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        關(guān)黃柏和川黃柏黃酮含量及抗氧化性的比較分析

        2019-12-30 08:08:12李鐵純潘慧敏叔思宇王嘉琦寧彩琳回瑞華
        關(guān)鍵詞:甲酰苯三酚抗氧化性

        李鐵純,潘慧敏,叔思宇,王嘉琦,寧彩琳,回瑞華

        (鞍山師范學(xué)院 化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院,遼寧 鞍山 114007)

        關(guān)黃柏為蕓香科植物黃檗的干燥樹皮,主產(chǎn)于長(zhǎng)江以北的遼寧、吉林、黑龍江、內(nèi)蒙古、河北等??;川黃柏為蕓香科植物黃皮樹的干燥樹皮,主要產(chǎn)于長(zhǎng)江以南的四川、貴州、云南、廣西、湖南等省.關(guān)黃柏厚2~4 mm,川黃柏厚3~7 mm.兩種黃柏均具有氣微、味極苦、嚼之有黏性等特點(diǎn).

        目前關(guān)于黃柏化學(xué)成分的研究,特別是關(guān)于關(guān)黃柏中黃酮的報(bào)道較多[1-4].黃酮類化合物是一種天然的抗氧化劑,具有清除人體中超氧離子自由基、抗衰老、增加機(jī)體免疫力的生理活性作用.通常認(rèn)為關(guān)黃柏、川黃柏有著相同的功效和組成,而關(guān)于關(guān)黃柏和川黃柏中黃酮含量和抗氧化性的比較研究少見報(bào)道.

        1 儀器與材料

        1525-2996液相色譜儀(美國(guó)Waters公司);KQ-250B型超聲波清洗器(昆山市超聲波儀器有限公司);IFFM-D型流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光儀(西安瑞邁電子科技有限公司);AL-204 電子天平(梅特勒-托利多);HX-200A型華西高速中藥粉碎機(jī)(浙江永康溪岸五金藥具廠).

        甲醇(色譜純)、乙腈(色譜純)、磷酸(色譜純)、無水乙醇(分析純)、鹽酸(分析純)、鄰苯三酚(分析純,貴州遵義市第二化工廠),碳酸鈉及碳酸氫鈉 (分析純),3-氨基苯二甲酰肼(分析純,陜西師范大學(xué)),水為二次蒸餾水.蘆丁(標(biāo)準(zhǔn)品,中國(guó)藥品生物制品鑒定所).關(guān)黃柏和川黃柏購(gòu)于鞍山某藥房,粉碎后過孔徑0.45 mm篩備用.

        2 方法與結(jié)果

        2.1 關(guān)黃柏和川黃柏中黃酮的提取

        分別取2.00 g川黃柏和關(guān)黃柏樣品于錐形瓶中,精密加入甲醇與15%鹽酸混合溶液(4∶1(V∶V))50 mL,水浴回流1 h,放冷至室溫,濾液過0.45 μm濾膜備用.

        2.2 關(guān)黃柏和川黃柏中黃酮的測(cè)定

        2.2.1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液 準(zhǔn)確稱取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品10.4 mg于50 mL容量瓶中,以80%乙醇溶液定容至刻度,作為貯備液.

        2.2.2 色譜條件 色譜柱:Kromasil C18柱(150 mm×4.6 mm,5 μm);流動(dòng)相:甲醇與0.08%磷酸混合溶液(35∶65(V∶V));檢測(cè)波長(zhǎng)280 nm;柱溫30 ℃;流速1.0 mL/min;進(jìn)樣量10 μL.

        2.2.3 測(cè)定方法的確定 精確移取經(jīng)2.1制備的川黃柏和關(guān)黃柏樣品溶液,按2.2.2的色譜條件進(jìn)行測(cè)定.

        再取經(jīng)2.2.1配制的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液在2.2.2色譜條件下進(jìn)樣分析,結(jié)果表明:標(biāo)準(zhǔn)品蘆丁的保留時(shí)間為24.0 min,樣品在相同的保留時(shí)間出現(xiàn)吸收峰,樣品的紫外吸收與標(biāo)準(zhǔn)品蘆丁的紫外吸收相同,從而確定可以用蘆丁作為黃柏中黃酮的標(biāo)準(zhǔn)品.

        圖1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

        2.2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 將2.2.1蘆丁標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液用甲醇精確稀釋至2.6,5.2,10.4,20.8,41.6 μg/mL并定容至10 mL容量瓶.

        本文針對(duì)機(jī)動(dòng)目標(biāo)跟蹤,基于降維CKF,線性簡(jiǎn)化CKF [9],采用時(shí)變Markov轉(zhuǎn)移概率IMM算法,設(shè)計(jì)了交互式多模型降維容積卡爾曼濾波算法( IMM-RDCKF),提高了算法的魯棒性和估計(jì)精度。仿真表明,計(jì)算量約為IMM-CKF的一半,僅比IMM-EKF增加約30%,目標(biāo)跟蹤精度提升,便于工程應(yīng)用。尤其是勻速運(yùn)動(dòng)速度估計(jì)精度提升約27%。這對(duì)于預(yù)警探測(cè)、火力控制、指揮控制等軍事應(yīng)用領(lǐng)域具有非常重要的意義。

        按2.2.2色譜條件,分別進(jìn)樣測(cè)定,以樣品濃度C為橫坐標(biāo),峰面積A為縱坐標(biāo)作圖,線性回歸方程和標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖1所示.

