胡安愷，姚立筠，趙悅伶，劉暢，王岳飛，徐平*

茯磚茶提取物對葡聚糖硫酸鈉誘導小鼠炎癥性腸病的保護作用研究

胡安愷1，姚立筠2，趙悅伶2，劉暢1，王岳飛2，徐平2*

1. 東北農(nóng)業(yè)大學食品學院乳品工程系，黑龍江 哈爾濱 150030；2. 浙江大學茶葉研究所，浙江 杭州 310058

茯磚茶是我國特有的一種黑茶。本文以茯磚茶為原料，分別制備了茯磚茶水提物（FWE）、經(jīng)95%乙醇沉后得到的醇溶物（FES）和醇沉物（FEP），并探究了3種提取物對葡聚糖硫酸鈉誘導小鼠炎癥性腸病的保護作用。研究表明，3種茯磚茶提取物都能夠減輕炎癥性腸病的腸道結構損傷，其中FWE組效果最好；同時茯磚茶提取物可以顯著提升小鼠血清和腸道組織上清液中超氧化物岐化酶（SOD）、過氧化氫酶（CAT）和谷胱甘肽（GSH）水平以及降低白細胞介素-6（IL-6）、白細胞介素-1β（IL-1β）和腫瘤壞死因子-α（TNF-α）水平，且作用效果均為FWE組＞FES組＞FEP組；在蛋白水平上，F(xiàn)WE組小鼠腸道組織的NF-κB p65蛋白水平有所降低；IκBα的蛋白水平在FWE組和FES組中有所增加；核因子E2相關因子2（Nrf2）和血紅素氧化酶-1（HO-1）的相關蛋白水平在FWE組和FES組也有所增加。綜上所述，茯磚茶提取物可以通過抗氧化和抗炎途徑對葡聚糖硫酸鈉誘導小鼠炎癥性腸病發(fā)揮預防保護作用。

茯磚茶；炎癥性腸?。↖BD）；炎癥；氧化應激

炎癥性腸?。↖nflammatory bowel disease，IBD）是世界范圍內(nèi)一種高發(fā)的疾病，主要包括克羅恩?。–rohn's disease，CD）和潰瘍性結腸炎（Ulcerative colitis，UC）[1]，其中最為常見的是潰瘍性結腸炎。潰瘍性結腸炎的主要特征是從結腸開始的粘膜炎癥，并且可以持續(xù)不斷地影響整個腸道。除了引發(fā)炎癥之外，常見的組織形態(tài)改變包括喪失杯狀細胞，破壞改變隱窩結構，以及輕微潰瘍[2]。慢性潰瘍性結腸炎不僅使患結腸癌的風險增加200%~800%，并且因其潛在的全身性炎癥，導致其與其他慢性疾病的發(fā)生有關，包括類風濕關節(jié)炎、強直性脊柱炎、銀屑病等[3]。研究表明IBD與結腸氧化應激和炎癥因子的增加以及腸道屏障功能的喪失相關聯(lián)[4]。已有研究發(fā)現(xiàn)結腸炎小鼠和IBD患者體內(nèi)，由腸道固有層免疫細胞分泌的IL-6（Interleukin-6，白細胞介素-6）、TNF（Tumor necrosis factor，腫瘤壞死因子）（多為TNF-α）的蛋白水平均明顯增加，表明細胞因子在IBD的發(fā)病機制中有著重要的作用[5]。

茶葉及其功能成分的抗氧化和抗炎功能使其具有防治IBD的可能。已有流行病學調查發(fā)現(xiàn)飲茶能減少潰瘍性結腸炎和克羅恩病的發(fā)病率[6-7]。同時，研究發(fā)現(xiàn)不同茶類（包括紅茶、綠茶、黑茶）可以通過抗氧化、抗炎和調節(jié)腸道微生物對小鼠結腸炎具有一定的防治作用[8]。然而，也有研究報道EGCG（Epigallocatechin gallate，表沒食子兒茶素沒食子酸酯）可能會加劇IBD小鼠的體重下降，這與EGCG可以抑制蛋白質、脂肪和碳水化合物的消化和吸收有關[9]。盡管茶葉對IBD存在潛在的防治作用，但不同茶類及其不同成分對IBD的作用存在差別。茯磚茶是我國特有的一類茶，其特點在于獨特的“發(fā)花”工藝，使得茯磚茶化學成分產(chǎn)生了不同于其他茶類的變化，造就了其獨特的品質特點。研究表明，茯磚茶及其多酚、多糖等提取物具有調節(jié)腸道菌群、降脂減肥[10-14]、保護肝臟[15]、防治腹瀉[16]等功效，茯磚茶能通過增強腸道組織修復、調節(jié)腸道微生物和抑制結腸炎癥等途徑來維持小鼠腸道的健康[17]。然而，茯磚茶防治小鼠IBD的主要物質基礎還鮮有報道。

