張成香，李世芬，環(huán) 飛，嚴(yán) 婷，朱雪峰

（南京醫(yī)科大學(xué)江蘇省醫(yī)藥農(nóng)藥獸藥安全評價與研究中心，公共衛(wèi)生學(xué)院，江蘇南京 211166）

人參、黃精、馬鹿茸、淫羊藿等是我國傳統(tǒng)的中藥材，它們的化學(xué)成分非常復(fù)雜，且具有增強(qiáng)體質(zhì)的功能。健體酒以人參、馬鹿茸、黃精、淫羊藿等為主要原料研制而成。按照我國衛(wèi)生部《保健食品檢驗(yàn)與評價技術(shù)規(guī)范》 （2003年版） 的要求，對受試物進(jìn)行安全性毒性試驗(yàn)，為進(jìn)一步研究提供了試驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動物和受試物

受試物是健體酒，它的人體推薦劑量為6 mL/人/日（16.7倍濃縮液，體重按60 kg計）；清潔級小鼠，揚(yáng)州大學(xué)比較醫(yī)學(xué)中心提供，生產(chǎn)許可證號SCXK（蘇） 2012-0004，合格證編號201601435；清潔級SD大鼠，上海西普爾-必凱實(shí)驗(yàn)動物有限公司提供，生產(chǎn)許可證號SCXK（滬） 2013-0016，合格證編號2008001660090。

1.2 方法

1.2.1 小鼠急性經(jīng)口毒性

用最大耐受量（MTD）法行小鼠急性毒性試驗(yàn)，設(shè)計劑量為25.200 g/kg·bw。動物檢疫3 d，試驗(yàn)前動物禁食16 h，可自由飲水。樣品直接采用16.7倍濃縮液進(jìn)行灌胃，樣品比重為1.26，按最大灌胃量（20 mL/kg·bw），一次性給樣，受試物給予劑量為25.200 g/kg·bw。給樣后連續(xù)觀察14 d，觀察小鼠中毒表現(xiàn)及死亡情況。

1.2.2 遺傳毒性試驗(yàn)

（1） Ames試驗(yàn)。鼠傷寒沙門氏菌突變型菌株TA97，TA98，TA100，TA102為試驗(yàn)?zāi)Ｐ汀；罨到y(tǒng)是多氯聯(lián)苯誘導(dǎo)的大鼠肝S-9。S-9以5 000，1 000，200，40，8 μg/皿5組活化并試驗(yàn)，每個劑量組重復(fù)6次，采用平板摻入法。

（2）小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)。試驗(yàn)取用60只成年健康ICR小鼠，按體重隨機(jī)分為6組，每組10只，雌雄各半。受試物按15%乙醇的酒基配制，高、中、低劑量組分別含受試物（預(yù)處理濃縮液）質(zhì)量分?jǐn)?shù)為100%，50%，25%，以10 mL/kg·bw灌胃，使用30 h給受試物法。30 h后，常規(guī)制片，固定染色。每只鼠統(tǒng)計200個嗜多染紅細(xì)胞和成熟紅細(xì)胞數(shù)（NCE），并計算嗜多染紅細(xì)胞與成熟紅細(xì)胞比值（PCE/NCE）。

（3） 小鼠精子畸形試驗(yàn)。選取體重25～35 g ICR種的清潔級性成熟雄性小鼠30只，適應(yīng)環(huán)境3 d后進(jìn)行試驗(yàn)。隨機(jī)分為6組，每組5只小鼠。受試樣品用15%乙醇的酒基配制，低、中、高劑量組分別含受試樣品（預(yù)處理濃縮液） 質(zhì)量分?jǐn)?shù)為25%，50%，100%，以10 mL/kg·bw連續(xù)5 d灌胃，每天1次。于第35天處死小鼠，制備精子涂片并計算小鼠精子畸形發(fā)生率。

1.2.3 30 d喂養(yǎng)試驗(yàn)

SD大鼠100只隨機(jī)分為5組，每組20只，雌雄各半。根據(jù)受試樣品供應(yīng)方提供的人體推薦劑量，分為3.0，6.5，10.0 mL/kg這3個劑量組，另設(shè)空白對照組（0 mL/kg，無菌水） 和溶劑對照組（0 mL/kg，含15%乙醇酒基）。試驗(yàn)30 d期間，動物可自由飲水進(jìn)食，每天至少觀察動物1次，每周稱重1次、檢測2次食物攝入量。30 d后，處死試驗(yàn)大鼠，并行常規(guī)血液學(xué)檢查和血液生化學(xué)檢查。取腎臟、肝臟、脾臟、卵巢或睪丸等臟器，計算臟器系數(shù)；取高劑量及對照組的大鼠脾臟、肝臟、胃、腎臟、十二指腸、睪丸或卵巢，組織固定后制成石蠟切片行組織病理學(xué)檢查。

1.2.4 統(tǒng)計分析方法

統(tǒng)計軟件為SPSS23.0，微核試驗(yàn)結(jié)果采用Poisson分布U檢驗(yàn)統(tǒng)計。滿足方差齊要求的數(shù)據(jù)，用單因素方差分析方法中的多個試驗(yàn)組與一個對照組間均數(shù)的兩兩比較方法統(tǒng)計；非正態(tài)分布或方差不齊的數(shù)據(jù)，進(jìn)行變量轉(zhuǎn)換后統(tǒng)計；仍然不齊則用秩和檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 小鼠急性毒性試驗(yàn)

