叢 恒

（蘇州市水產(chǎn)技術(shù)推廣站，江蘇蘇州 215106）

副溶血性弧菌（Vibrio parahaemolyticus） 為桿菌，革蘭氏染色為陰性，是一種海洋嗜鹽性細(xì)菌，普遍生長在近海海水、海底的沉積物、海產(chǎn)品及其鹽漬品中，是我國沿海居民食物中毒、急性腹瀉的主要致病菌，在夏秋兩季尤為高發(fā)[1]，在中國位居食源性疾患的前3位[2]。據(jù)報道，2016年江蘇省淡水產(chǎn)品養(yǎng)殖環(huán)節(jié)受副溶血性弧菌檢出率為3.4%，提示副溶血性弧菌亦會污染淡水產(chǎn)品[3]。

該能力驗證組織方為中國檢科院，計劃編號ACAS-PT530(2018)。

1 材料與方法

1.1 試驗樣品

樣品編號分別為18-R696，18-T441。樣品保存于西林瓶中，真空狀態(tài)。

1.2 培養(yǎng)基、試劑及儀器

3%氯化鈉堿性蛋白胨水（3%APW）、硫代硫酸鹽-檸檬酸鹽-膽鹽-蔗糖（TCBS）、弧菌顯色培養(yǎng)基、3%氯化鈉胰蛋白胨大豆瓊脂（3%TSA）、3%氯化鈉三糖鐵瓊脂（3%TSI）、嗜鹽性試驗培養(yǎng)基、3%氯化鈉甘露醇、3%氯化鈉賴氨酸脫羧酶、3%氯化鈉MR-VP、3%氯化鈉、氧化酶，北京陸橋技術(shù)有限責(zé)任公司提供；弧菌顯色培養(yǎng)基，法國科瑪嘉公司提供。

SILVER型Masticator均質(zhì)器（拍擊式），西班牙IUL公司產(chǎn)品。

1.3 試驗方法

前處理按照組織方下發(fā)的作業(yè)指導(dǎo)書，后續(xù)檢測依據(jù)GB 4789.7—2013《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗副溶血性弧菌檢驗》[4]。

1.3.1 樣品前處理

在潔凈室的生物安全柜中打開存放樣品的西林瓶，無菌操作取25 mL樣品于均質(zhì)袋內(nèi)，倒入225 mL 3%APW，拍擊式均質(zhì)器拍擊1 min。于36±1℃生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)16 h。

考慮到試驗為能力驗證樣品，為保證在結(jié)果判斷時更為準(zhǔn)確，在檢測時同步接種了副溶血性弧菌標(biāo)準(zhǔn)菌株作為陽性對照。

1.3.2 劃線分離

用一次性無菌接種環(huán)取一環(huán)增菌液，分別劃線接種于TCBS及弧菌顯色培養(yǎng)基中，于36±1℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)20 h。分別觀察平板上有無菌落生長，如有是否可疑。

1.3.3 純培養(yǎng)

挑取可疑菌落劃線接種至3%TSA平板，于36±1℃下培養(yǎng)20 h，用于后續(xù)鑒定試驗。

1.3.4 初步鑒定

選取可疑菌落進(jìn)行氧化酶、革蘭氏染色、三糖鐵及嗜鹽性試驗。

1.3.5 確定試驗

取1.3.3純培養(yǎng)物分別接種至3%氯化鈉的甘露醇、賴氨酸脫羧酶、精氨酸脫羧酶、鳥氨酸脫羧酶、明膠、脲酶、VP、42℃生長、蔗糖、D-纖維二糖、乳糖、阿拉伯糖、D-甘露糖、D-甘露醇，于36±1℃下培養(yǎng)48 h。

2 結(jié)果與分析

2.1 劃線分離結(jié)果

增菌后劃線分離結(jié)果為樣品18-R696在TCBS上可疑副溶血性弧菌，在弧菌顯色培養(yǎng)基上不可疑，18-T441無菌落生長。

副溶血性弧菌樣品在不同培養(yǎng)基上的菌落特征見表1。

表1 副溶血性弧菌樣品在不同培養(yǎng)基上的菌落特征

雖然樣品18-R696在弧菌顯色培養(yǎng)基上為非典型副溶血性弧菌，但作為能力驗證樣品應(yīng)更加謹(jǐn)慎對待，不可在平板分離這一步就將其排除。故將18-R696在TCBS上的可疑菌落進(jìn)行后續(xù)鑒定。

2.2 初步鑒定

18-R696在TCBS上的可疑菌落經(jīng)初步鑒定后符合副溶血性弧菌結(jié)果，無法排除。

可疑菌落純化后的初步鑒定結(jié)果見表2。

表2 可疑菌落純化后的初步鑒定結(jié)果

2.3 確定試驗結(jié)果

根據(jù)確定試驗的生化結(jié)果顯示，18-R696的可疑菌落為創(chuàng)傷弧菌，與副溶血性弧菌標(biāo)準(zhǔn)菌株結(jié)果有差異。

可疑菌落純化后的初步鑒定結(jié)果見表3。

3 結(jié)論

副溶血性弧菌是引起我國尤其東南沿海地區(qū)食物中毒的主要致病菌之一[5]，據(jù)報道，副溶血性弧菌不僅會污染海產(chǎn)品，在淡水產(chǎn)品中亦存在[6]。對此問題不容小視，在水產(chǎn)技術(shù)推廣過程中，進(jìn)一步注重水產(chǎn)品質(zhì)量安全，加強(qiáng)水域環(huán)境監(jiān)測與水產(chǎn)品可追溯體系建設(shè)。

表3 可疑菌落純化后的初步鑒定結(jié)果

能力驗證已成為認(rèn)可機(jī)構(gòu)加入和維持國際相互承認(rèn)協(xié)議（MRS） 的一項必要條件[7]，無論是在日常檢測或者參加能力驗證，對于結(jié)果的判讀均應(yīng)謹(jǐn)慎，通過此次能力驗證發(fā)現(xiàn)，顯色培養(yǎng)基對于結(jié)果的判定有很大幫助，特異性較強(qiáng)，在檢測過程中可增加顯色培養(yǎng)基的使用比例。