因此，我們利用水提、醇沉等方法分別制備了茯磚茶水提取物（FWE）、富集茯磚茶多酚的醇溶提取物（FES）及富集茯磚茶多糖的醇沉提取物（FEP），并進一步評價了3種提取物對DSS（Dextran sulfate sodium，葡聚糖硫酸鈉）誘導小鼠炎癥性腸病的預防保護作用，以及對IBD小鼠氧化應激和炎癥因子的影響，以期為茯磚茶防治炎癥性腸炎的作用機制和應用方案提供參考。

1 材料與方法

1.1 主要材料與試劑

茯磚茶購于湖南省白沙溪茶廠股份有限公司；DSS購于安諾倫（北京）生物科技有限公司；GSH（Glutathione，谷胱甘肽）、SOD（Super oxide dismutase，超氧化物岐化酶）、CAT（Catalase，過氧化氫酶）、IL-6、IL-1β、TNF-α試劑盒購于科諾迪生物科技有限公司；RIPA裂解液、PMSF（Phenylmethanesulfonyl fluoride，苯甲基磺酰氟）、磷酸化蛋白酶抑制劑、SDS-PAGE凝膠制備試劑盒、β-actin（β-肌動蛋白）、NF-κB（Nuclear Factor kappa-B，核因子κB） p65、IκBα（Inhibitor of NF-κB，NF-κB抑制蛋白）、HO-1（Heme oxidase -1，血紅素氧化酶-1）購于武漢賽維爾生物科技有限公司；Nrf2（Nuclear factor erythroid-2-related factor 2，核因子E2相關因子2）購于美國Affinity Biosciences公司；其他常規(guī)試劑購于中國醫(yī)藥集團有限公司。

1.2 試驗方法

1.2.1 茯磚茶提取物的制備

每次稱取茯磚茶50.0?g放入1?L錐形瓶中（總共500?g，每份50?g），加500?mL 100℃的蒸餾水在沸水浴中浸提10?min，共提取3次。趁熱減壓過濾后合并濾液，旋轉蒸發(fā)，濃縮至100~150?mL。將濃縮后的水浸提液冷凍干燥，凍干粉即為茯磚茶水提物（FWE）。在濃縮后的水浸提液中加入4倍體積的95%乙醇，4℃靜置24?h后，3?000?r·min-1離心5min，收集沉淀物，洗滌并冷凍干燥后即得富集多糖的茯磚茶醇沉提取物（FEP）；上清液旋轉蒸發(fā)回收乙醇，經(jīng)冷凍干燥，即得富集多酚的茯磚茶醇溶物（FES）。

1.2.2 茯磚茶提取物成分測定

參照文獻[18]測定總酚含量：配制2?mg·mL-1的樣品溶液，取0.1?mL樣品溶液加入10?mL具塞試管，加蒸餾水至6?mL，再加入0.5?mL 50%（∶）福林酚試劑（現(xiàn)配），混勻，5?min后加入1?mL 5%碳酸鈉溶液，加水至10?mL，室溫靜置60?min。用10?mm比色皿，以試劑空白為參比，于760?nm處測吸光度，利用標準曲線換算成樣品溶液的總酚含量。

參照文獻[19]測定總糖含量：配制2?mg·mL-1的樣品溶液，取0.2?mL樣品溶液加入25?mL具塞試管，以蒸餾水補至2.0?mL。加入1.0?mL 6%苯酚，搖勻，迅速加入5.0?mL濃硫酸，搖勻，室溫放置20?min后于490?nm處測吸光度。

參照文獻[19]測定糖醛酸含量：吸取0.2?mL 2?mg·mL-1的樣品溶液，以蒸餾水補至1.0?mL。在冰水浴中向各管加入4?mL濃硫酸，搖勻后置于85℃水浴中加熱20?min，冷卻至室溫后加0.2?mL咔唑溶液，在室溫下保持2?h，于530?nm處測吸光度。

參照文獻[19]測定可溶性蛋白含量：配制2?mg·mL-1的樣品溶液，取0.2?mL樣品溶液，以蒸餾水補至1.0?mL。加入5.0?mL考馬斯亮藍溶液，搖勻，放置2~5?min后于595?nm處測吸光度。

