sFas和Fasl配體是參與細(xì)胞凋亡過(guò)程的分子。細(xì)胞凋亡是復(fù)雜的多因素過(guò)程，其通過(guò)細(xì)胞毒性途徑導(dǎo)致細(xì)胞死亡以達(dá)到消除壞的、老的或突變的細(xì)胞。在生理?xiàng)l件下構(gòu)成抗癌防御，而在患有癌癥的個(gè)體中有所降低[1～4]。細(xì)胞凋亡是重建母體蛻膜，維持適當(dāng)?shù)哪柑ッ庖吆头乐辜?xì)胞侵入螺旋動(dòng)脈所必需的過(guò)程。在妊娠過(guò)程中調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)，以防止妊娠對(duì)同種異體移植物的排斥。免疫調(diào)節(jié)可能與細(xì)胞凋亡變化有關(guān)，細(xì)胞凋亡增強(qiáng)可導(dǎo)致這一過(guò)程的降低[1～3，5]。在妊娠過(guò)程中，血管床容量增加和輸氧分子需求增加可能導(dǎo)致骨髓細(xì)胞凋亡過(guò)程減緩，這可以延長(zhǎng)紅細(xì)胞的壽命，保護(hù)孕婦免于貧血[4，5]。sFas 是來(lái)自腫瘤壞死因子（TNF）家族的膜受體，存在死亡域，為了啟動(dòng)細(xì)胞凋亡過(guò)程，必須摻入Fas配體Fasl 分子。sFas 與Fasl 對(duì)于細(xì)胞，特別是對(duì)腫瘤細(xì)胞的存活及免疫消除病毒感染和癌癥至關(guān)重要。

在患有免疫系統(tǒng)疾病和癌癥的個(gè)體中觀察到更高水平的sFas 與Fasl[6，7]，sFas 和Fasl的應(yīng)激誘導(dǎo)表達(dá)依賴于各種信號(hào)分子，如p53，核因子的活化，kappa B，特異性蛋白-1 和早期生長(zhǎng)反應(yīng)因子。作為DNA 鏈碎片整理的細(xì)胞毒性效應(yīng)取決于細(xì)胞周期階段，并且在無(wú)差異細(xì)胞中表現(xiàn)最強(qiáng)，同時(shí)在干細(xì)胞中存在，也可在臍帶血中觀察到[6，7]。

sFas 與Fasl 系統(tǒng)的激活不僅會(huì)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，還會(huì)保護(hù)滋養(yǎng)層母體免疫系統(tǒng)免受侵害。sFas 與Fasl 系統(tǒng)保護(hù)母體和胎兒之間活化白細(xì)胞的遷移，相反，可溶性Fas，即sFas 可通過(guò)其他機(jī)制起作用，通過(guò)減緩細(xì)胞凋亡，保護(hù)不同細(xì)胞和活化T 淋巴細(xì)胞免于凋亡[6]。Fasl 在免疫組織和細(xì)胞中高白細(xì)胞和胎盤中存在。膜Fas 受體是影響促凋亡過(guò)程增加的最重要因素之一[7]。

sFas 在Fas mRNA的替代折疊過(guò)程中形成，形成的新蛋白質(zhì)分子含有缺失或無(wú)能力的跨膜結(jié)構(gòu)域。此外，F(xiàn)asl 是崩解的蛋白水解產(chǎn)物，其濃度可能與細(xì)胞凋亡過(guò)程的強(qiáng)度成正比[8]?？梢约僭O(shè)高濃度的sFas 與凋亡減少相關(guān)，對(duì)該配體的親和力較低。若需要增加該過(guò)程，需要更高濃度的Fasl。sFas 對(duì)Fas 與Fasl 具有抑制作用，影響細(xì)胞凋亡[9，10]。

