鄭景霞 白春清 熊 華*

（1 南昌大學(xué) 食品科學(xué)與技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 南昌 330047

2 江西科技師范大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院 國(guó)家大宗淡水魚加工技術(shù)研發(fā)分中心 南昌 330013）

β-胡蘿卜素（β-carotene）是具有多種功能的天然色素，其特殊的富電子共軛體系，可通過猝滅單線態(tài)氧和清除自由基發(fā)揮較好的抗氧化活性[1]，且其對(duì)心血管疾病[2]、結(jié)腸癌[3]等慢性疾病有顯著的治療效果。然而，β-胡蘿卜素易受光、熱、氧等的影響而發(fā)生降解，通過運(yùn)載體系將其制備成制劑能夠有效提高其應(yīng)用價(jià)值。脂質(zhì)體作為一種新型的功能成分載體制劑受到廣泛的關(guān)注，將活性成分包埋于脂質(zhì)體內(nèi)可提高其穩(wěn)定性，降低光、氧等對(duì)活性成分的破壞，同時(shí)，脂質(zhì)體還具有較好的緩釋作用、靶向性、細(xì)胞親和性、無毒性與組織相容性[4-6]。目前含有單一β-胡蘿卜素功能性成分的脂質(zhì)體制劑已有研究報(bào)道[7-9]，而其與其它功能性成分復(fù)合的制劑還鮮有報(bào)道。薏苡仁油 （Coix seed oil）是從藥食兩用性材料薏苡仁中提取的油脂，研究表明其富含不飽和脂肪酸，具有消炎、鎮(zhèn)痛，抗癌等生理功能[10]。利用脂質(zhì)體將β-胡蘿卜素與薏苡仁油同時(shí)包埋，制備包含兩種功能性成分的復(fù)合脂質(zhì)體制劑，一方面能夠給β-胡蘿卜素提供保護(hù)屏障，有效減緩其降解速度；另一方面能利用薏苡仁油對(duì)β-胡蘿卜素的溶解作用使整個(gè)體系分散更加均勻，進(jìn)一步提高體系的穩(wěn)定性，形成具有多種功效且氧化穩(wěn)定性良好的復(fù)合制劑。

本研究采用乙醇注入法制備β-胡蘿卜素-薏苡仁油復(fù)合脂質(zhì)體，以β-胡蘿卜素包封率及粒徑分布為考察指標(biāo)，在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上，采用Box-Behnken響應(yīng)面法優(yōu)化復(fù)合脂質(zhì)體的制備工藝條件[11]，并對(duì)樣品的形態(tài)分布及氧化穩(wěn)定性進(jìn)行考察，為復(fù)合脂質(zhì)體制劑開發(fā)提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

β-胡蘿卜素，購(gòu)于美國(guó)Sigma公司；薏苡仁油，廣州合誠(chéng)三先生物科技有限公司；蛋黃卵磷脂，北京solarbio科技有限公司；膽固醇，上海藍(lán)季科技發(fā)展有限公司；DPPH，購(gòu)于美國(guó)Sigma公司；二氯甲烷、乙醇、正己烷均為分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

1.2 設(shè)備與儀器

85-2恒溫磁力攪拌器，常州國(guó)華電器有限公司；SHZ-DⅢ循環(huán)水真空泵，鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司；KQ-250DE型數(shù)控超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司；722N可見分光光度計(jì)，上海美譜達(dá)儀器有限公司；Zetasizer Nano粒度電位儀，馬爾文儀器公司（中國(guó)）；H-600透射電子顯微鏡，日本Hitachi集團(tuán)。