        其線性回歸方程為y=268 585x-10 434,相關(guān)系數(shù)γ=0.996 9.

        2.2.5 精密度試驗(yàn) 按2.2.2的色譜條件,對(duì)同一濃度的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液進(jìn)行7次測(cè)定,得到其在測(cè)定波長(zhǎng)下的峰面積,求其變異系數(shù)為0.63%.

        2.2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取按2.1提取的川黃柏和關(guān)黃柏提取液,過0.45 μm濾膜后,在2.2.2色譜條件下分別在1,2,3,4,5,6 h間隔內(nèi)進(jìn)行HPLC測(cè)定,由色譜峰相對(duì)峰面積計(jì)算其RSD為1.06%,結(jié)果表明該方法穩(wěn)定性良好.

        2.2.7 回收率實(shí)驗(yàn) 按2.2.2的色譜條件,用2.2.1配制的蘆丁儲(chǔ)備液對(duì)關(guān)黃柏和川黃柏進(jìn)行加標(biāo)實(shí)驗(yàn),分別加入不同量的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品,在測(cè)定波長(zhǎng)下測(cè)定峰面積,回收率如表1所示.

        表1 回收率實(shí)驗(yàn)

        由表1可知,川黃柏的回收率為92.4%~106.8%;關(guān)黃柏的回收率為90.2%~98.4%.

        2.2.8 樣品測(cè)定 取2.1提取的川黃柏和關(guān)黃柏提取液,過0.45 μm濾膜后在2.2.2色譜條件下進(jìn)樣,對(duì)樣品進(jìn)行3次平行測(cè)定,結(jié)果如表2所示.

        表2 高效液相色譜樣品測(cè)定

        由表2可知,川黃柏中黃酮含量為0.401 4 mg/g,關(guān)黃柏中黃酮含量為0.236 mg/g.

        2.3 流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光法測(cè)定川黃柏和關(guān)黃柏的抗氧化性

        2.3.1 鄰苯三酚-碳酸鹽緩沖溶液-3-氨基苯二甲酰肼發(fā)光體系的確定 在試管中分別加入5×10-5mol/L的鄰苯三酚溶液、pH為9.95的碳酸鹽緩沖溶液(含濃度為0.2 mmol/L的3-氨基苯二甲酰肼),由流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光儀測(cè)定鄰苯三酚-碳酸鹽緩沖溶液-3-氨基苯二甲酰肼發(fā)光體系的發(fā)光[7-8],測(cè)定3次,取平均值進(jìn)行計(jì)算.

        2.3.2 抗氧化性測(cè)定及抑制率計(jì)算 按2.3.1確定的發(fā)光體系,測(cè)定一系列濃度川黃柏和關(guān)黃柏樣品溶液抑制后的發(fā)光,分別測(cè)定3次,同樣取平均值進(jìn)行計(jì)算.發(fā)光強(qiáng)度以計(jì)數(shù)表示.以鄰苯三酚-碳酸鹽緩沖溶液-3-氨基苯二甲酰肼發(fā)光體系的發(fā)光強(qiáng)度為空白發(fā)光峰值,可計(jì)算出加入樣品后抑制發(fā)光的程度.

        抑制率%=(空白發(fā)光峰值-加樣品后的發(fā)光峰值)/空白發(fā)光峰值×100%

        2.3.3 抗氧化性的測(cè)定

        2.3.3.1 樣品溶液的配制 分別稱取經(jīng)粉碎過篩處理的川黃柏和關(guān)黃柏樣品1.00 g,加入25 mL水,于室溫水浴超聲15 min,過濾,濾液用水定容至50 mL.

        2.3.3.2 樣品抗氧化性的測(cè)定 從2.3.4配制的樣品液中吸取不同梯度量的樣品于25 mL容量瓶中,用水定容至刻度,配成不同濃度的測(cè)定液.在鄰苯三酚-碳酸鹽緩沖溶液-3-氨基苯二甲酰肼發(fā)光體系中測(cè)定樣品的抗氧化性結(jié)果如圖2、圖3.

        圖2 關(guān)黃柏抗氧化性測(cè)定 圖3 川黃柏抗氧化性測(cè)定

        由圖2可知,川黃柏抑制率50%對(duì)應(yīng)的濃度為0.64 mg/mL.由圖3可知,關(guān)黃柏抑制率50%對(duì)應(yīng)的濃度為0.76 mg/mL.

        3 討論

        實(shí)驗(yàn)表明川黃柏和關(guān)黃柏中都含有豐富的黃酮類化合物,川黃柏中黃酮含量為0.401 4 mg/g,關(guān)黃柏中黃酮含量為0.236 mg/g,川黃柏中黃酮含量大于關(guān)黃柏中黃酮含量.

        黃酮類化合物是一種天然的抗氧化劑,由于川黃柏和關(guān)黃柏中都含有豐富的黃酮,因此它們都具有較強(qiáng)的抗氧化性能.經(jīng)測(cè)定,川黃柏抗氧化性的IC50(抑制率為50% 時(shí)的溶液的濃度)為0.64 mg/mL,關(guān)黃柏抗氧化性的IC50為0.76 mg/mL,川黃柏抗氧化性大于關(guān)黃柏抗氧化性.

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