sFas 在達(dá)到受體前抑制Fasl 配體，減緩Fas 依賴性細(xì)胞凋亡。妊娠晚期時(shí)sFas 可能在胎兒細(xì)胞中合成并通過(guò)胎兒臍帶血轉(zhuǎn)移到胎盤床中。妊娠早期sFas 濃度低，免疫耐受現(xiàn)象可能在妊娠晚期發(fā)生變化[9，11]。胎盤細(xì)胞凋亡由于妊娠進(jìn)展而增加，因此妊娠晚期是評(píng)估預(yù)期的sFas和Fasl濃度的最佳時(shí)間[12]。現(xiàn)在很少有數(shù)據(jù)描述妊娠晚期母體血液和臍帶血中sFas 和Fasl的客觀價(jià)值[8，9，11，12]。 但有報(bào)道這些分子的生理濃度可以評(píng)估胎盤功能障礙或免疫耐受失敗的風(fēng)險(xiǎn)[11，12]。目前尚不清楚在妊娠晚期，是否可以預(yù)測(cè)同種異體移植排斥或胎盤功能障礙的風(fēng)險(xiǎn)增加由高濃度的Fasl 或降低sFas的濃度引起。從臍帶動(dòng)脈到靜脈的胎兒循環(huán)中不同濃度的sFas 可以解釋其在胎盤中的作用和分布。

本研究通過(guò)分析妊娠晚期孕婦的靜脈血清與臍帶血清中抗凋亡sFas 和促凋亡Fasl 這兩類分子的濃度以及相關(guān)性，評(píng)估sFas和Fasl分布對(duì)胎盤細(xì)胞凋亡過(guò)程強(qiáng)度和胎兒血液循環(huán)系統(tǒng)的作用。

1 材料與方法

1.1 一般資料選擇我院2017年5月～2018年2月無(wú)并發(fā)癥和胎兒正常發(fā)育的36 名妊娠晚期孕婦，年齡25～39歲，平均（33.07±4.02）歲。孕周為38～ 41周，平均（39.2±0.73）周。初產(chǎn)婦占66.7%。在12～14周時(shí)，使用產(chǎn)前超聲掃描估計(jì)妊娠孕周，由于各種手術(shù)適應(yīng)證，所有產(chǎn)婦均選擇剖宮產(chǎn)分娩。

1.2 方法所有入選孕婦剖宮產(chǎn)前2～3h，肘靜脈取母體靜脈血，從臍帶的胎盤部分分離新生兒后，從靜脈和動(dòng)脈分開(kāi)取臍帶血，分別測(cè)定母體靜脈血清和臍動(dòng)脈、臍靜脈血清中的sFas 濃度。血樣的體積各不少于5ml，將樣品置于沒(méi)有抗凝血因子的試管中，并在室溫下儲(chǔ)存約60min，完成自然凝結(jié)。在形成凝塊后，通過(guò)RCF389 型離心機(jī)，將樣品離心15min，離心后，將血液樣品的上清液置換到管中，在-70℃恒溫下，冷凍并儲(chǔ)存，直至測(cè)量。通過(guò)Fas ELISA 試劑盒測(cè)量sFas，最小可檢測(cè)劑量（MDD）范圍為30.1～2 000pg/ml，靈敏度為20pg/ml。通過(guò)Fasl ELISA 試劑盒測(cè)量Fasl，最小可檢測(cè)劑量（MDD）范圍為15.4～1 000pg/ml，靈敏度為8.05pg/ml。sFas 與Fasl的血清濃度單位均為pg/ml。所有試劑盒均來(lái)自武漢博士德生物工程有限公司。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法使用SPSS 14.0 統(tǒng)計(jì)軟件和Excel 2010 對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。通過(guò)算術(shù)平均值、標(biāo)準(zhǔn)偏差、最大值和最小值來(lái)估計(jì)測(cè)量參數(shù)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三種血清中的sFas濃度在成人血清中，sFas濃度范圍為4 792～17 150pg/ml。母體血清樣品中的sFas 濃度應(yīng)包含在這些值中。在臍動(dòng)脈血中，所有樣品測(cè)量值較低，相反在臍靜脈血中，16.2%的結(jié)果在正常范圍內(nèi)，其余83.8%的結(jié)果低于正常范圍。這意味著該分子在胎兒體內(nèi)濃度低于成人體內(nèi)中的正常濃度。