1.3 方法

1.3.1 β-胡蘿卜素-薏苡仁油復(fù)合脂質(zhì)體的制備

采用乙醇注入法制備復(fù)合脂質(zhì)體[12]。將處方量的蛋黃卵磷脂、膽固醇、薏苡仁油及新配制的β-胡蘿卜素-二氯甲烷溶液（1 mg/mL）溶于10 mL乙醇，待充分溶解后，將其緩慢滴加到一定體積的PBS緩沖液（0.02 mol/L）中，滴加完成后繼續(xù)恒溫?cái)嚢?0 min，再于振蕩器中振蕩水化20 min，得粗脂質(zhì)體。將粗脂質(zhì)體在42℃真空條件下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙醇及二氯甲烷后，加蒸餾水定容至起始體積后，超聲處理30 min，充入氮?dú)狻⒚芊夂笥?℃儲(chǔ)存。同法制備空白脂質(zhì)體、β-胡蘿卜素脂質(zhì)體及薏苡仁油脂質(zhì)體作對(duì)照。

1.3.2 β-胡蘿卜素包封率的測(cè)定

1.3.2.1 β-胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立 準(zhǔn)確稱取10 mg β-胡蘿卜素溶于10 mL二氯甲烷，配置成1 mg/mL的β-胡蘿卜素溶液，取1 mL該溶液用正己烷定容至10 mL，配置成0.1 mg/mL的β-胡蘿卜素母液，分別取 0.05，0.1，0.15，0.2，0.25，0.3，0.35，0.4 mL β-胡蘿卜素母液于 10 mL 容量瓶，用正己烷定容至10 mL，以正己烷為空白對(duì)照，分別稀釋成 0.5，1，1.5，2，2.5，3，3.5，4 μg/mL濃度梯度的β-胡蘿卜素溶液，于450 nm處測(cè)吸光度，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線：Y=0.208C+0.002，R2=0.998。

1.3.2.2 β-胡蘿卜素包封率的計(jì)算 （EE） β-胡蘿卜素包封率的測(cè)定采用有機(jī)溶劑萃取法[13]。取適量脂質(zhì)體至于10 mL刻度離心管中，加入4 mL正己烷，渦旋混合1 min后，5 000 r/min離心10 min，取上層正己烷液，重復(fù)提取2次后，合并正己烷液，并用正己烷定容至10 mL，以正己烷為空白，測(cè)定樣品在450 nm處吸光度A0，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算游離β-胡蘿卜素含量。向上述萃取后的脂質(zhì)體中加入定量乙醇，渦旋混合10 s后，超聲破乳10 min，加入4 mL正己烷，5 000 r/min離心10 min，取上層正己烷液，重復(fù)提取2次至脂質(zhì)體呈乳白色，合并正己烷液，繼續(xù)用正己烷定容至10 mL，測(cè)定吸光度A1。將A0和A1分別代入β-胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算游離β-胡蘿卜素含量C0和被包埋β-胡蘿卜素含量C1。通過以下公式計(jì)算EE：

1.3.3 單因素考察 基本工藝條件：卵磷脂與膽固醇質(zhì)量比（5∶1，w/w）、薏苡仁油 6 mg、β-胡蘿卜素-二氯甲烷溶液（1 mg/mL）0.6 mL溶于10 mL乙醇，PBS緩沖液 pH為 6.8、體積為 25 mL，攪拌溫度45℃。試驗(yàn)過程中固定其它條件不變而只改變某一單一條件，分別考察薏苡仁油添加量、卵磷脂與膽固醇質(zhì)量比 （w/w）、β-胡蘿卜素添加量、PBS緩沖液用量、攪拌溫度及PBS緩沖液pH值等6個(gè)因素對(duì)β-胡蘿卜素的包封率和脂質(zhì)體粒徑分布的影響，根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果確定影響較大的因素。

1.3.4 Box-Behnken響應(yīng)面法優(yōu)化β-胡蘿卜素-薏苡仁油復(fù)合脂質(zhì)體制備工藝 通過單因素考察，選取對(duì)β-胡蘿卜素包封率和脂質(zhì)體粒徑分布影響較大的3個(gè)因素：脂質(zhì)體制備溫度（A）、卵磷脂與膽固醇的質(zhì)量比（B）、PBS緩沖液用量（C），以β-胡蘿卜素的包封率EE（Y）為響應(yīng)值，采用Box-Behnken響應(yīng)面優(yōu)化制備工藝。

