陳 嬋,黃 靖,陳曉波,賴騰強
(福建農(nóng)業(yè)職業(yè)技術學院,福建福州 350119)
2018年我國銀耳鮮品年產(chǎn)量已超35×104t,占全球產(chǎn)量的90%以上,并每年以10%的速度增長[1-2]。銀耳已成為古田縣生產(chǎn)規(guī)模及產(chǎn)量最大、生態(tài)效益且發(fā)展前景最好的品種之一。銀耳蒂頭是銀耳加工過程中產(chǎn)生的菌渣廢料,據(jù)估算,一個食用菌加工廠正常每天可產(chǎn)生200~300 kg的銀耳蒂頭等廢料。由此可見,每年產(chǎn)生的銀耳蒂頭等菌渣廢料數(shù)量巨大。隨著銀耳栽培規(guī)模的不斷擴大,產(chǎn)生的銀耳蒂頭栽培廢料越來越多且難以處置。若將銀耳蒂頭和栽培廢料隨意丟棄、焚燒或直接傾倒入河流等水體中,不僅造成了生物質(zhì)資源的浪費,也給周邊的生產(chǎn)和生活環(huán)境帶來嚴重的潛在危害[3]。
多糖是銀耳的主要成分,也是最有效、最富活性的重要成分之一。大量研究結(jié)果證明,銀耳多糖具有清除自由基、抗氧化[4-5]、調(diào)節(jié)免疫功能[6]、抗腫瘤[7]、降血糖[8]、抗輻射[9]、抗凝血[10]、抗?jié)僛11]、降血脂[12]、抗病毒[13]、延緩衰老等功效[14-15]。目前,銀耳多糖的提取多采用整朵銀耳干制后粉碎,銀耳多糖的提取方法有熱水浸提法、酶提法、超聲波提取法、高壓脈沖電場輔助提取法等方式[16-19],單以銀耳加工中廢棄的銀耳蒂頭為研究對象未見相關報道。以銀耳蒂頭為原料,研究超聲波對銀耳蒂頭多糖的提取,得出銀耳蒂頭多糖的最佳提取工藝,試驗提供了銀耳蒂頭菌渣資源的高值化合理利用新途徑,促進銀耳產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展,并對我國銀耳產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展意義重大。
銀耳蒂頭,福建省祥云生物科技發(fā)展有限公司提供。葡萄糖、95%乙醇、苯酚、硫酸,均為分析純。
BL1025A型多功能料理機,廣東美的生活電器制造有限公司產(chǎn)品;RE-52A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器,上海亞榮生化儀器廠產(chǎn)品;101-2型鼓風干燥箱,上海浦東榮豐科學儀器有限公司產(chǎn)品;KQ-300VDV型三頻數(shù)控超聲波清洗機,昆山超聲儀器有限公司產(chǎn)品;TDL-5型低速臺式大容量離心機,上海安亭科學儀器廠產(chǎn)品;722s型可見分光光度計,上海精密科學儀器有限公司產(chǎn)品。
1.3.1 銀耳蒂頭多糖含量的測定方法[20]
采用苯酚硫酸法時,精確稱取經(jīng)干燥至恒質(zhì)量的標準葡萄糖20 mg,用蒸餾水定容至500 mL,分別吸取 0,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0,1.2,1.4,1.6,1.8 mL,分別加蒸餾水補至2.0 mL,加入質(zhì)量分數(shù)6%苯酚溶液1.0 mL,再快速加入5.0 mL濃硫酸,顯色后用冷水冷卻,于波長490 nm處測定吸光度,以零管作空白對照。得線性方程:Y=0.398 6X+0.199 4,R2=0.999 1。
根據(jù)銀耳蒂頭提取液中多糖的含量,取適宜濃度樣品液1.0 mL按1.3.1操作,測吸光度,并以上述標準曲線計算多糖含量。
1.3.2 銀耳蒂頭粗多糖的超聲波提取工藝流程
將新鮮銀耳蒂頭烘干至恒質(zhì)量,粉碎,40目過篩。過篩后的銀耳蒂頭粉以料液比為1∶40~1∶100加入50℃蒸餾水浸泡10 min,按提取溫度為50~80℃,超聲功率為40~80 W的條件提取20~80 min,將提取后的樣品液離心15 min(轉(zhuǎn)速3 000 r/min),取上清液定容至100 mL,稀釋至一定濃度后測定銀耳多糖的含量,計算銀耳多糖得率。計算公式如下:
式中:C——經(jīng)過稀釋后測定并計算出的銀耳蒂頭多糖含量,μg;
V1——銀耳蒂頭提取后得到的上清液體積,mL;
N——銀耳蒂頭提取液的稀釋倍數(shù);
V2——用于測定多糖含量時的上清液體積,mL;
m——用于提取的銀耳蒂頭質(zhì)量,mg。
1.3.3 單因素試驗及正交試驗
單因素試驗因素與水平設計見表1。
表1 單因素試驗因素與水平設計
