張 潔 陳旭日 吳 敏

深圳市寶安區(qū)婦幼保健院產(chǎn)科，廣東深圳 518000

羊膜腔感染綜合征是近年來(lái)臨床上影響產(chǎn)婦以及新生兒的一種重大的感染性疾病，經(jīng)過(guò)研究分析發(fā)現(xiàn)胎膜早破是引起這種疾病的最主要原因，而胎膜早破又與微生物感染有關(guān)。解脲支原體、衣原體等是常見(jiàn)的引起感染的致病因子，妊娠期產(chǎn)婦由于體內(nèi)生理環(huán)境的變化更有利于解脲支原體生長(zhǎng)，引發(fā)解脲支原體感染[1]。在本次研究中重點(diǎn)分析胎膜早破與解脲支原體感染及羊膜MMP-9 表達(dá)的關(guān) 聯(lián)性，現(xiàn)將研究流程以及結(jié)果分析報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

隨機(jī)選取2017 年1 月～2018 年12 月我院收治的胎膜早破患者168 例作為研究對(duì)象，即實(shí)驗(yàn)組，另選隨機(jī)選取168 例正常產(chǎn)婦作為對(duì)照組，兩組產(chǎn)婦均符合診斷標(biāo)準(zhǔn)；年齡21 ～40 歲；孕周為28 ～40 周；所有對(duì)象均為單胎；排除陰道其他微生物感染（如衣原體，細(xì)菌性陰道病，外陰陰道假絲酵母菌病，淋病奈瑟菌、滴蟲(chóng)，B 族鏈球菌等），排除接受過(guò)抗生素等藥物治療的患者；排除有外科或其他合并癥的患者。實(shí)驗(yàn)組168 例患者中，患者年齡21 ～39 歲，平均（26.8±4.2）歲，平均孕周（34.5±3.1）周，初產(chǎn)婦130 例，經(jīng)產(chǎn)婦38 例；對(duì)照組168 例患者中，患者年齡22 ～40 歲，平均（27.1±3.7）歲，平均孕周（34.2±3.3）周，初產(chǎn)婦120 例，經(jīng)產(chǎn)婦48 例；兩組患者一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05）。本次研究經(jīng)過(guò)醫(yī)院委員會(huì)批準(zhǔn)同意，兩組產(chǎn)婦本著自愿的原則選取，經(jīng)過(guò)本人以及監(jiān)護(hù)人簽字同意。

1.2 方法

在產(chǎn)婦入院后取產(chǎn)婦陰道分泌物進(jìn)行檢查，排除衣原體、滴蟲(chóng)、外陰陰道假絲酵母菌病、細(xì)菌性陰道病，淋病奈瑟菌、B 族鏈球菌等感染，然后采集標(biāo)本，檢測(cè)解脲支原體感染以及MMP-9 表達(dá)情況，具體內(nèi)容包括以下幾個(gè)方面。

1.2.1 儀器試劑 在本次研究中需要采集各種標(biāo)本并進(jìn)行檢查，所需的試劑以及儀器包括PCR 擴(kuò)增儀、PCR 試劑盒（購(gòu)于上海生物生工有限公司）、MMP-9 基因試劑盒（購(gòu)于福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司）、一次性使用微生物試子（廣州陽(yáng)普醫(yī)療科技股份有限公司）以及生理鹽水、載玻片等。