參照文獻[18]測定氨基酸含量：吸取1?mL 2?mg·mL-1的樣品溶液加入25?mL比色管中，再加入0.5?mL pH=8.04磷酸鹽緩沖液和0.5?mL 2%茚三酮溶液，置于沸水浴中加熱15?min，冷卻后加水至10?mL。10?min后于570?nm處測吸光度。

1.2.3 動物試驗

選用SPF級的C57BL/6J雄性小鼠，6周齡，購于上海斯萊克公司生產(chǎn)許可證：SCXK（滬）2017-0005。所有的動物試驗均于浙江大學實驗動物中心進行飼養(yǎng)，動物試驗設計征得浙江大學實驗動物倫理委員會同意（ZJU20190004）。小鼠于動物房適應性飼養(yǎng)一周后，將試驗小鼠（n=5）隨機分成4組，一組為炎癥性腸病對照組（Control），其余3組為處理組：FWE處理組、FES處理組和FEP處理組。分別配制小鼠飲用水進行喂養(yǎng)：對照組給予無菌水、試驗組給予相應的提取物水溶液（4?mg·mL-1）；喂養(yǎng)15?d后，將DSS（2%，∶）添加至水/提取物溶液中，混合喂養(yǎng)7?d，進行小鼠炎癥性腸炎模型造模，7?d后進行相關后續(xù)試驗。

1.2.4 指標測定

日常觀察指標：每3?d進行換水、稱量體重、測量每5只小鼠的總飲水量以及腹瀉便血情況。便血評分標準參照文獻[20]：正常糞便得0分；輕微肉眼可見血絲得1分；糞便有可見血痕得2分；大便帶血得3分；脫肛和直腸出血得4分。腹瀉評分標準參照文獻[20]：正常糞便得0分；糞便較黃得1分；糞便呈柔軟狀得2分；糞便沒有具體形態(tài)得3分；脫肛，身體蜷縮得4分。

標本采集：喂養(yǎng)完畢后，摘眼球取血，血液靜置1?h后，3?000?r·min-1離心20?min，取上清液置于–80℃冰箱保存，待做ELISA（Enzyme linked immunosorbent assay，酶聯(lián)免疫吸附試驗）檢測。取小鼠結直腸組織，用PBS（Phosphate buffer solution，磷酸鹽緩沖液）漂洗干凈后，取近肛門端的1?cm腸道組織，置于4%的甲醛中固定24?h，待做H&E（Hematoxylin eosin，蘇木精伊紅）染色。另取40?mg腸道組織，于無菌室中用含3倍雙抗?jié)舛鹊腜BS沖洗3遍，置于24孔板中，加入500?μL含10%牛血清及1%雙抗的RPMI-1640培養(yǎng)基，于5%CO2的37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24?h，收集腸道組織上清液，置于–80℃保存，待做ELISA檢測。剩余腸道組織于液氮中快速封存，置于–80℃保存。

H&E染色：取4%甲醛中固定好的腸道組織。將樣本洗滌、脫水和透明、浸蠟、包埋處理后，切成5?μm厚度組織切片，放入溫水中展平，然后將切片轉移至載玻片上，45℃恒溫干燥過夜。過夜之后用二甲苯將切片進行脫蠟，各10?min。然后用無水乙醇洗滌兩次各1?min。將切片分別用100%、95%、90%、85%和70%乙醇浸泡2?min，蒸餾水洗滌2?min。而后蘇木精染色15?min，流水15?min沖洗，0.1%伊紅染色5?min，再依次100%、95%、90%、85%和70%乙醇倒序脫水，二甲苯透明兩次各10?min，中性樹膠封片。

ELISA檢測：取各組小鼠的血清及腸道組織上清液，按照試劑盒說明書，測定其中的GSH、SOD、CAT、IL-6、IL-1β、TNF-α指標。

Western Blot檢測：組織塊用冷PBS洗滌2~3次，去除血污，剪成小塊置于勻漿管中。加入1~2個2?mm的小磁珠，加入10倍組織體積裂解液置于勻漿機中制作勻漿，勻漿后，冰浴30?min，收集上清。將蛋白溶液按照4∶1的比例加入5×蛋白上樣緩沖液，沸水浴變性15?min。蛋白經(jīng)SDS-PAGE電泳（濃縮膠電壓75?V，分離膠用120?V），PVDF（Polyvinylidene fluoride，聚偏氟乙烯）轉膜過夜（25?V恒壓）后，用5%脫脂牛奶封閉1?h，4℃孵育一抗3?h，用TBST（Tris buffered saline tween，洗膜緩沖液）洗3次，室溫下孵育二抗30?min后，用TBST洗3次。加入混合好的化學發(fā)光溶液充分反應，1~2?min后進行曝光。曝光后利用Alpha軟件處理系統(tǒng)分析目標帶的光密度值。

