物園，廣東 廣州 510520； 2.仲愷農業(yè)工程學院，廣東 廣州 510225；3.廣東石門臺國家級自然保護區(qū)管理局，廣東 英德 513039)

廣東含笑(Micheliaguangdongensis)隸屬于木蘭科含笑屬，僅分布于廣東清遠英德市，是近年來新發(fā)現的廣東特有樹種，生于海拔1250～1400 m的中亞熱帶山地常綠落葉闊葉混交林中及山頂灌叢中[1]。種群規(guī)模非常小，野外種群數量相當稀少，處于十分稀有的瀕危狀態(tài)，受到相關專家的關注，極力推薦為極小種群保護，目前，《中國生物多樣性紅色名錄——高等植物卷》已將廣東含笑列為瀕危物種[2]。廣東含笑的嫩枝、老葉底部及葉柄、花蕾密披紅褐色柔毛，柔毛呈繡色，光澤閃亮，樹形美觀，花開如笑，花香襲人，具有很高的觀賞價值，即可布置庭院，又宜室內盆栽，是一類具有巨大潛在應用前景的珍貴園林植物[3-5]。

廣東含笑在自然狀態(tài)下繁殖力差是其面臨瀕危的主要原因之一[6]。目前仍處于野生未被廣泛開發(fā)階段，在園林中未進行廣泛應用[1]。該種的遷地保護狀況不理想，遷地栽培的植株只有嫁接苗可存活，而對其嫁接繁殖技術的研究尚少。嫁接是把同一植株或不同植株的某個部位進行相互連接，使其能正常生長發(fā)育，重新形成一個完整植株的繁殖方式[7]，可保持植物優(yōu)良遺傳特性，又能提早開花結實，達到縮短選育周期的目的，特別對結實率低的樹種更具有現實意義[8]，嫁接也是挽救珍稀瀕危植物的方法之一[9]。本試驗用黃蘭作為砧木對不同海拔地點采集的廣東含笑接穗進行嫁接，探索最優(yōu)良的接穗和最適嫁接時間，為廣東含笑嫁接育苗和擴大生產，以及為珍稀植物的遷地保護提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗地概況

試驗地位于廣東省石門臺自然保護區(qū)(113°01′11″—113°46′22″E、24°17′49″—24°31′02″N)，英德市的北部，面積達822.60 km2，是廣東省面積最大、植被保存較完好的森林生態(tài)系統(tǒng)自然保護區(qū)。地處南亞熱帶與中亞熱帶過渡的地帶，具有光照充足、溫暖濕潤、雨量充沛的氣候特點，屬亞熱帶季風氣候[6]。

1.2 試驗材料

接穗采集于廣東省石門臺自然保護區(qū)內的前進、上天堂、金子山、木籠頂和船底頂5個不同的分布點，2016年和2017年接穗采集的分布點的海拔高度見表1。選擇節(jié)間較長、芽飽滿的當年生枝條，從葉柄處剪掉葉片，用濕紙巾、濕苔蘚混合保濕，外面用濕毛巾包裹，裝進密封袋。為防止途中穗條之間、背部與背包之間壓實起熱，應翻動多次。采集的接穗宜當天嫁接，當天嫁接不完的宜用濕紙巾、濕苔蘚或濕毛巾包裹后放置冰箱1～3 ℃保鮮，保持穗條的水分，防止干枯，便利嫁接。接穗個數分為：1個，2個，3～5個3個組別。

1.3 嫁接方法

采用斷砧切接和髓心形成層對接法[10-13]。主要分為砧木修剪處理、接穗切削、砧木切削、形成層對齊嫁接、捆綁和套袋等6個步驟：先在需嫁接的砧木0.5～1 m的高度進行修剪處理；選取芽飽滿的當年生接穗枝條(頂芽除外)，在芽的反面切削一刀，深達髓心，再反切一刀形成楔形；在光滑的砧木嫁接部位豎著切一刀，刀口保持平滑，寬度與接穗相當或稍大，深度剛好到木質部，保留樹皮一小段后切斷；接穗與砧木形成層對齊嫁接，在嫁接過程中，要注意保護接穗的頂芽，使其不受傷害；捆綁，用塑料條從下切口以下約0.5 cm處開始進行螺旋式綁扎；套薄膜袋保濕，減弱蒸騰作用，減少水分散失。