1.2.2 標(biāo)本采集 （1）采集患者分泌物，在患者入院以后采集患者陰道分泌物，首先需要對(duì)外陰進(jìn)行消毒，然后使用一次性窺陰器暴露患者宮頸，收集患者陰道穹隆分泌物滴在有生理鹽水的載玻片上，制作涂片并送實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)，用以排除衣原體等其他感染；用無(wú)菌的棉球蘸取生理鹽水將宮頸外的多余分泌物擦去，然后使用無(wú)菌棉簽插入患者宮頸內(nèi)停滯5s，然后旋轉(zhuǎn)采取宮頸內(nèi)分泌物，旋轉(zhuǎn)取出后放入無(wú)菌試管內(nèi)送檢，用以檢測(cè)解脲支原體感染[2]。（2）采集羊膜，羊膜收集在產(chǎn)婦剖宮產(chǎn)后，剖宮產(chǎn)時(shí)胎盤(pán)娩出后，由護(hù)理人員立即剪取產(chǎn)婦切口處的胎膜一塊，大小約為2cm2，在生理鹽水中沖洗三次，將附著在上面的液體等清洗干凈，然后經(jīng)甲醛固定、石蠟包埋、切片，然后檢測(cè)[3]。（3）MMP-9 表達(dá)檢測(cè)，實(shí)驗(yàn)人員觀察制作好的切片，需要對(duì)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的切片進(jìn)行盲測(cè)，并由一位以上實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)行觀察，排除主觀干擾；在顯微鏡下找到觀察區(qū)域，然后放大至100 倍，每張切片隨機(jī)選擇5 個(gè)觀察區(qū)域，根據(jù)染色的面積評(píng)估陽(yáng)性反應(yīng)強(qiáng)度；細(xì)胞強(qiáng)度以黃色細(xì)胞計(jì)數(shù)，按照顏色深淺積分；實(shí)驗(yàn)中采用PBS 緩沖液作為陰性對(duì)照、采用乳腺癌組織作為陽(yáng)性對(duì)照。（4）PCR 擴(kuò)增，取樣品各2μL，分別加入單管單人份UU、CT 反應(yīng)管，充分混勻后放入PCR 儀，將反應(yīng)程序設(shè)置為93℃、2min；93℃、45s，55℃、1min，然后循環(huán)10 次；然后再將程序設(shè)置為93℃、30s，55℃、45s，循環(huán)30 次，然后經(jīng)過(guò)記錄分析儀計(jì)算分析[4-5]。

1.3 觀察指標(biāo)及評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

（1）胎膜早破診斷標(biāo)準(zhǔn)：①孕婦主訴自覺(jué)陰道流液或外陰濕潤(rùn)等；②窺器檢查：見(jiàn)液體自陰道口內(nèi)流出或后穹窿有液池形成；③超聲檢查：羊水量叫破膜前較少；④陰道分泌物在酸堿試紙測(cè)定顯示pH ＞7；⑤將陰道分泌物涂片烘干后，經(jīng)鏡檢觀察到羊齒狀結(jié)晶；⑥胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白-1檢查顯示陽(yáng)性。（2）MMP-9 積分標(biāo)準(zhǔn)，按照細(xì)胞顏色積分，主要標(biāo)準(zhǔn)是：無(wú)色0 分、淡黃色1 分、棕黃色2 分、棕褐色3 分[6]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS20.0 對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以（）表示，采用t 檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)。當(dāng)P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組產(chǎn)婦UU感染以及MMP-9表達(dá)情況比較

實(shí)驗(yàn)組患者感染率以及MMP-9 積分顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 兩組產(chǎn)婦UU感染以及MMP-9表達(dá)情況比較

2.2 兩組產(chǎn)婦妊娠結(jié)局以及新生兒并發(fā)癥比較

實(shí)驗(yàn)組產(chǎn)婦妊娠結(jié)局發(fā)生率顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.05）。實(shí)驗(yàn)組新生兒死亡率與對(duì)照組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P ＞0.05），其余實(shí)驗(yàn)組新生兒并發(fā)癥發(fā)生率顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.05）。見(jiàn)表2。

3 討論

胎膜早破是一種影響產(chǎn)婦以及新生兒的一種常見(jiàn)疾病，會(huì)誘發(fā)早產(chǎn)，增加產(chǎn)婦和新生兒感染及其并發(fā)癥的發(fā)生，在臨床上可以通過(guò)引導(dǎo)分泌物涂片、陰道窺陰器檢查、PH 試紙、胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白-1 等檢查，產(chǎn)前及時(shí)診斷是發(fā)現(xiàn)疾病、治療疾病的有效手段。

表2 兩組產(chǎn)婦妊娠結(jié)局以及新生兒并發(fā)癥比較 [n（%）]