健體酒雌、雄性小鼠急性經(jīng)口MTD＞25.2 g/kg·bw，根據(jù)急性毒性劑量分級標(biāo)準(zhǔn)，該樣品屬于無毒級。

2.2 小鼠Ames試驗(yàn)

該受試樣本對鼠傷寒沙門氏菌TA97，TA98，TA100，TA102這4株試驗(yàn)菌株，在加與不加活化系統(tǒng)S-9的情況下，均未見致基因突變的作用，即污染物致突變性檢測（Ames試驗(yàn)）結(jié)果為陰性。

2.3 小鼠骨髓微核試驗(yàn)

受試樣品的各劑量組微核率與陰性對照組相比，無顯著差異（p＞0.05），而陽性對照組則顯著高于陰性對照組（p＜0.01）。未見健體酒對小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核形成及嗜多染紅細(xì)胞與成熟紅細(xì)胞比值（PCE/NCE） 產(chǎn)生影響。

2.4 小鼠精子畸形試驗(yàn)

各劑量組精子畸形率與陰性對照組比較，無顯著差異（p＞0.05），而陽性對照組的小鼠精子畸形率較陰性對照組有顯著提高（p＜0.01）。因此，受試物對小鼠精子畸形率不產(chǎn)生影響。

2.5 大鼠30 d喂養(yǎng)試驗(yàn)

2.5.1 健體酒對大鼠體重的影響

受試樣品各劑量組雌、雄大鼠的體重增長情況良好，與對照組比較均無顯著差異。各劑量組雌、雄大鼠的增重、進(jìn)食量及食物利用率與對照組比較差異均無顯著性。結(jié)果表明，該健體酒對大鼠體重增長、進(jìn)食量及食物利用率均未見明顯影響。

2.5.2 健體酒對大鼠血液和血生化的影響

受試樣品各劑量組大鼠的血液生化學(xué)指標(biāo)均在正常參考范圍內(nèi)，與對照組比較，均無統(tǒng)計學(xué)差異（p＞0.05）。

健體酒對大鼠血液學(xué)指標(biāo)的影響（X±SD） 見表1，健體酒對大鼠部分血生化的影響（X±SD）見表2。

2.5.3 健體酒對大鼠臟器絕對重量及相對重量的影響

各劑量組的各項(xiàng)指標(biāo)與0 mL/kg·bw/d（溶劑對照組） 比較，均無統(tǒng)計學(xué)差異（p＞0.05）。空白對照組與溶劑對照組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（p＞0.05）。

健體酒各組大鼠臟器絕對質(zhì)量及相對質(zhì)量（X±SD） 見表 3。

2.5.4 病理學(xué)檢查

試驗(yàn)各組大鼠整體解剖均未見結(jié)構(gòu)異常。顯微鏡觀察結(jié)果顯示，未見由該受試樣品引起的腎、肝、胃、脾、十二指腸、睪丸或卵巢臟器毒性病理性改變。

因此，在試驗(yàn)條件下，大鼠30 d喂養(yǎng)試驗(yàn)各項(xiàng)指標(biāo)均無異常，給予動物人體推薦劑量100倍的健體酒，未觀察到有害作用。

3 結(jié)論

健體酒是按一定比例將人參、馬鹿茸、淫羊藿等提取物混合研制而成。人參是多年生的草本植物，味甘微苦性溫，是中藥中的珍品。人參皂苷為人參的主要活性成分，已被證明有提高免疫力、抗腫瘤、抗氧化、降低血糖、健胃、保護(hù)心血管等功能[1-5]，且適合長期服用。已有的研究證明，鹿茸含有多種人體必需的氨基酸、磷脂及微量元素[6]。鹿茸血酒可增加有氧代謝能力和乳酸代謝，并增加肝糖原的儲備量。鹿茸血酒的抗疲勞作用與肝糖原的儲備直接相關(guān)。肝糖原儲備的增加可在較長時間里維持血糖水平，從而為機(jī)體提供更多的能量。在進(jìn)行劇烈體力活動后，鹿茸血酒可降低糖原的消耗利用，進(jìn)而增強(qiáng)體能和耐力，緩解體力疲勞[7]。淫羊藿含有多糖、黃酮類、萜類化合物及微量元素等多種活性物質(zhì)，具有強(qiáng)筋骨、補(bǔ)腎壯陽、祛風(fēng)除濕的功效。已有文獻(xiàn)表明，淫羊藿苷對于提高大鼠運(yùn)動能力有促進(jìn)作用[8]，且具有調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、抗腫瘤、防治骨質(zhì)疏松等作用[9-11]。

表1 健體酒對大鼠血液學(xué)指標(biāo)的影響（X±SD）

表2 健體酒對大鼠部分血生化的影響（X±SD）

表3 健體酒各組大鼠臟器絕對質(zhì)量及相對質(zhì)量（X±SD）

小鼠急性毒性試驗(yàn)是評價藥物安全性的一項(xiàng)重要指標(biāo)，污染物致突變性檢測（Ames試驗(yàn)）、小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)和小鼠精子畸形試驗(yàn)是評估遺傳毒性試驗(yàn)的重要指標(biāo)，而大鼠30 d喂養(yǎng)試驗(yàn)則用來評估受試物的短期毒性[12-14]。結(jié)果表明，健體酒屬于無毒級，同時未觀察到有致突變作用，30 d喂養(yǎng)對大鼠各觀察指標(biāo)均未產(chǎn)生明顯影響。因此，在推薦劑量內(nèi)服用健體酒是安全可靠的，該產(chǎn)品在保健食品開發(fā)領(lǐng)域具有較好的前景。