2.2 臍動(dòng)、靜脈血清與母體血清中sFas濃度對(duì)比sFas濃度在臍靜脈和臍動(dòng)脈血中平均濃度分別為（3 250.77±9.01）pg/ml，（3 352.24±7.07）pg/ml，與 母體血中平均濃度（5 767.89±8.47）pg/ml 相比，標(biāo)準(zhǔn)差依次為671.49±2.17，1 168.24±5.11，455.48± 1.02（P＜0.05），相應(yīng)的sFas 濃度低于母體血液，差異顯著，而臍動(dòng)脈血清和臍靜脈血清之間的sFas 濃度無(wú)顯著差異（P＞0.05）。

2.3 三種血清中的Fasl濃度在成人血清中，F(xiàn)asl濃度為39.8～145pg/ml。母體血液樣本中的Fasl 濃度在許多情況下與預(yù)期值不同，7.7%的血管血清中Fasl 濃度低于正常范圍，但有61.6%的結(jié)果更高，其余30.7%是在正常濃度范圍內(nèi)。測(cè)量表明23.1%的臍動(dòng)脈和臍靜脈血清呈正常濃度范圍，69.2%的結(jié)果高于此標(biāo)準(zhǔn)，7.7%的Fasl 濃度較低。

2.4 臍動(dòng)脈和臍靜脈血清中Fasl濃度與母體血清中Fasl 濃度的結(jié)果對(duì)比 使用方差分析ANOVA 估計(jì)母體和臍帶血中Fasl 濃度的顯著性，P=0.005，差異顯著。通過(guò)非參數(shù)U Mann-Whitney 測(cè)試測(cè)量母體血清中的Fasl 并與臍靜脈血清相比，在平均濃度之間發(fā)現(xiàn)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05），臍靜脈血清呈現(xiàn)出比母體血清中更高的Fasl 濃度。Mann-Whitney U檢驗(yàn)顯示母體血清中Fasl 配體的平均濃度（70.08± 2.21）pg/ml 與臍動(dòng)脈血清（165.45±4.32）pg/ml 之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05），臍動(dòng)脈血清顯示比母體血清中更高濃度的Fasl。臍動(dòng)脈血清的Fasl 濃度與臍靜脈血清Fasl 濃度（170.04±5.36）pg/ml，比較差異無(wú)顯著性意義（P＞0.05），臍靜脈血清，臍動(dòng)脈血清和母體血清的標(biāo)準(zhǔn)差依次為55.78±1.30，53.46± 2.01，14.98±4.30。

3 討論

從母體血清中獲得的sFas 濃度的分析顯示，所有結(jié)果均與正常人的標(biāo)準(zhǔn)相當(dāng)，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)比 6 851pg/ml 更高的結(jié)果，并且孕婦中sFas 濃度的預(yù)期值遠(yuǎn)低于最高正常濃度。將此結(jié)果與相關(guān)研究結(jié)果進(jìn)行比較，則它的濃度值遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于健康的非妊娠婦女和懷孕3個(gè)月的孕婦[12，13]。該觀察結(jié)果與相關(guān)研究結(jié)果一致，表明sFas 有抑制細(xì)胞凋亡的作 用[9，13]，也可以預(yù)期在胎盤中細(xì)胞凋亡的強(qiáng)度會(huì)降低。sFas 和Fasl的濃度水平在妊娠中期的羊水中進(jìn)行觀測(cè)，發(fā)現(xiàn)小于胎齡（SGA），大于胎齡（LGA）和適合胎齡（AGA）妊娠之間sFas和Fasl液體濃度沒(méi)有差異[14]，這可能表明sFas和Fasl對(duì)胎兒體重沒(méi)有依賴性。Ashton[10]提出sFas 與Fasl 在滋養(yǎng)細(xì)胞，螺旋動(dòng)脈重塑和胎盤發(fā)育中發(fā)揮重要作用。