1.3 統(tǒng)計學方法

應用SPSS 20.0 統(tǒng)計軟件進行分析，試驗結果采用平均數(shù)±標準差來表示。各組間比較采用單因素ANOVA分析，兩兩比較采用LSD-檢驗，＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果與分析

2.1 茯磚茶提取物主要成分分析

3種茯磚茶提取物的制備流程如圖1-A所示。在水提的基礎上，我們進一步通過醇沉對多糖和多酚進行了分離。從圖1-B中可以看出，醇沉物FEP中總酚含量顯著低于水提取物FWE和醇溶提取物FES，而總糖和糖醛酸含量相對較高；FES中酚類物質較高，同時多糖物質顯著低于FEP。FWE中主要活性物質含量處于平均水平。

2.2 茯磚茶提取物對小鼠體重生長及飲水量的影響

小鼠的體重質量變化情況如圖2-A所示。試驗前期，小鼠的體重增長較為穩(wěn)定。第16天開始用DSS喂養(yǎng)小鼠，DSS處理前3?d體重增長變緩，3?d后，體重下降明顯，其中FEP的體重下降最少，F(xiàn)ES居中，F(xiàn)WE組體重下降最為明顯。小鼠的飲水量變化如圖2-B所示?？梢钥闯?，小鼠的飲水量差異不大，但在DSS干預的第4~7天，小鼠的飲水量明顯下降。由于DSS引發(fā)的腸道炎癥反應，小鼠從第19天開始糞便出現(xiàn)明顯的血絲，并隨著DSS處理時間的增加，在第20、21天小鼠甚至出現(xiàn)了明顯大便帶血的情況（圖2-C）。小鼠腹瀉情況如圖2-D所示，腹瀉情況與便血情況相當，小鼠從第19天開始有輕微的腹瀉現(xiàn)象，且隨著天數(shù)的增加，腹瀉癥狀加劇，到第22天，通過觀察，可以發(fā)現(xiàn)糞便已無具體形態(tài)，并且部分小鼠有輕微的脫肛現(xiàn)象，身體蜷縮。由小鼠便血與腹瀉的癥狀情況觀察結果可看出，對照組和茯磚茶提取物處理組的癥狀差異不明顯。

2.3 茯磚茶提取物對小鼠腸道的影響

為進一步考察DSS誘導對小鼠腸道的損傷和茯磚茶的保護作用，我們測量了小鼠的腸道長度并取近肛門端1?cm處的腸道組織進行了H&E染色。發(fā)現(xiàn)茯磚茶提取物對小鼠的腸道組織長度沒有顯著影響（圖3-A和3-B）。H&E染色結果表明（圖3-C），模型組小鼠的腸道組織細胞排列紊亂，上皮細胞大量破損，腸道粘膜損壞，隱窩損壞，有大量的炎性細胞浸潤。而FWE組、FES組和FEP組，損傷程度相對減輕。在FWE處理組，腸道粘膜組織結構、腸道上皮細胞基本完整，隱窩結構清晰可見；FES組雖然仍有一定的炎癥細胞浸潤，但粘膜組織結構、腸道上皮細胞損傷較小，隱窩結構破損較輕；在FEP處理組中，雖然已經(jīng)恢復了一部分的隱窩結構，但粘膜組織結構、腸道上皮細胞還未完全恢復，仍有炎性細胞浸潤。表明FWE和FES處理對DSS誘導小鼠腸道炎癥的緩解作用要好于FEP。

注：FWE：水提取物；FES：醇溶提取物；FEP：醇沉物。下同

圖2 茯磚茶提取物對小鼠體質量、飲水量、便血及腹瀉的影響

2.4 茯磚茶提取物對IBD小鼠氧化應激和炎癥的影響

IBD伴隨著氧化應激和炎癥的發(fā)生。為研究茯磚茶提取物對小鼠IBD的作用機制，我們首先分析了小鼠腸道局部氧化應激狀態(tài)和炎癥因子水平。結果表明，在IBD對照組中小鼠腸道的抗氧化酶SOD、CAT的活力以及GSH的含量較低（圖4-A—4-C），而炎癥因子IL-6、IL-1β、TNF-α則處于較高水平（圖4-D—F）。茯磚茶提取物可以顯著提升小鼠腸道局部的抗氧化應激能力和降低炎癥因子水平。同時，無論是對抗氧化應激的提升還是炎癥的抑制，F(xiàn)WE的效果最為突出，其次是FES，而FEP作用相對較弱。

