孫曹瑋

流感嗜血桿菌(HI)屬于革蘭氏陰性菌，菌體無(wú)動(dòng)力，能侵犯并寄生于人體的上呼吸道黏膜表面，可以通過(guò)人體的密切接觸和呼吸道分泌物進(jìn)行傳播[1]。兒童是流感嗜血桿菌感染的易感人群之一，健康兒童的流感嗜血桿菌定值率約在5%左右[2]。流感嗜血桿菌感染主要能引發(fā)兒童呼吸道感染，如扁桃體炎、支氣管炎、肺炎、支氣管肺炎，也能引發(fā)腦膜炎、骨髓炎等侵襲性感染，嚴(yán)重的甚至可能造成敗血癥，嚴(yán)重影響其身體健康[3]。有數(shù)據(jù)[4]統(tǒng)計(jì)顯示，流感嗜血桿菌感染是導(dǎo)致兒童獲得性肺炎的常見原因。近年來(lái)，臨床抗生素的應(yīng)用有所濫用，流感嗜血桿菌的耐藥性也在逐年上升，臨床治療的難度也越來(lái)越高。而了解流感嗜血桿菌的分布流行特點(diǎn)及其耐藥性情況，對(duì)于臨床選擇合適的治療方法，提高治療效果有重要意義[5]。本次研究選取2016年3月至2019年3月我院收治的兒童呼吸道感染患兒985例作為研究對(duì)象，對(duì)流感嗜血桿菌進(jìn)行分離鑒定，并分析分布流行特點(diǎn)和各種抗生素的耐藥性情況，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2016年3月至2019年3月我院收治的兒童呼吸道感染患兒985例作為研究對(duì)象，其中男531例，女454例，年齡0.2～13歲，平均年齡(5.45±1.47)歲。采集患兒的合格痰液標(biāo)本，其中上呼吸道樣本383例，下呼吸道樣本602例。

1.2 方法

1.2.1 儀器與試劑 選用法國(guó)梅里埃公司的Vitek 2 Compact型細(xì)胞鑒定儀以及其配套的嗜血桿菌VITEK-2鑒定卡。哥倫比亞血瓊脂平板，分離嗜血桿菌專用的HIN巧克力平板，MH瓊脂培養(yǎng)基，HTM藥敏培養(yǎng)基(購(gòu)于廣東江門凱琳公司)。Ⅴ+Ⅹ因子診斷紙片、Ⅹ因子診斷紙片、Ⅴ因子診斷紙片以及各項(xiàng)藥敏紙片均由英國(guó)Oxoid公司提供。頭孢硝噻吩紙片由法國(guó)梅里埃公司提供。質(zhì)控菌：流感嗜血桿菌(ATCC49247)。

1.2.2 樣本的采集 對(duì)所有患兒在樣本采集前，先予以禁食2 h，然后生理鹽水漱口后進(jìn)行采集痰液樣本。先予以涂片鏡檢，每個(gè)低倍視野鱗狀上皮細(xì)胞低于10個(gè)，白細(xì)胞大于25個(gè)，視為標(biāo)本合格。

1.2.3 樣本培養(yǎng)及鑒定 對(duì)收集的痰液標(biāo)本按照《微生物檢驗(yàn)操作規(guī)程》(第3版)的要求進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)。采用接種環(huán)將痰液樣本分別接種于哥倫比亞血平板、HIN巧克力平板。在35～37 ℃、含5%～7% CO2的孵化箱進(jìn)行孵育24 h左右。然后挑取哥倫比亞血平板不生長(zhǎng)，而HIN巧克力平板上呈淺灰色或無(wú)色、透明、露滴狀的可疑菌落進(jìn)行“衛(wèi)星試驗(yàn)”初步鑒定。并采用Ⅴ+Ⅹ、Ⅹ、Ⅴ因子生長(zhǎng)需求試驗(yàn)進(jìn)行輔助鑒定，并采用全自動(dòng)細(xì)胞鑒定儀以及其配套的嗜血桿菌VITEK-2鑒定卡進(jìn)行明確鑒定。

1.2.4 藥敏試驗(yàn) 對(duì)于分離出的流感嗜血桿菌，采用紙片擴(kuò)散法(K-B)法進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，并參照美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)(CLSI)的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行判讀。并將頭孢硝噻吩紙片濕潤(rùn)后，將菌落涂抹于紙片上進(jìn)行β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)。

1.3 觀察指標(biāo) 統(tǒng)計(jì)分析兒童流感嗜血桿菌的分布特點(diǎn)，并對(duì)流感嗜血桿菌的耐藥性進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 19.5統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)研究的數(shù)據(jù)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料采用率表示，組間比較采用卡方檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兒童流感嗜血桿菌的檢出及不同年齡段的檢出情況 985例患兒中共分離出流感嗜血桿菌菌株157株，檢出率15.94%，其中檢出β- 內(nèi)酰胺酶67株，β- 內(nèi)酰胺酶陽(yáng)性42.68%。其中≤1歲的兒童占比高達(dá)30.18%，高于其他年齡段的兒童，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05，表1)。