1.3.5 β-胡蘿卜素-薏苡仁油復(fù)合脂質(zhì)體的形態(tài)表征

1.3.5.1 粒徑分布及Zeta電位 取β-胡蘿卜素-薏苡仁油復(fù)合脂質(zhì)體1 mL，用蒸餾水稀釋至10 mL以防止微粒聚集影響測(cè)定結(jié)果，隨后裝入特定的比色皿中進(jìn)行測(cè)定，采用馬爾文Zetaszier Nano-ZS粒徑分析儀測(cè)定脂質(zhì)體的粒徑分布、多分散性系數(shù)及Zeta電位。

1.3.5.2 透射電子顯微鏡觀察（TEM） 采用磷鎢酸負(fù)染法[14]對(duì)β-胡蘿卜素-薏苡仁油復(fù)合脂質(zhì)體進(jìn)行前處理，取適量樣品滴于銅網(wǎng)上，用濾紙吸干邊緣多余的樣品后，將銅網(wǎng)浸泡于0.01 g/mL的磷鎢酸鈉溶液中染色2 min，取出后用濾紙吸干邊緣多余溶液后自然晾干，用透射電鏡觀察脂質(zhì)體的形態(tài)結(jié)構(gòu)。

1.3.6 DPPH自由基清除能力 分別取2 mL脂質(zhì)體，加入2 mL DPPH乙醇溶液（0.4 mmol/L），混合后避光放置1 h，3 000 r/min離心10 min，取上清液在517 nm測(cè)吸光度，對(duì)照以乙醇代替DPPH溶液，測(cè)得At；以蒸餾水代替樣品與DPPH溶液反應(yīng)，同樣以蒸餾水和乙醇混合液為對(duì)照，測(cè)得Ac，計(jì)算公式為：

2 結(jié)果與分析

2.1 單因素考察

2.1.1 薏苡仁油添加量的影響 固定其它條件不變，只改變薏苡仁油的添加量（0，2，4，6，8，10，12 mg），制備復(fù)合脂質(zhì)體，考察薏苡仁油添加量對(duì)復(fù)合脂質(zhì)體粒徑分布及包封率的影響。結(jié)果如圖1所示，加入薏苡仁油后，β-胡蘿卜素-薏苡仁油復(fù)合脂質(zhì)體的粒徑有所增大，且β-胡蘿卜素的包封率有所降低，可能是薏苡仁油占據(jù)了一部分脂質(zhì)體囊結(jié)構(gòu)，使游離的β-胡蘿卜素?cái)?shù)量增多，從而降低包封率，但是，隨著薏苡仁油含量的增高，β-胡蘿卜素的包封率及粒徑分布變化不明顯，可能是體系中被包埋的β-胡蘿卜素及薏苡仁油達(dá)到相對(duì)平衡。

2.1.2 卵磷脂與膽固醇質(zhì)量比的影響 固定其它條件不變，只改變卵磷脂與膽固醇質(zhì)量比（1∶1，2∶1，3∶1，4∶1，5∶1，6∶1，7∶1），固定膽固醇的添加量為20 mg/10 mL乙醇，制備復(fù)合脂質(zhì)體，考察卵磷脂與膽固醇質(zhì)量比對(duì)復(fù)合脂質(zhì)體粒徑分布及包封率的影響。結(jié)果如圖2所示，隨著卵磷脂與膽固醇質(zhì)量比的增大，β-胡蘿卜素的包封率先增大后趨于穩(wěn)定，粒徑先減小后趨于穩(wěn)定，膽固醇作為類脂膜的重要組分，比例過大時(shí)，組成脂質(zhì)體的卵磷脂量太少，脂質(zhì)體膜不易形成，而且膽固醇可能會(huì)降低脂溶性物質(zhì)對(duì)脂質(zhì)雙分子層的插入[15]，過低的卵磷脂與膽固醇質(zhì)量比使得磷脂雙分子層排列不夠緊密，且形成的脂質(zhì)體數(shù)量有限不足以包埋所添加的β-胡蘿卜素及薏苡仁油[16]。而當(dāng)卵磷脂與膽固醇質(zhì)量比增大到5∶1時(shí)，脂質(zhì)體數(shù)量達(dá)到要求，且磷脂雙分子層膜的流動(dòng)性降低，致密性和剛性有所增加[17]，從而提高藥物的包封率。