盡管炎癥性腸炎是局部疾病，但是卻存在潛在的全身性炎癥的風險。為此，我們進一步評價了茯磚茶提取物對IBD小鼠血清中氧化應激狀態(tài)和炎癥因子水平的影響（圖5-A—5-F）。結果發(fā)現(xiàn)，IBD模型小鼠血清中SOD和CAT活性與GSH含量較低，分別只有241.8?U·mL-1、87.7?U·mL-1和7.5?ng·mL-1，茯磚茶提取物處理后SOD、CAT的活性及GSH含量顯著提升了。在血清炎癥因子水平方面，茯磚茶能顯著抑制IBD小鼠體內(nèi)的IL-6、IL-1β、TNF-α水平，效果趨勢與抗氧化一致。這些結果表明，茯磚茶提取物能顯著緩解DSS誘導的小鼠體內(nèi)（包括腸道局部和血清）氧化應激和炎癥水平。

2.5 茯磚茶提取物對抗氧化和抗炎信號通路關鍵蛋白表達的影響

為進一步探究茯磚茶提取物對IBD小鼠的抗氧化和抗炎機制，我們通過western blot評價了茯磚茶提取物對小鼠腸道炎癥和抗氧化重要信號通路的影響。結果如圖6所示，F(xiàn)WE處理能顯著降低小鼠腸道組織的炎癥相關信號通路重要蛋白NF-κB p65水平，同時提升IκBα的蛋白表達水平；此外，Nrf2和HO-1是機體抗氧化相關信號通路的重要蛋白。在本試驗中，F(xiàn)WE能顯著提高Nrf2和HO-1的表達。FES雖然能提高Nrf2和HO-1的表達，但與IBD模型組對比沒有顯著性差異。而在FEP處理組中，小鼠腸道組織中Nrf2和HO-1的表達水平與模型組相比沒有明顯提高。

注：CK：對照；FWE：水提取物；FES：醇溶提取物；FEP：醇沉物。*表示P<0.05，***表示P<0.001。下同

圖5 茯磚茶提取物對小鼠血清中抗氧化及炎癥因子的影響

圖6 茯磚茶提取物對小鼠腸道組織中炎癥和氧化應激相關通路信號的影響

3 討論與結論

茯磚茶屬于黑茶的一種，因自帶“金花”——“冠突散囊菌”而備受關注。研究發(fā)現(xiàn)茯磚茶具有降血糖、調節(jié)血脂、抗氧化、減肥及防治腹瀉等功效[21]。同時，茯磚茶提取物還具有增強腸道組織修復、調節(jié)腸道微生物和抑制腸炎癥等功能，在維護腸道健康方面顯示出良好的應用前景[17]。茯磚茶功能的物質基礎主要是多酚和多糖等活性物質，然而，不同提取工藝會導致活性物質在提取物中具有不同的富集狀態(tài)，這是否會引起提取物功能的變化是一個值得關注問題。

本試驗中，我們通過水提醇沉的手段，得到了FWE、FES和FEP 3個茯磚茶提取物。成分分析結果表明，醇沉手段一定程度上能富集茯磚茶水提物中的多酚類和多糖類物質，使得FES中多酚含量顯著高于FEP；而FEP中含有更高的多糖類物質。已有研究顯示多酚[8,22]和多糖[23-24]對炎癥性腸病均有良好的防治效果。在DSS造模前15?d通過飲水攝入方式對小鼠進行預處理，進而考察不同茯磚茶提取物對DSS誘導的炎癥性腸病預防效果，探究不同茯磚茶提取物的功效差異。小鼠經(jīng)過DSS誘導后，小鼠體重逐漸下降，腸道長度縮短，結構受到破損，隱窩和杯狀細胞損傷，且有炎癥細胞浸潤。雖然茯磚茶提取物處理無法直接阻止IBD的發(fā)生，但是能不同程度減輕相關損傷，且預防效果為FWE＞FES＞FEP。

正常的機體中，促炎和抗炎的細胞因子處于平衡狀態(tài)，但IBD機體中，腸道的細胞因子平衡狀態(tài)被打破，促炎因子表達量增加，從而引起炎癥反應，造成腸道損傷[25-26]。NF-κB在腸道炎癥的研究中具有重要作用。正常狀態(tài)下，NF-κB與IκB以二聚體的形式形成復合物，此時其還未有活性。在炎癥機體內(nèi)，IκB蛋白激酶IKK發(fā)生活化，使IκB磷酸化并降解，IκB與NF-κB解離后，激活NF-κB使其進入細胞核調控基因轉錄。NF-κB活性增加，則調控炎癥因子的反應，如IL-6、TNF-α[27]。在本試驗中，可以看到在DSS誘導Control組小鼠的血清和腸道組織上清液中，IL-6、IL-1β和TNF-α表達水平較高，而3種茯磚茶提取物處理都降低了細胞因子的含量，表明茯茶提取物能有效緩解炎癥性腸炎的機體炎癥水平。在通路信號蛋白表達水平中，F(xiàn)WE組小鼠腸道組織的NF-κB p65蛋白水平有所降低，而FES和FEP組沒有明顯變化，而與NF-κB p65蛋白相結合并抑制NF-κB p65蛋白活化的IκBα蛋白水平在FWE組和FES組中有所增加，說明FWE和FES能使腸道組織中的NF-κB與IκB的結合更加穩(wěn)定。