表1 各接穗來源的海拔高度

*：QG為前進，SG為上天堂，JG為金子山，MG為木籠頂，CG為船底頂；編號使用1～42。下同。

1.4 嫁接時間

嫁接時間主要分為3個時間段，詳見表2。

1.5 嫁接后的苗木管理

嫁接15 d后拆薄膜袋觀察，凡接芽芽體新鮮的即已成活，若芽片萎縮即未成活，接芽萌發(fā)后要及時除掉砧木上的萌芽和其上的枝條；發(fā)現未成活的植株進行適當補接。2015年和2016年的嫁接苗未進行砧木側芽的去除，2017年對嫁接苗進行砧木側芽的去除。

表2 2015—2017年的嫁接時間

1.6 數據統(tǒng)計

數據利用Microsoft Office Excel 2007軟件進行統(tǒng)計計算，繪制圖表；用SPSS 19.0軟件進行單因素方差分析。

2 結果與分析

2.1 嫁接方法對嫁接成活率的影響

在砧木條件相同的情況下，分別用2種嫁接方法對廣東含笑進行嫁接。由表3看出，2015年進行了2種嫁接方法，發(fā)現髓心形成層對接法嫁接的成活率明顯高于斷砧切接嫁接的成活率，說明斷砧切接的嫁接方法不適用于廣東含笑。因此，2016—2017年均采用髓心形成層對接法對苗木進行嫁接。

表3 不同嫁接方法對廣東含笑嫁接成活率的影響

*：株數成活率=成活株數/嫁接株數×100%；接穗成活率=成活接穗數/接穗個數×100%。

2.2 接穗來源及接穗個數對嫁接成活率的影響

圖1 各接穗來源嫁接成活率

對2015—2017年不同采集地點的接穗進行嫁接成活率統(tǒng)計，發(fā)現不同接穗來源的嫁接成活率存在差異(圖1)。從嫁接株數成活率來看，源于上天堂的接穗嫁接株數成活率最高，達57.35%；其次株數成活率較高的是源于木籠頂的接穗，達43.36%；源于前進和船底頂的接穗嫁接株數成活率差異不大，分別為37.76%和35.60%；而源于金子山的接穗嫁接株數成活率最低，僅為23.02%。從接穗成活率來看，成活率最高的仍是源于上天堂的接穗，達55.59%；木籠頂和船底頂的接穗嫁接成活率差異不大，分別為35.95%和35.46%；而來源于前進的接穗成活率最低，僅為19.96%。

對2016年與2017年采集于不同海拔高度的接穗進行嫁接成活率比較，發(fā)現2016年的嫁接成活率受到接穗來源海拔高度的影響，隨著接穗來源海拔高度的上升，不論是嫁接株數成活率還是接穗成活率均有明顯下降的趨勢。其中源于前進的接穗QG34(海拔929 m)成活率最高，株數成活率和接穗成活率分別達76.92%和72.22%；而金子山的接穗JG系列(海拔1132～1146 m)的嫁接成活率均處于極低的水平；木籠頂和船底頂的接穗MG7-CG9系列的嫁接成活率呈波動性下降趨勢，成活率0.00%～45.71%(圖2)。年平均株數成活率和接穗成活率為16.87%和14.84%。

2017年的嫁接成活率與接穗來源的海拔高度并沒有十分明顯的線性關系，隨著接穗來源的海拔高度的上升，嫁接成活率呈波動性變化。其中源于上天堂的接穗SG4(海拔1035 m)的成活率最高，株數成活率和接穗成活率分別達92.11%和81.97%；株數成活率最低的接穗來源是船底頂的CG1(海拔1543 m)，只有22.22%，接穗成活率最低的接穗來源是前進的QG5(海拔978 m)，只有23.08%(圖3)。年平均株數成活率和接穗成活率為65.08%和56.84%，2017年廣東含笑的嫁接成活率明顯高于2016年。

看到這個媽媽的問題，這些舊事一下子浮現在腦海。在“閱讀”這件事兒上，我們中國是真正的發(fā)展中國家。我小時候，絕大多數家長對孩子的關注還停留在吃飽穿暖上；比我小一輪的80后，大人們的關注或許已經轉移到了學習上，但是我認為也是停留在“成績”上。我小時候的中文閱讀，完全沒有閱讀內容來匹配我的閱讀興趣，所以才會有爬墻上看報紙的經歷；80后的情況大為改觀，父母手頭寬裕，可以有錢來買一些課外書，不過大多數父母更愿意掏錢給孩子買題庫吧。