圖1 薏苡仁油添加量的影響Fig.1 Effect of concentration of coix seed oil on EE of β-carotene and particle size distribution

2.1.3 β-胡蘿卜素添加量的影響 固定其它條件不變，只改變?chǔ)?胡蘿卜素的添加量（0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6，0.7 mg），制備復(fù)合脂質(zhì)體，考察 β-胡蘿卜素添加量對(duì)復(fù)合脂質(zhì)體粒徑分布及包封率的影響。結(jié)果如圖3所示，當(dāng)β-胡蘿卜素的添加量高于0.2 mg時(shí)，其包封率有緩慢增加的趨勢(shì)，脂質(zhì)體粒徑相對(duì)也有緩慢降低的趨勢(shì)，在卵磷脂和膽固醇形成的脂質(zhì)體的包埋能力范圍內(nèi)，適當(dāng)添加β-胡蘿卜素有利于提高其包封率，也有利于磷脂分子有序排列從而形成分散情況更好的體系。

圖2 卵磷脂與膽固醇質(zhì)量比的影響Fig.2 Effect of mass ratio of lecithin to cholesterol on EE of β-carotene and particle size distribution

2.1.4 PBS緩沖液用量的影響 固定其它條件不變，只改變 PBS 緩沖液用量（10，15，20，25，30，35，40 mL），制備復(fù)合脂質(zhì)體，考察PBS緩沖液用量對(duì)復(fù)合脂質(zhì)體粒徑分布及包封率的影響。結(jié)果如圖4所示，隨著緩沖液用量的增加，β-胡蘿卜素的包封率先上升后趨于平穩(wěn)，脂質(zhì)體的粒徑先下降后趨于平穩(wěn)，緩沖液用量增加，脂質(zhì)體濃度降低，分子聚集情況減少，更有利于雙分子層的有序排列。

圖3 β-胡蘿卜素添加量的影響Fig.3 Effect of concentration of β-carotene on EE of β-carotene and particle size distribution

圖4 PBS緩沖液用量的影響Fig.4 Effect of volume of PBS buffer on EE of β-carotene and particle size distribution

2.1.5 攪拌溫度的影響 固定其它條件不變，只改變攪拌溫度（25，35，45，55，65，75，85℃）制備復(fù)合脂質(zhì)體，考察攪拌溫度對(duì)復(fù)合脂質(zhì)體粒徑分布及包封率的影響。結(jié)果如圖5所示，隨著攪拌溫度的升高，β-胡蘿卜素的包封率先輕微波動(dòng)后迅速下降，脂質(zhì)體的粒徑相對(duì)也先輕微波動(dòng)后持續(xù)增大。攪拌溫度為45℃時(shí)，β-胡蘿卜素的包封率最高，脂質(zhì)體粒徑也較小，制備溫度高于磷脂的相變溫度才能提高脂質(zhì)體膜的通透性使藥物插入[18]，但是，過高的溫度又會(huì)使磷脂膜的流動(dòng)性增大，導(dǎo)致藥物泄漏，粒徑增大。

2.1.6 PBS緩沖液pH值的影響 固定其它條件不變，只改變 PBS 緩沖液 pH （5.8，6.0，6.4，6.8，7.0，7.4，7.8），制備復(fù)合脂質(zhì)體，考察 pH 對(duì)復(fù)合脂質(zhì)體粒徑分布及包封率的影響。結(jié)果如圖6所示，緩沖液的pH值低于6.4時(shí)，β-胡蘿卜素的包封率較低，脂質(zhì)體的粒徑也較大。低pH值可能會(huì)使脂質(zhì)體中的脂肪酸發(fā)生質(zhì)子化而形成六角晶體，使脂質(zhì)體膜的流動(dòng)性增大，從而降低脂質(zhì)體的穩(wěn)定性，導(dǎo)致藥物流失。