Nrf2是一個重要的信號轉錄因子，關聯(lián)到SOD和HO-1等酶的表達水平。Nrf2的激活可以抑制IκK/IκB的磷酸化及NF-κB p65的核轉錄，由此鈍化NF-κB信號通路。在炎癥損傷中，Nrf2對于炎癥信號激活和氧化應激都具有調控作用，增加HO-1和Nrf2的蛋白意味著減少了促炎因子和氧化應激水平[28-30]。在本試驗中，茯磚茶提取物可以顯著提高腸炎小鼠血清和腸道組織中的SOD、CAT、GSH等酶蛋白水平，其中FWE效果最佳，而富含多糖的FEP效果最差。在氧化應激相關蛋白通路表達水平中，Nrf2和HO-1的蛋白水平在FWE組和FES組有所增加，說明FWE和FES能夠增加小鼠腸道的抗氧化應激能力。綜上，茯磚茶提取物可能通過活化了Nrf-2/HO-1通路，抑制NF-κB的表達來減緩DSS對小鼠腸道所帶來的損傷。

已有研究表明，兒茶素能夠緩解腸道的氧化損傷，調節(jié)與炎癥相關的氧化應激信號通路。2017年，Gerges等[31]發(fā)現(xiàn)兒茶素能夠改善UC癥狀，穩(wěn)定肥大細胞。2018年，Rahman等[32]發(fā)現(xiàn)兒茶素能夠調控TLR4的表達來阻斷NF-κB的活化以及調控其上游IKK復合物，從而抑制炎癥因子TNF-α的表達。此外，茶黃素和EGCG能夠緩解IBD的炎癥水平，減少腸癌細胞的增殖[33]。然而，也有研究發(fā)現(xiàn)攝入EGCG會進一步加劇患腸炎小鼠體重的降低[9]，EGCG能夠減少能量和營養(yǎng)的吸收[34]，可以起到減輕肥胖者體重的效果。然而，對于營養(yǎng)不良的個體，包括IBD患者，這種作用可能是有害的。在茯磚茶發(fā)酵過程中，茶葉中多酚類物質逐漸被聚合氧化，形成的茶黃素、茶紅素及其中間產(chǎn)物的刺激性會有所減小[35-36]。本研究也發(fā)現(xiàn)茯磚茶水提物組小鼠的體重減輕也較茯磚茶多酚組少，且小鼠腸道組織的修復也有所改善。

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)茯磚茶對DSS誘導炎癥性腸炎具有一定的預防保護作用，其中FWE效果最佳，F(xiàn)ES次之，而FEP的功效不太明顯，表明茯磚茶對炎癥性腸病的功效可能是諸多功效成分的協(xié)同作用。同時，本研究中茯磚茶多糖類物質的富集降低了茯磚茶提取物對于炎癥性腸病的功效。這些結果提示將茯磚茶在腸道健康方面應用時需要考慮其中不同的成分組成。此外，我們研究發(fā)現(xiàn)茯磚茶提取物能夠通過抗氧化和抗炎等機制來緩解DSS誘導的腸病，但是其中更深入的作用機制還需更進一步研究。

[1] Ng SC, Shi HY, Hamidi N, et al. Worldwide incidence and prevalence of inflammatory bowel disease in the 21st century: a systematic review of population-based studies [J]. The Lancet, 2017, 390(10114): 2769-2778.

[2] Danese S, Fiocchi C. Ulcerative colitis [J]. New England Journal of Medicine, 2011, 365(18): 1713-1725.

[3] Ghosh S, Mitchell R. Impact of inflammatory bowel disease on quality of life: Results of the European Federation of Crohn's and Ulcerative Colitis Associations (EFCCA) patient survey [J]. Journal of Crohns & Colitis, 2007, 1(1): 10-20.

[4] Hashimoto K, Oshima T, Tomita T, et al. Oxidative stress induces gastric epithelial permeability through claudin-3 [J]. Biochemical and Biophysical Research Communications, 2008, 376(1): 154-157.

