陳學艷，張敏娟，魏文芝，張耀元，阿玉梅

復方龍膽碳酸氫鈉片是由碳酸氫鈉、大黃膏（粉）、龍膽膏（粉）、丁香油、薄荷油和適宜的輔料組成的復方制劑，用于胃酸過多、食欲不振、消化不良。組方中的大黃具有清熱解毒、活血祛瘀等功效[1]，可作用于胃覺感受器和胃黏膜，在碳酸氫鈉中和過多胃酸后起到增加食欲、促進消化的作用。大黃中蒽醌類衍生物，主要包括大黃素、大黃酚、蘆薈大黃素、大黃素甲醚、大黃酸等[2]，研究發(fā)現(xiàn)，大黃所含的蒽醌類衍生物具有調節(jié)胃腸道蠕動、促進胃排空等作用[3]。因此，大黃質量的優(yōu)劣直接影響該復方制劑的療效。本課題通過對比不同企業(yè)復方龍膽碳酸氫鈉片中大黃成分5種蒽醌苷的含量，對2018年流通領域抽檢的該品種進行質量評價研究。

1 材料與方法

1.1 儀器設備 Sartorius BS224S型及CP225D型電子天平；Waters e2695-2998型高效液相色譜儀；KQ-500DE型數(shù)控超聲儀；HH-S6數(shù)顯恒溫水浴鍋；98-1-C型數(shù)字控溫電熱套。

1.2 試藥 復方龍膽碳酸氫鈉片（分別來自編號為 A、B、C、D、E、F、G、H 的國內 8 家藥品企業(yè)）；大黃素、大黃酸、大黃酚、蘆薈大黃素、大黃素甲醚對照品由中國食品藥品檢定研究院提供；甲醇（HPLC級），水（超純水），其他試劑均為AR級。

1.3 檢測方法 采用甲醇超聲和酸回流法，提取復方龍膽碳酸氫鈉片中的游離大黃蒽醌和總蒽醌（結合型蒽醌水解后所得5種蒽醌苷元）。采用HPLC法測定大黃素、大黃酸、大黃酚、蘆薈大黃素、大黃素甲醚5種成分含量：流動相為甲醇-0.1%磷酸溶液（85∶15）；檢測器為二極管陣列，檢測波長：254 nm；柱溫 30 ℃；流速 1.0 ml/min；進樣量 20 μl。

1.4 統(tǒng)計學方法 采用Excel軟件，對檢測數(shù)據(jù)進行處理，應用SPSS23.0軟件進一步進行聚類分析。

2 結果

2.1 8家企業(yè)復方龍膽碳酸氫鈉片中大黃游離蒽醌含量測定結果 從表1可知，5種游離蒽醌指標成分中，大黃酚含量最高。D企業(yè)產(chǎn)品中未檢出游離蘆薈大黃素和游離大黃酸；E企業(yè)產(chǎn)品中游離蒽醌含量較其余廠家高。根據(jù)《中國藥典》2015版規(guī)定[4]，大黃藥材中游離蒽醌的含量限度為0.2%，大黃在復方龍膽碳酸氫鈉片中的處方占比為16.6%，計算得游離蒽醌在復方龍膽碳酸氫鈉片中的理論含量應為0.3320 mg/g。據(jù)此判定8家企業(yè)產(chǎn)品中，5家合格，3家不合格，合格率為62.5%。

2.2 8家企業(yè)復方龍膽碳酸氫鈉片中大黃總蒽醌含量測定結果 從表2可知，5中蒽醌苷元總體含量最高的仍為大黃酚，D企業(yè)產(chǎn)品中5批次均未檢出大黃酸。E企業(yè)產(chǎn)品中總蒽醌含量較其余廠家高。根據(jù)《中國藥典》2015版規(guī)定，大黃藥材中總蒽醌的含量限度為1.5%，大黃在復方龍膽碳酸氫鈉片中的處方占比為16.6%，計算得總蒽醌在復方龍膽碳酸氫鈉片中的理論含量應為2.4900 mg/g。據(jù)此判定：8家企業(yè)產(chǎn)品全部合格，合格率為100%。

2.3 不同企業(yè)產(chǎn)品的質量評價 復方龍膽碳酸氫鈉片為中西藥復方制劑，由4味藥材與碳酸氫鈉組成。中藥材（飲片）由于來源、產(chǎn)地、采收時間等不同，其內在質量差異較大。從上述結果得知，D企業(yè)蒽醌類含量較其他企業(yè)低，且未檢出游離蘆薈大黃素和大黃酸；5中蒽醌苷元中大黃酚對總蒽醌含量貢獻最大，屬于大量成分，其余4種苷元屬少量成分。各企業(yè)產(chǎn)品大黃蒽醌類含量數(shù)據(jù)較為離散，不易直觀地進行比較分析，因此，進一步采用聚類分析，將所有產(chǎn)品按各自屬性分為不同群類進行評價，結果見圖1。綜合大黃酸及總蒽醌含量對8家企業(yè)產(chǎn)品排名，由優(yōu)到劣依次為：E、G、H、F、A、C、B、D。