表1 兒童流感嗜血桿菌的檢出及不同年齡段的檢出情況

2.2 兒童流感嗜血桿菌不同季節(jié)和標(biāo)本類型的檢出情況比較 第二季度4—6月份流感嗜血桿菌的檢出率為27.98%，高于其他三個(gè)季度(P＜0.05，表2)。上呼吸道和下呼吸道感染樣本中的檢出率分別為14.62%，16.78%，相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

表2 兒童流感嗜血桿菌不同季節(jié)和標(biāo)本類型的檢出情況比較

2.3 兒童流感嗜血桿菌的耐藥性情況分析 兒童流感嗜血桿菌對(duì)氨芐西林、復(fù)方新諾明以及頭孢唑啉的耐藥性均達(dá)到了70%以上，對(duì)左氧氟沙星、美羅培南、亞胺培南以及阿莫西林/克拉維酸的耐藥性最低，對(duì)其他的抗生素的耐藥性也多處于較低水平(表3)。

表3 兒童流感嗜血桿菌的耐藥性情況分析

3 討論

流感嗜血桿菌能通過(guò)黏附侵襲人體的呼吸道上皮細(xì)胞，并在呼吸道定植，從而引發(fā)扁桃體炎、支氣管炎、肺炎等呼吸道感染的相關(guān)癥狀，兒童流感嗜血桿菌的感染率更高[6-7]。本次研究中呼吸道感染患兒的流感嗜血桿菌檢出率為15.94%，與甄楊等[8]的研究中檢出率14.72%的結(jié)果相近。其中≤1歲的兒童占比高達(dá)30.18%，高于其他年齡段的兒童(P＜0.05)，顯示≤1歲的嬰兒的流感嗜血桿菌感染率更高，這可能是由于嬰兒免疫系統(tǒng)尚未發(fā)育健全，加上肺清除能力不足，流感嗜血桿菌定植的概率更高[9]。兒童上呼吸道標(biāo)本和下呼吸道標(biāo)本中流感嗜血桿菌的檢出率相比無(wú)明顯差異，但是研究結(jié)果顯示第二季度4—6月份流感嗜血桿菌的檢出率為27.98%，高于其他三個(gè)季度(P＜0.05)，提示流感嗜血桿菌感染與季節(jié)有一定的相關(guān)性，在第二季度的感染率最高，符合馬芳軍等人[10]的調(diào)查結(jié)果，分析可能是由于第二季度的氣溫飄忽不定，冷熱交替，尤其早晚溫差較大，因此容易出現(xiàn)流感嗜血桿菌感染相關(guān)的呼吸系統(tǒng)疾病[11]。β-內(nèi)酰胺酶是造成耐藥菌株形成的重要原因之一，本次研究的157株流感嗜血桿菌菌株中，β-內(nèi)酰胺酶的陽(yáng)性率為42.68%，與潘芬等人[12]報(bào)道的β- 內(nèi)酰胺酶產(chǎn)酶率66.7%相近處于較低水平，分析可能是由于地區(qū)的差異性導(dǎo)致的。在耐藥性方面，本組兒童流感嗜血桿菌對(duì)氨芐西林、復(fù)方新諾明以及一代頭孢唑啉的耐藥性均達(dá)到了70%以上，對(duì)左氧氟沙星、美羅培南、亞胺培南以及阿莫西林/克拉維酸的耐藥性最低，對(duì)其他第二代、第三代頭孢菌素以及其他喹諾酮類抗生素的耐藥性也多處于較低水平。氨芐西林是流感嗜血桿菌治療的經(jīng)驗(yàn)用藥，隨著臨床用藥的逐漸增多，其耐藥性也有了較高的提升，在臨床應(yīng)用時(shí)要慎選[13]。而對(duì)復(fù)方新諾明的耐藥性可能與菌株內(nèi)產(chǎn)生大量雙氫葉酸還原酶有關(guān)。而碳青霉烯類抗生素的抗菌譜廣，對(duì)于ESBLs酶具有較好的抵御能力，因此對(duì)流感嗜血桿菌具有顯著的抗菌活性[14]。另外流感嗜血桿菌對(duì)大環(huán)內(nèi)酯類抗菌藥物阿奇霉素和青霉素類抗菌藥物阿莫西林/克拉維酸的耐藥菌株也比較少，相對(duì)喹諾酮類抗生素而言，兒童應(yīng)有的不良反應(yīng)比較少，可考慮作為選擇用藥[15]。

綜上所述，兒童流感嗜血桿菌感染主要分布于1歲以下的嬰幼兒，且與季節(jié)有一定的相關(guān)性，在第二季度的感染率最高，流感嗜血桿菌對(duì)氨芐西林、復(fù)方新諾明以及一代頭孢的耐藥性較強(qiáng)，且β-內(nèi)酰胺酶陽(yáng)性率也很高，應(yīng)根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果選擇敏感度高的藥物進(jìn)行治療。