[5] Neurath MF. Cytokines in inflammatory bowel disease [J]. Nature Reviews Immunology, 2014, 14(5): 329-342.

[6] Ng SC, Tang W, Leong RW, et al. Environmental risk factors in inflammatory bowel disease: a population-based case-control study in Asia-Pacific [J]. Gut, 2015, 64(7): 1063-1071.

[7] Wang YF, Qin OY, Xia B, et al. Multicenter case-control study of the risk factors for ulcerative colitis in China [J]. World Journal of Gastroenterology, 2013, 19(11): 1827-1833.

[8] Kim M, Murakami A, Miyamoto S, et al. The modifying effects of green tea polyphenols on acute colitis and inflammation-associated colon carcinogenesis in male ICR mice [J]. Biofactors, 2010, 36(1): 43-51.

[9] Bitzer ZT, Elias RJ, Matam VK, et al. (-)-Epigallocatechin-3-gallate decreases colonic inflammation and permeability in a mouse model of colitis, but reduces macronutrient digestion and exacerbates weight loss [J]. Molecular Nutrition & Food Research, 2016, 60(10): 2267-2274.

[10] Chen G, Xie M, Dai Z, et al. Kudingcha and fuzhuan brick tea prevent obesity and modulate gut microbiota in high-fat diet fed mice [J]. Molecular Nutrition & Food Research, 2018, 62(6): e1700485. DOI: 10.1002/mnfr.201700485.

[11] Chen G, Xie M, Wan P, et al. Fuzhuan brick tea polysaccharides attenuate metabolic syndrome in high-fat diet induced mice in association with modulation in the gut microbiota [J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2018, 66(11): 2783-2795.

[12] Foster MT, Gentile CL, Kimberly CY, et al. Fuzhuan tea consumption imparts hepatoprotective effects and alters intestinal microbiota in high saturated fat diet-fed rats [J]. Molecular Nutrition & Food Research, 2016, 60(5): 1213-1220.

[13] Li Q, Liu Z, Huang J, et al. Anti-obesity and hypolipidemic effects of Fuzhuan brick tea water extract in high-fat diet-induced obese rats [J]. Journal of the Science of Food and Agriculture, 2013, 93(6): 1310-1316.

[14] Chen G, Wang M, Xie M, et al. Evaluation of chemical property, cytotoxicity and antioxidant activityandof polysaccharides from Fuzhuan brick teas [J]. International Journal of Biological Macromolecules, 2018, 116: 120-127.

[15] Liu Z, Lin Y, Zhang S, et al. Comparative proteomic analysis using 2DE-LC-MS/MS reveals the mechanism of Fuzhuan brick tea extract against hepatic fat accumulation in rats with nonalcoholic fatty liver disease [J]. Electrophoresis, 2015, 36(17): 2002-2016.

[16] 余智勇, 黃建安, 楊明臻, 等. 茯磚茶抗腹瀉效果研究[J]. 茶葉科學, 2009, 29(6): 465-469.

[17] Liu B, Yang T, Zeng LN, et al. Crude extract of Fuzhuan brick tea ameliorates DSS-induced colitis in mice [J]. International Journal of Food Science and Technology, 2016, 51(12): 2574-2582.

[18] Xu YQ, Liu PP, Shi J, et al. Quality development and main chemical components of Tieguanyin oolong teas processed from different parts of fresh shoots [J]. Food Chemistry, 2018, 249: 176-183.

[19] 張勇. 鐵皮石斛莖、葉、花多糖理化性質及抗氧化、免疫調節(jié)活性研究[D]. 杭州: 浙江大學, 2016.

[20] 何佳. E3泛素酶FBXW7正向調控小鼠炎癥性腸病和CX3CR1(int)炎性巨噬細胞的聚集[D]. 杭州: 浙江大學, 2016.

[21] 張遴, 方悅. 茯茶功效研究進展[J]. 食品研究與開發(fā), 2018, 39(9): 208-212.

[22] Boussenna A, Cholet J, GoncalvesMN, et al. Polyphenol-rich grape pomace extracts protect against dextran sulfate sodium-induced colitis in rats [J]. Journal of the Science of Food and Agriculture, 2016, 96(4): 1260-1268.

[23] Sabri S, Hsu YH, He JL, et al. Dietary polysaccharide-rich extract from Eucheuma cottonii modulates the inflammatory response and suppresses colonic injury on dextran sulfate sodium-induced colitis in mice [J]. PLoS ONE, 2018, 13(10): e0205252. DOI: 10.1371/JOURNAL.PONE.0205252.