圖5 攪拌溫度的影響Fig.5 Effect of temperature on EE of β-carotene and particle size distribution

圖6 PBS緩沖液pH值的影響Fig.6 Effect of pH value of PBS buffer on EE of β-carotene and particle size distribution

2.2 Box-Behnken響應(yīng)面法優(yōu)化β-胡蘿卜素-薏苡仁油復(fù)合脂質(zhì)體制備工藝

2.2.1 Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果 采用Design-Expert 8.0.5.0對(duì)表1中的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，以Y為響應(yīng)值對(duì)自變量A、B、C進(jìn)行模型擬合，得到二次多項(xiàng)式回歸方程：

Y=77.34-5.65A+18.02B+13.47C-2.51AB-2.44AC-5.79BC-19.54A2-11.53B2-9.21C2（R2=0.9654，P=0.003，F(xiàn)=21.67，失擬度檢驗(yàn) P=0.1702＞0.05，F(xiàn)=2.83）

為檢驗(yàn)方程的可信度，利用軟件對(duì)其進(jìn)一步分析，其分析結(jié)果如表2，該模型的F值21.67＞4，P值0.0003＜0.01，說明該模型是高度顯著的，失擬相的F值為2.83，P值0.1702＞0.05，說明模型的失擬項(xiàng)不顯著，可用于預(yù)測(cè)。方程的決定系數(shù)R2=0.9654＞0.95，表明實(shí)際值與預(yù)測(cè)值非常接近，該方程能夠準(zhǔn)確預(yù)測(cè)實(shí)際情況。方程的校正決定系數(shù)Radj2=0.9208表明該模型中響應(yīng)值的變化92.08%由所選的自變量決定，進(jìn)一步說明該模型能夠準(zhǔn)確預(yù)測(cè)出響應(yīng)值與各個(gè)自變量之間的關(guān)系，且誤差極小。綜上所述，該模型擬合程度良好，可以用該模型對(duì)脂質(zhì)體的制備工藝進(jìn)行優(yōu)化。

各個(gè)因素的F值可以反映出每個(gè)因素對(duì)胞內(nèi)多糖產(chǎn)量的重要性，F(xiàn)值越大，說明對(duì)β-胡蘿卜素的包封率的影響越顯著[20]，由表2可知，各因素對(duì)復(fù)合脂質(zhì)體中β-胡蘿卜素包封率的影響程度順序?yàn)椋郝蚜字c膽固醇的質(zhì)量比＞緩沖液的用量＞制備溫度，其中卵磷脂與膽固醇的質(zhì)量比、緩沖液的用量的影響極顯著。

表1 Box-Behnken響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果Table1 Design and results of Box-Behnken response surface analysis

表2 響應(yīng)面二次模型方差分析Table2 Variance analysis of response surface quadratic mode

2.2.2 響應(yīng)面交互作用分析 采用Design-Expert 8.0.5.0對(duì)方程進(jìn)行方差性和顯著性檢驗(yàn)后，根據(jù)二次多項(xiàng)回歸方程擬合的結(jié)果，固定某一個(gè)因素，繪制Y與其它兩個(gè)因素的三維響應(yīng)曲面圖和等高線圖，響應(yīng)面圖形是響應(yīng)值對(duì)各試驗(yàn)因子所構(gòu)成的三維空間的曲面圖，從響應(yīng)面分析圖上可形象地看出最佳參數(shù)及各參數(shù)之間的相互作用[21]。如果等高線為橢圓，則表明兩個(gè)因素之間的交互作用顯著，如果為圓形則表明交互作用不顯著[22]。