由圖1可知，可將8家企業(yè)產(chǎn)品按大黃成分中5種蒽醌類含量分為3類，第1類包括D、C、B、A 4個企業(yè)，此類樣品大黃蒽醌類總量較低，尤其是大黃酸和大黃素含量偏低；第2類包括C、A兩個企業(yè)的大黃蒽醌類含量較高樣品；第3類包括H、G、F、E 4個企業(yè)，此類樣品大黃蒽醌類總量較高，大黃酸和大黃素含量明顯高于第1類樣品。大黃酸含量較高的大黃藥材被稱作大黃酸型，評價為優(yōu)質大黃藥材[5]。因此，可認為上述第3類廠家投料使用的大黃藥材質量較佳，可起到更好地調節(jié)胃腸功能，增加食欲的作用[6]。相反，屬于第1類的產(chǎn)品，在療效上欠佳。

相關文獻報道[7]，偽品大黃與正品大黃在蒽醌苷總量上幾乎無太大差別，但偽品中大黃酸含量微少，幾乎沒有。提示上述第1類產(chǎn)品投料用大黃藥材的真?zhèn)沃档眠M一步驗證，尤其是D企業(yè)產(chǎn)品中均未檢出游離大黃酸，且有5批次經(jīng)水解后也未檢出大黃酸成分，因此，高度懷疑D企業(yè)有使用偽品或參偽的行為。A、C兩企業(yè)大黃蒽醌類含量批間差異較大，致使二者在聚類統(tǒng)計時分屬于第1類和第2類。此現(xiàn)象若排除生產(chǎn)工藝問題，有可能是投料用大黃由3種不同基源大黃混雜所導致。

2015年版《中國藥典》（一部）規(guī)定，大黃藥材應來源于蓼科植物掌葉大黃（Rheum palmatum L.）、唐古特大黃（Rheum tanguticum Maxim.ex Balf.）或藥用大黃（Rheum officinale Baill.），不同基源大黃質量存在較大差異，目前市場流通的大黃多為3種基源大黃的混雜品[8-10]，進而導致生產(chǎn)出的含大黃制劑在質量上的不穩(wěn)定。

表1 8家企業(yè)復方龍膽碳酸氫鈉片中大黃游離蒽醌含量測定結果(n=3)

表2 8家企業(yè)復方龍膽碳酸氫鈉片中大黃總蒽醌含量測定結果（n=3）

3 討論

目前，大黃藥材中已知的化學成分復雜多樣，且活性成分較多?！吨袊幍洹分袑⒋簏S素與大黃酚的含量測定結果作為含大黃制劑評價指標的品種較多，5個成分同時作為評價指標的品種較為少見[11]。而復方龍膽碳酸氫鈉片的現(xiàn)行質量標準中，對大黃組分的質量控制僅采用薄層色譜鑒別和大黃酚檢查。成分含量與藥效、毒性相關分析表明，大黃酸對大黃藥材整體的貢獻顯著大于大黃酚[12]，因此，有必要對大黃其他成分的含量加以控制。

含大黃制劑投料用藥材質量控制在正品大黃市場價較高時，存在生產(chǎn)企業(yè)用華北大黃、河套大黃、藏邊大黃等偽品替代投料的風險。正品大黃中的蒽醌苷類成分含量較高，偽品大黃中僅含微量蒽醌苷類成分[13]，且偽品大黃中含有特征性成分土大黃苷。本研究在后續(xù)試驗中已建立復方龍膽碳酸氫鈉片土大黃苷的測定方法，對偽品大黃進行了篩查，結果D企業(yè)的樣品中檢出了土大黃苷成分，結合其蒽醌苷類含量分析，可判定D企業(yè)存在使用大黃偽品投料的情況。

大黃屬于多基源藥材，且含大黃復方制劑生產(chǎn)工藝復雜，投料用大黃形式多樣，制劑中難以判斷大黃的來源。目前，多數(shù)含大黃復方制劑質量標準中對所含成分定性、定量項目設置不完善，不能客觀反映投料大黃的整體質量情況。本實驗通過同時控制大黃5種指標性成分的含量，運用適宜的統(tǒng)計分析方法，對來自8家企業(yè)的43批次復方龍膽碳酸氫鈉片的質量進行了評價研究，對含大黃復方制劑加強批間一致性控制，防止投料中參偽行為的發(fā)生，具有重要的參考意義。