采集點從左到右海拔高度逐漸上升，下同。圖2 2016年不同接穗來源的廣東含笑的嫁接成活率

圖3 2017年不同接穗來源的廣東含笑嫁接成活率

不同接穗個數對廣東含笑的嫁接成活率亦有影響，由表4可知，1個接穗個數與2個接穗個數的株數成活率差異不顯著，2個接穗個數與3～5個接穗個數的株數成活率差異不顯著，而1個接穗個數與3～5個接穗個數的株數成活率差異顯著，3～5個接穗個數的株數成活率顯著高于1個接穗個數的株數成活率(P<0.05)；但接穗個數對接穗成活率的影響不大，3組的接穗成活率差異不顯著。

表4 不同接穗個數的廣東含笑嫁接成活率 %

*：不同字母為不同接穗個數成活率的差異顯著(P<0.05)，相同字母為差異不顯著(P>0.05)，下同。

2.3 砧木苗齡、砧木粗度等對嫁接成活率的影響

3 a的嫁接試驗中利用的砧木為1～3年生的黃蘭，由表5可看出，嫁接株數成活率及接穗成活率均為3年生的砧木>1年生的砧木>2年生的砧木。說明以3年生的黃蘭作為砧木最適合廣東含笑的嫁接。而1年生的砧木嫁接成活率高于2年生的原因可能是1年生砧木嫁接的數量比2年生砧木嫁接數量少，而且1年生砧木嫁接時采用的接穗多數來源于上天堂(SG4)，接穗質量更優(yōu)更易存活，導致1年生的砧木嫁接的成活率明顯高于2年生的砧木。

2.4 嫁接時間對嫁接成活率的影響

在2015—2017年期間，以2016年12月下旬(12月29—30日)嫁接的株數成活率和接穗成活率最高，分別為79.14%和68.84%；其次是2017年1月下旬—2月上旬(1月24日—2月4日)株數成活率為65.06%，接穗成活率為56.96%；嫁接成活率最低的時間是2016年3月上旬(3月5—10日)，株數成活率和接穗成活率只有6.50%和5.63%。其余時間的嫁接成活率在15.19%～48.05%之間(表6)。

冬季(2016年12月下旬、2017年1月中旬、2017年1月下旬—2月上旬)嫁接的平均株數成活率和平均接穗成活率分別為64.08%和53.87%，顯著高于春季嫁接(P<0.05)。這說明不同嫁接時間(季節(jié))對嫁接成活率有顯著影響。冬季(12月下旬、1月)比春季(2、3月)更適合廣東含笑嫁接(表7)。

表5 砧木年齡、粗度及接口高度對廣東含笑嫁接成活率的影響

表6 廣東含笑不同時間段的嫁接數目及成活率

2.5 除去蘗芽對嫁接成活率的影響

本試驗中2017年嫁接后對苗木進行砧木側芽的去除，而2015年和2016年沒有對苗木進行砧木側芽的去除。從整體的嫁接成活率比較中可看出(表6)，2017年(冬季)的嫁接株數成活率和接穗成活率顯著高于2015年(春季Ⅰ)和2016年(春季Ⅱ)。由此證明，嫁接后對砧木側芽適當的去除能明顯提高嫁接苗的成活率。

表7 廣東含笑2015—2017年的嫁接成活率 %

3 結論與討論

3.1 結論

通過3 a的嫁接試驗發(fā)現，髓心形成層對接的嫁接方法適用于廣東含笑的嫁接。源于上天堂(海拔1035 m)的接穗SG4的嫁接成活率最高，株數成活率和接穗成活率分別達92.11%和81.97%，說明上天堂的接穗優(yōu)于其余地點分布的接穗。不同接穗個數對嫁接株數成活率有影響，總體表現為接穗個數越多株數成活率越高，3～5個接穗的株數成活率顯著高于1個接穗的株數成活率。砧木選用3年生的黃蘭，粗度為2～4 cm，接口高度為1 m的廣東含笑嫁接成活率及接穗成活率最高。廣東含笑的最佳嫁接時間為12月底—翌年1月，株數成活率、接穗成活率分別達79.14%、68.84%。嫁接后除去蘗芽能顯著提高嫁接成活率。