根據(jù)單因素試驗結(jié)果選定因素及水平進行正交試驗,確定超聲波提取銀耳蒂頭粗多糖的最佳工藝參數(shù)。
1.3.4 驗證試驗
準確稱取1 g銀耳蒂頭5份,以正交試驗得出的最佳提取工藝進行5次平行驗證試驗,并按照1.3.2中的試驗方法進行粗多糖含量的測定,得出驗證試驗結(jié)果。
1.3.5 數(shù)據(jù)分析
應用DPS數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)對試驗數(shù)據(jù)進行分析。
精確稱取1 g的銀耳蒂頭粉,分別選用料液比為1∶60,1∶70,1∶80,1∶90,1∶100 在超聲功率50 W連續(xù)提取1 h,溫度設置為50℃,研究料液比對銀耳蒂頭中粗多糖提取率的影響。
料液比對銀耳蒂頭粗多糖提取率的影響見圖1。
圖1 料液比對銀耳蒂頭粗多糖提取率的影響
由圖1可知,料液比對銀耳蒂頭粗多糖提取率有較大的影響,隨著料液比的增加提取率先增后減,料液比為1∶80時,銀耳蒂頭粗多糖的提取率達到最高,當料液比超過1∶80時銀耳蒂頭粗多糖的提取率略有下降。
準確稱取銀耳蒂頭粉各1 g,在料液比為1∶80,超聲功率50 W,提取溫度為50℃時分別提取20,40,60,80,100 min,考查超聲提取時間對銀耳蒂頭中粗多糖提取率的影響。
提取時間對銀耳蒂頭粗多糖提取率的影響見圖2。
圖2 提取時間對銀耳蒂頭粗多糖提取率的影響
由圖2可知,超聲波連續(xù)提取時間為60 min后,銀耳蒂頭多糖的提取率明顯提高,在提取時間為80 min時,提取率達到32.63%,隨著提取時間延長,提取率反而下降??赡苁怯捎诔暡栈饔眉皬姸?,短時間有助于水溶性多糖物質(zhì)的提取,而長時間的超聲波可造成水溶性的其他物質(zhì)溶出,反而造成水溶性多糖物質(zhì)的降解。
準確稱取銀耳蒂頭粉各1 g,料液比1∶80,功率50 W,溫度為40,50,60,70,80℃時提取1 h,考查提取超聲溫度對銀耳蒂頭粗多糖提取率的影響。
提取溫度對銀耳蒂頭粗多糖提取率的影響見圖3。
圖3 提取溫度對銀耳蒂頭粗多糖提取率的影響
由圖3可知,提取溫度對銀耳蒂頭粗多糖的提取率有明顯的影響,提取溫度高有助于銀耳蒂頭粗多糖的提取。在超聲波條件下,溫度70℃時,提取率最高,銀耳粗多糖的提取率為36.11%。
準確稱取1 g銀耳蒂頭粉,選用超聲功率40,50,60,70,80 W時,料液比1∶80,浸提溫度70℃的條件下浸提1 h,研究超聲功率對銀耳蒂頭粗多糖提取率的作用。
超聲功率對銀耳蒂頭粗多糖提取率的影響見圖4。
圖4 超聲功率對銀耳蒂頭粗多糖提取率的影響
由圖4可知,超聲功率對銀耳蒂頭提取率影響不大,超聲功率60 W時,有利于銀耳蒂頭多糖的提取,當超聲功率超過60 W時,粗多糖提取率開始降低。
根據(jù)單因素試驗的結(jié)果,確定提取時間、超聲功率、提取溫度、料液比4種因素選用正交試驗表L9(34)進行試驗,得到銀耳蒂頭粗多糖的最佳提取條件。
正交試驗結(jié)果見表2。
表2 正交試驗結(jié)果
將正交試驗數(shù)據(jù)進行方差分析,以此來判斷上述因素對試驗結(jié)果的影響。
正交設計方差分析見表3。
表3 正交設計方差分析
由表3可知,料液比對銀耳蒂頭粗多糖的提取率影響最顯著,提取時間與提取溫度的影響為顯著。而超聲功率(顯著水平p>0.05) 無明顯顯著差異。采用超聲波提取銀耳蒂頭粗多糖,其最佳提取工藝條件為提取溫度70℃,超聲功率50 W,料液比1∶90,提取時間100 min。
按照上述試驗結(jié)果得出的條件A3B2C1D2進行5次平行試驗,取平均值,結(jié)果與正交試驗一致。銀耳蒂頭粗多糖的提取率達到36.38%,RSD值測定為0.84%,試驗結(jié)果穩(wěn)定,重現(xiàn)性好,所測數(shù)據(jù)準確,相對標準偏差小,表明超聲波提取銀耳蒂頭粗多糖工藝穩(wěn)定可行。
(1)銀耳蒂頭組織較緊密,不易干燥,不易煮爛,因此在加工中常作為菌渣廢料。研究表明,銀耳蒂頭含有豐富的多糖物質(zhì),可為其開發(fā)利用提供理論基礎。采用超聲波提取的銀耳蒂頭多糖的物理化學性質(zhì)、生物活性機理、功效因子還需進一步研究。
(2)與傳統(tǒng)的水提法相比,用超聲波提取銀耳蒂頭粗多糖可有效提高多糖的提取速率,減少銀耳蒂頭粗多糖的提取時間。正交試驗得到的最佳工藝條件為超聲波提取溫度70℃,超聲功率50 W,料液比1∶90條件下提取100 min時,提取率36.38%。