[24] Ramberg JE, Nelson ED, Jacoby HI, et al. Plant polysaccharide supplements reduce the expression of pro-inflammatory genes in colonic tissue of mice with dextran sulfate sodium-induced colitis [J]. International Journal of Probiotics and Prebiotics, 2010, 5(4): 229-236.

[25] Thiele K, Bierhaus A, Autschbach F, et al. Cell specific effects of glucocorticoid treatment on the NF-kappa Bp65/I kappa B alpha system in patients with Crohn's disease [J]. Gut, 1999, 45(5): 693-704.

[26] Atreya I, Atreya R, Neurath MF. NF-kappa B in inflammatory bowel disease [J]. Journal of Internal Medicine, 2008, 263(6): 591-596.

[27] Tak PP, Firestein GS. NF-kappa B: a key role in inflammatory diseases [J]. Journal of Clinical Investigation, 2001, 107(1): 7-11.

[28] Saber S, Khalil RM, Abdo WS, et al. Olmesartan ameliorates chemically-induced ulcerative colitis in rats via modulating NF-kappaB and Nrf-2/HO-1 signaling crosstalk [J]. Toxicol Appl Pharmacol, 2019, 364: 120-132.

[29] Akiyama S, Nesumi A, Mari MY, et al. Effects of anthocyanin-rich tea "Sunrouge" on dextran sodium sulfate-induced colitis in mice [J]. Biofactors, 2012, 38(3): 226-233.

[30] Li W, Khor TO, Xu C, et al. Activation of Nrf2-antioxidant signaling attenuates NF-kappaBinflammatory response and elicits apoptosis [J]. Biochem Pharmacol, 2008, 76(11): 1485-1489.

[31] Gerges GA, Rizzo M, Eid A, et al. Tea catechins induce crosstalk between signaling pathways and stabilize mast cells in ulcerative colitis [J]. Journal of Biological Regulators and Homeostatic Agents, 2017, 31(4): 865-877.

[32] Rahman SU, Li Y, Huang Y, et al. Treatment of inflammatory bowel disease via green tea polyphenols: possible application and protective approaches [J]. Inflammopharmacology, 2018, 26(2): 319-330.

[33] Carini F, Tomasello G, Jurjus A, et al. Colorectal cancer and inflammatory bowel diseases: effects of diet and antioxidants [J]. Journal of Biological Regulators and Homeostatic Agents, 2017, 31(3): 791-795.

[34] Grove KA, Sudathip ST, Kennett MJ, et al. (-)-Epigallocatechin-3-gallate inhibits pancreatic lipase and reduces body weight gain in high fat-fed obese mice [J]. Obesity, 2012, 20(11): 2311-2313.

[35] 王增盛, 施兆鵬, 劉仲華, 等. 論茯磚茶品質風味形成機理[J]. 茶葉科學, 1991(S1): 49-55.

[36] 劉玉倩, 楊家干. 茯磚茶發(fā)花過程菌落及主要內(nèi)含物質變化[J]. 蠶桑茶葉通訊, 2017(5): 30-33.

Protective Effects of Fu Brick Tea Extracts on Inflammatory Bowel Disease Induced by Dextran Sulfate Sodium in Mice

HU Ankai1, YAO Liyun2, ZHAO Yueling2, LIU Chang1, WANG Yuefei2, XU Ping2*

1. Department of dairyengineering, Northeast Agricultural University, Haerbin 150030, China; 2. Tea Research Institute, Zhejiang Univerisity, Hangzhou 310058, China

Fu brick tea is a special dark tea in China. In the present work, three extracts, including Fu brick tea water extract (FWE), Fu brick tea ethanol soluble fraction (FES) and Fu brick tea ethanol precipitation fraction(FEP), were prepared and used to further explore their protective effects on inflammatory bowel disease in mice. Researches show that all the Fu brick tea extracts could alleviate the intestinal structure damage of IBD mice. Moreover, the extracts increased the activities of SOD, CAT and the levels of GSH and reduced the levels of IL-6, IL-1β, TNF-α in serum and colon tissue supernatant of mice. Furthermore, the protein level of NF-κB p65 in the colon tissues in the FWE group was decreased compared to the model group. The protein level of IκBα was increased in the FWE group and FES group. Levels of Nrf2 and HO-1 were also increased in the FWE and FES groups. In conclusion, Fu brick tea extracts had a protective effect on IBD mice induced by DSS.

Fu brick tea, inflammatory bowel disease, inflammation, oxidative stress

S571.1；R574

A

1000-369X(2019)06-641-11

2019-07-19

2019-08-25

胡安愷，男，本科，主要從事茶葉營養(yǎng)方面的研究。

zdxp@zju.edu.cn