3.2 討論

不同接穗來源對廣東含笑嫁接成活率有不同影響。許多研究表明[14-16]，嫁接成活率不僅受到溫度、光照、水分、病原微生物、嫁接方法和技術等外界因素的影響，還與嫁接的親和性、接穗的生活力及其生物學特性等內在因素有關。從本試驗結果看，不同來源的接穗嫁接成活率有差異，但其差異與接穗來源的海拔高度不呈明顯的線性關系。成活率最高的接穗采集于上天堂，而其它海拔高度(高于上天堂的金子山、木籠頂、船底頂或低于其海拔高度的前進)的接穗嫁接成活率均較低。廣東含笑葉片背面顏色特征存在3種不同類型，葉片背面深紅色且多絨毛、葉片背面紅色較淡且絨毛較少(過渡型)以及葉片背面完全呈綠色且無絨毛。試驗發(fā)現，采集于上天堂的接穗較多為過渡型接穗，以此表明，不同來源的接穗可能因其個體差異而導致接穗成活率不同，過渡型的接穗優(yōu)于其它種類的接穗，因此嫁接成活率更高。

有關茶樹嫁接接穗數量對茶樹開花的研究發(fā)現2～4個接穗可以使嫁接苗開花數量達到最高[17]，與此類同，本試驗發(fā)現接穗個數亦是影響廣東含笑嫁接成活率的因素之一，一般來說每株嫁接3～5個的接穗個數為宜，這一結果與黃明東等[18]廣寧紅山茶嫁接繁殖技術的研究相似。在實際嫁接繁殖生產中應綜合具體情況給予考慮，選擇最優(yōu)的接穗來源以及接穗個數。

本研究發(fā)現1～2年生和地徑1～2 cm的砧木嫁接成活率低于3年生和地徑2～4 cm的砧木嫁接成活率，即年齡大的砧木嫁接成活率最高。與此相似，此前有研究表明，砧木品種相同時，年齡越大的砧木對嫁接苗的生長越有利[19]。但本試驗設計上存在一定漏洞，不同年齡的砧木的嫁接數量差異較大，所用的接穗來源亦不同，所以導致結果出現1年生的砧木嫁接成活率高于2年生砧木的情況，同時嫁接成活率也與砧木的質量有關，當砧木處在生長旺盛期可能更有利于嫁接成活。

嫁接時間(季節(jié))是決定嫁接成活率的重要因素。大量研究表明，不同的植物最佳嫁接時間不同，如樟子松嫩枝嫁接的最佳時間是6月上中旬[11]，適合野扁桃的嫁接時間為春季和初秋(3月和8月中旬)[20]，黃連木的最適嫁接育苗時間在4月上旬[21]，櫻花的最佳嫁接時間于秋季(10月上旬—11月底)[22]。本試驗發(fā)現嫁接時間是影響廣東含笑成活率最關鍵的因素之一，廣東含笑的最佳嫁接時間為12月底—翌年1月，這可能與廣東含笑原始的生態(tài)習性相關，廣東含笑原產于較高海拔的冷涼高山環(huán)境。姜春寧等[23]的研究表明廣東含笑嫁接苗具有一定的抗寒能力，12月底—翌年1月正是當地低溫季節(jié)，嫁接體形成層的活動和愈傷組織的形成會受到溫度的影響[24]，廣東含笑需要萌發(fā)側芽，此過程相對其它樹種較長，冬接后，正好有一個冬季休眠期，待2—3月份時，正好是廣東含笑開始復蘇萌動的時期，溫暖潮濕的氣候條件有利于嫁接成活，因此，廣東含笑可以采用冬、春嫁接，以冬季嫁接最好，從節(jié)令上說是在冬至前后30 d。

許多研究發(fā)現[25-27]，苗木管理也是影響嫁接成活率的重要因素。本研究中2015年和2016年沒有對嫁接后的苗木進行砧木側芽的去除，砧木側芽的生長抑制了嫁接芽的生長，從而導致嫁接成活率較低，2017年因去除了砧木側芽，成活率有了顯著性的提高，這一點與山杏嫁接繁殖技術研究結果一致[28]。

綜上所述，影響珍稀植物廣東含笑嫁接成活率的因素是多方面的，除本試驗探討的因素外，還有嫁接溫度、濕度以及嫁接人員的技術等方面的因素都會對嫁接成活率造成一定影響，有待后續(xù)深入研究。