本研究發(fā)現(xiàn)臍帶血中的細(xì)胞凋亡參數(shù)高于母體血液，胎兒機(jī)體細(xì)胞增殖的過(guò)程比胎兒的細(xì)胞凋亡過(guò)程具有更高的水平，但在妊娠38～41周，細(xì)胞增殖的過(guò)程中很低?？梢哉J(rèn)為這是由于細(xì)胞肥大的過(guò)程而發(fā)生的，并且可能所有新發(fā)細(xì)胞都是不必要的并且被破壞的。細(xì)胞凋亡的增加可能由胎盤異常引起，并且可以觀察到對(duì)胎兒生長(zhǎng)受限的影響。在這個(gè)研究中，只有AGA 胎兒，因此可以預(yù)期母體血液中的細(xì)胞凋亡過(guò)程不會(huì)增加[15]。

有研究發(fā)現(xiàn)母體血液與臍帶動(dòng)脈和靜脈血液之間的sFas 濃度存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，在母體血液中它有更高的濃度，可能是在胎盤保護(hù)中起到促進(jìn)細(xì)胞凋亡作用的保護(hù)機(jī)制。而其他研究顯示出不同的結(jié)果，較高的血液血糖在分娩時(shí)測(cè)量的濃度比正常孕婦高[16]?？梢哉J(rèn)為這種差異可能是由自然分娩或剖宮產(chǎn)分娩方式所引起的。來(lái)自臍帶的動(dòng)脈和靜脈血中sFas 濃度之間沒(méi)有差異。沒(méi)有關(guān)于sFas的動(dòng)脈與靜脈比較的其他可用數(shù)據(jù)，但胎兒的血液循環(huán)不能證明絨毛與母體血液接觸的變化[10，14，15]。

如果比較血清中的Fasl 配體濃度，則可以看到不同的結(jié)果。本研究中，比較了母體和臍帶血血清中Fasl 配體的濃度，發(fā)現(xiàn)母體血清與臍帶血清之間存在差異。在母體血液中觀察到更高水平的Fasl，但臍帶靜脈和動(dòng)脈血液之間沒(méi)有差異。有研究發(fā)現(xiàn)過(guò)嚴(yán)重與非常嚴(yán)重的SGA 胎兒羊水中Fasl 濃度增加，胎兒和胎盤細(xì)胞凋亡增加[14]。這一結(jié)果可以解釋在無(wú)并發(fā)癥的妊娠中臍帶血中Fasl 濃度的降低可以抑制胎兒的細(xì)胞凋亡。Randhawa 等[16]觀察的臍血清Fasl 水平顯著高于母體血清，但卻沒(méi)有關(guān)于這個(gè)結(jié)果的原因分析。sFas 與Fasl 介入的細(xì)胞凋亡失調(diào)的后果與自身反應(yīng)性以及免疫功能障礙和惡性轉(zhuǎn)化以及胎盤功能障礙有關(guān)[17]。在先兆子癇妊娠中測(cè)量母體平均血清sFas和Fasl水平，并與健康孕婦進(jìn)行比較，兩組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異[16，18，19]。從臨床角度來(lái)看，母體血液Fasl的測(cè)量不能表明胎兒生物體細(xì)胞凋亡過(guò)程的加劇，但是對(duì)母體測(cè)量結(jié)果與胎兒血液中Fasl 濃度的比例可能有助于建立仍然不確定的因果關(guān)系。所有由不同作者提供的數(shù)據(jù)均以小組形式獲得，需要進(jìn)一步研究以評(píng)估健康妊娠和SGA 或先兆子癇患者Fasl的正常測(cè)量參數(shù)濃度[19]。

本研究中臍動(dòng)脈和臍靜脈血液中sFas 和Fasl濃度的無(wú)顯著差異，表明胎兒生物體對(duì)sFas 和Fasl產(chǎn)生的細(xì)胞凋亡沒(méi)有影響。胎兒血液中sFas 濃度降低可能意味著胎兒體內(nèi)細(xì)胞凋亡的增加。臍帶血中Fasl 濃度高于母體，表明胎兒循環(huán)中細(xì)胞凋亡增強(qiáng)，胎盤血流對(duì)其濃度沒(méi)有影響。進(jìn)一步確定在生理與病理情況下妊娠早期、中期和孕晚期的sFas和Fasl 水平均處于正常范圍。