當(dāng)固定PBS緩沖液體積不變時(shí)，隨著卵磷脂與膽固醇的質(zhì)量比的增加和制備溫度的升高，復(fù)合脂質(zhì)體內(nèi)β-胡蘿卜素的包封率先增大后減小，但變化范圍較小，且等高線偏橢圓形，表明卵磷脂與膽固醇的質(zhì)量比和制備溫度兩個(gè)因素的交互作用相對(duì)顯著（圖7a）。

當(dāng)固定卵磷脂與膽固醇的質(zhì)量比不變時(shí)，隨著PBS緩沖液體積的增加和制備溫度的升高，復(fù)合脂質(zhì)體內(nèi)β-胡蘿卜素的包封率先增大后減小，但變化范圍很小，等高線偏圓形，表明PBS緩沖液體積和制備溫度兩個(gè)因素的交互作用相對(duì)較弱（圖7b）。

當(dāng)固定制備溫度不變時(shí)，隨著卵磷脂與膽固醇的質(zhì)量比和PBS緩沖液體積的增加，復(fù)合脂質(zhì)體內(nèi)β-胡蘿卜素的包封率先增大后減小，且變化范圍較大，等高線呈橢圓形，表明卵磷脂與膽固醇的質(zhì)量比和PBS緩沖液體積兩個(gè)因素的交互作用顯著（圖7c）。

圖7 各因素交互作用對(duì)β-胡蘿卜素包封率的影響Fig.7 Response surface and corresponding contour plots showing the effect of interaction of various factors on the EE of β-carotene

2.2.3 模型驗(yàn)證 根據(jù)Design-Expert 8.0.5.0綜合分析，脂質(zhì)體的最佳制備工藝為：制備溫度42.78℃，卵磷脂與膽固醇質(zhì)量比6.96∶1，PBS緩沖液的體積為24.76 mL/10 mL乙醇，理論的β-胡蘿卜素的包封率為84.39%，為了檢驗(yàn)響應(yīng)面優(yōu)化結(jié)果的可靠性，采用上述最佳工藝制備脂質(zhì)體，考慮實(shí)際情況，設(shè)定制備溫度為43℃，卵磷脂與膽固醇質(zhì)量比為7∶1，PBS緩沖液的體積為25 mL/10 mL乙醇，得到的復(fù)合脂質(zhì)體中β-胡蘿卜素的包封率為81.22%，與理論值的相對(duì)誤差為3.76%，試驗(yàn)值和理論值比較接近，說明該模型的預(yù)測(cè)性良好。

2.3 β-胡蘿卜素-薏苡仁油復(fù)合脂質(zhì)體的表征

2.3.1 粒徑分布及Zeta電位 測(cè)定結(jié)果顯示，β-胡蘿卜素-薏苡仁油復(fù)合脂質(zhì)體的平均粒徑及多分散性指數(shù)受制備工藝的影響，在適當(dāng)?shù)墓に嚄l件下，其平均粒徑（AD）為（187.9±7.5）nm，多分散系數(shù)（PDI）為 0.104±0.09，平均 Zeta 電位為（-29.33±4.77）mV，說明β-胡蘿卜素-薏苡仁油復(fù)合脂質(zhì)體分散性良好，比較穩(wěn)定。

2.3.2 透射電子顯微鏡觀察 單一的β-胡蘿卜素脂質(zhì)體及β-胡蘿卜素-薏苡仁油復(fù)合脂質(zhì)體的透射電鏡結(jié)果如圖8 a1、a2、b1、b2所示，結(jié)果顯示，復(fù)合脂質(zhì)體與單一的β-胡蘿卜素脂質(zhì)體都呈現(xiàn)出圓整、規(guī)則的球形，且都可觀察到清晰的脂質(zhì)體特有的紋理結(jié)構(gòu)，未見顆粒聚集情況，但復(fù)合脂質(zhì)體的分散效果明顯比單一的β-胡蘿卜素脂質(zhì)體好，這可能是薏苡仁油的加入改善了β-胡蘿卜素在體系中的溶解性，使其更順利地包埋于脂質(zhì)體體系中。