3.1 解脲支原體感染與胎膜早破的關(guān)系

解脲支原體是一種比細(xì)菌小、比病毒大的最小的原核生物，主要存在于人體泌尿系統(tǒng)中，當(dāng)患者機(jī)體免疫能力下降時(shí)，解脲支原體能夠引發(fā)陰道等生殖器感染，造成產(chǎn)婦流產(chǎn)、胎兒發(fā)育遲緩等嚴(yán)重不良后果。而與其發(fā)揮這種病毒性作用有關(guān)的是其含有的一種脲酶，這種脲酶能夠分解患者體內(nèi)的尿素，造成患者纖毛損傷、細(xì)胞壞死，細(xì)胞無(wú)法進(jìn)行正常交流；這種脲酶能夠剪切患者體內(nèi)的IgA，并附著在患者細(xì)胞膜上，進(jìn)而產(chǎn)生病變；這種脲酶能夠分解胎膜的花生四希酸，產(chǎn)生前列腺素，誘發(fā)宮縮，進(jìn)而引發(fā)、加重胎膜早破、早產(chǎn)等不良情況的發(fā)生。解脲支原體主要通過(guò)直接性接觸感染，污染的衣物等也會(huì)間接引起感染，在產(chǎn)婦體內(nèi)主要通過(guò)胎盤(pán)擴(kuò)散到子宮，從而對(duì)胎兒造成影響，導(dǎo)致流產(chǎn)、早產(chǎn)等不良情況，在臨床上除了對(duì)妊娠期產(chǎn)婦、胎兒有影響外還會(huì)引起非妊娠期女性婦科疾病、宮頸炎子宮內(nèi)膜炎等，同時(shí)對(duì)于男性不育也有一定的影響，因此在臨床生殖檢查中應(yīng)該得到重視[7-8]。

在本研究中胎膜早破的實(shí)驗(yàn)組解脲支原體感染的發(fā)生率為41.07%，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于對(duì)照組（6.54%），并且實(shí)驗(yàn)組UU 對(duì)數(shù)值定量也遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于對(duì)照組，由此可以發(fā)現(xiàn)，解脲支原體感染是引發(fā)胎膜早破的重要原因。

3.2 MMP-9表達(dá)與胎膜早破的關(guān)系

MMP-9，即基質(zhì)金屬蛋白酶，這種酶主要通過(guò)降解作用維持細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)的動(dòng)態(tài)平衡，在本次研究中通過(guò)積分分析可以發(fā)現(xiàn)，這種酶在胎膜早破的患者體內(nèi)具有高表達(dá)，而在正常產(chǎn)婦體內(nèi)表達(dá)率較低，說(shuō)明這種蛋白酶的表達(dá)可能與胎膜早破有關(guān)[9]，其主要作用機(jī)理與其在人體內(nèi)的功能有關(guān)[10-12]。這種酶主要與維持人體細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)動(dòng)態(tài)平衡有關(guān)，在產(chǎn)婦臨產(chǎn)期MMP-9 含量升高，造成降解作用加快，打破了細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)的動(dòng)態(tài)平衡，造成胎膜破裂，MMP-9 在胎膜早破過(guò)程中的主要作用包括以下幾個(gè)方面[13]：（1）分娩時(shí)，這種蛋白質(zhì)被誘發(fā)，從而發(fā)生高表達(dá)；（2）隨著孕周期的延長(zhǎng)，這種蛋白酶在體內(nèi)的含量升高；（3）分娩時(shí)，產(chǎn)婦羊水中含有大量的相關(guān)酶；（4）有微生物感染時(shí)這種酶的含量大幅度升高。

3.3 解脲支原體感染與MMP-9表達(dá)的關(guān)系

MMP-9 與胎膜的延展性有關(guān)，在體內(nèi)含量升高能夠促進(jìn)膠原的降解，增加了胎膜早破的發(fā)生率，而解脲支原體感染能夠促進(jìn)膠原降解，促進(jìn)MMP-9分泌。一方面解脲支原體能夠分泌多種酶損傷產(chǎn)婦胎膜膠原，導(dǎo)致MMP-9 分泌增加，造成胎膜破裂；另一方面，解脲支原體感染造成患者體內(nèi)酸堿失衡，炎癥因子釋放量增多，使MMP-9 高表達(dá)[14-15]。

在本研究中，選取胎膜早破的患者和未發(fā)生胎膜早破的產(chǎn)婦作為研究對(duì)象，按照疾病類(lèi)型分組，經(jīng)過(guò)檢查發(fā)現(xiàn)，胎膜早破的實(shí)驗(yàn)組患者感染發(fā)生率較高，MMP-9 表達(dá)較高，與對(duì)照組具有明顯的差異，同時(shí)，兩組產(chǎn)婦、新生兒結(jié)局也有所不同，實(shí)驗(yàn)組產(chǎn)婦妊娠過(guò)程不良情況增多，新生兒并發(fā)癥增多，明顯高于對(duì)照組。兩組結(jié)果對(duì)比分析可以得出結(jié)論：胎膜早破與解脲支原體感染和MMP-9 表達(dá)具有相關(guān)性，解脲支原體感染能夠引發(fā)MMP-9 高表達(dá)，引發(fā)患者發(fā)生胎膜早破，在臨床產(chǎn)婦產(chǎn)檢中應(yīng)該得到重視。