圖8 β-胡蘿卜素脂質(zhì)體（a）與β-胡蘿卜素-薏苡仁油復(fù)合脂質(zhì)體（b）的透射電鏡圖Fig.8 TEM images of β-carotene liposome（a） and β-carotene-coix seed oil complex liposome

2.4 DPPH自由基清除能力

為了研究β-胡蘿卜素-薏苡仁油復(fù)合脂質(zhì)體的氧化穩(wěn)定性，以及薏苡仁油對(duì)體系的穩(wěn)定作用。本試驗(yàn)首先制備了不同β-胡蘿卜素與薏苡仁油質(zhì)量比（1∶1、1∶5、1∶10，m∶m）的復(fù)合脂質(zhì)體，然后以空白脂質(zhì)體：L（CG）、薏苡仁油脂質(zhì)體：L（cso）、β-胡蘿卜素脂質(zhì)體：L（β-c）為對(duì)照，對(duì)以上樣品在貯藏期間DPPH自由基清除能力進(jìn)行了測(cè)定及分析。

各種脂質(zhì)體DPPH自由基清除能力結(jié)果如圖9所示，結(jié)果表明，較空白脂質(zhì)體而言，單一的β-胡蘿卜素脂質(zhì)體和薏苡仁油脂質(zhì)體都有更強(qiáng)的DPPH自由基清除能力，且薏苡仁油脂質(zhì)體的抗氧化能力更強(qiáng)，β-胡蘿卜素憑其特有的共軛結(jié)構(gòu)也能夠有效清除DPPH自由基，而薏苡仁油富含亞油酸、油酸等不飽和脂肪酸，其不飽和共價(jià)鍵能夠與DPPH自由基發(fā)生反應(yīng)而消除自由基[23]，同時(shí)，復(fù)合脂質(zhì)體的DPPH自由基清除能力比單一的脂質(zhì)體都強(qiáng)，且隨著薏苡仁油含量的升高，DPPH自由基清除能力明顯增強(qiáng)，說明將β-胡蘿卜素與薏苡仁油復(fù)合能夠提高體系的抗氧化能力。

圖9 L（CG）、L（cso）、L（β-c）、L（β-c+cso）1∶1、L（β-c+cso）1∶5、L（β-c+cso）1∶10 的DPPH 自由基清除能力Fig.9 DPPH radical-scavening activity of L（CG），L（cso），L（β-c），L（β-c+cso）1∶1，L（β-c+cso）1∶5 and L（β-c+cso）1∶10

3 結(jié)論

本試驗(yàn)通過Box-Behnken響應(yīng)面法優(yōu)化出β-胡蘿卜素-薏苡仁油復(fù)合脂質(zhì)體的最佳制備工藝條件為：制備溫度43℃，卵磷脂與膽固醇質(zhì)量比7∶1，PBS緩沖液的體積為25 mL，該條件下β-胡蘿卜素的包封率的理論值為84.39%，與實(shí)際值81.22%基本一致，模型方程高度顯著，擬合性良好。表征結(jié)果顯示復(fù)合脂質(zhì)體的平均粒徑為（187.9±7.5）nm，多分散系數(shù)為 0.104±0.09，平均Zeta電位為 （-29.33±4.77）mV其形態(tài)分布均勻，有脂質(zhì)體特有的清晰的紋理結(jié)構(gòu)，且較單一的β-胡蘿卜素脂質(zhì)體而言，其分布狀況更好。DPPH試驗(yàn)顯示復(fù)合脂質(zhì)體清除DPPH自由基的能力隨著薏苡仁油含量的提高而明顯增強(qiáng)，說明將二者復(fù)合能夠有效提高體系的氧化穩(wěn)定性。

本研究將為新型的復(fù)合脂質(zhì)體的制備奠定一定的理論基礎(chǔ)，同時(shí)將為類胡蘿卜素與植物油的共同利用提供依據(jù)。