趙妍 喻超 倪維
湖北省中醫(yī)院檢驗(yàn)科,湖北武漢 430074
全血細(xì)胞分類計(jì)數(shù)是血液學(xué)實(shí)驗(yàn)室最經(jīng)常使用的測(cè)試方法,不斷開(kāi)發(fā)更新的技術(shù)使自動(dòng)血液分析儀能夠提供更準(zhǔn)確的結(jié)果[1]。模塊化的血液分析系統(tǒng)內(nèi)部的智能有機(jī)配合,能夠?qū)崿F(xiàn)大批量標(biāo)本的檢測(cè)[2]。XN-9000是一款可擴(kuò)展的模塊化自動(dòng)化血液分析系統(tǒng),為了滿足目前醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可的需求,保證實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性[3-5],現(xiàn)對(duì)實(shí)驗(yàn)室配置A1(XN20)和B4(XN10)分析模塊的XN9000血液分析系統(tǒng)性能進(jìn)行驗(yàn)證。
本研究所選取新鮮抗凝全血標(biāo)本均來(lái)自湖北省中醫(yī)院光谷院區(qū)門(mén)診和住院患者,研究起止時(shí)間為2017年7~9月。
XN-9000血液分析系統(tǒng)及原裝試劑、染液、玻片、校準(zhǔn)品和質(zhì)控品(日本Sysmex 公司),LH750血液分析儀及原裝試劑、校準(zhǔn)品和質(zhì)控物(美國(guó)BECKMANCOULTER 公司)、Olympus 顯微鏡(日本Olympus 公司)、瑞氏-吉姆薩和煌焦油蘭染液(珠海BASO 公司)。
按儀器操作規(guī)程操作,結(jié)果均按照《WS/T 406-2012臨床血液學(xué)檢驗(yàn)常規(guī)項(xiàng)目分析質(zhì)量要求》[6]進(jìn)行判定。
1.3.1 本底及空白計(jì)數(shù)
取稀釋液當(dāng)作樣本上機(jī)檢測(cè),連測(cè)3次。分別記錄兩個(gè)模塊測(cè)試結(jié)果。
1.3.2 攜帶污染率
每個(gè)項(xiàng)目各取1份高、低濃度樣本,連續(xù)在兩模塊上測(cè)定3次,高濃度結(jié)果記為H1、H2、H3;低濃度檢測(cè)結(jié)果為L(zhǎng)1、L2、L3。按公式:攜帶污染率=(L1-L3)/(H3-L3)×100%計(jì)算每個(gè)模塊各項(xiàng)目的攜帶污染率。
1.3.3 精密度
批內(nèi)精密度:取1份各項(xiàng)目結(jié)果均在正常參考區(qū)間的標(biāo)本,重復(fù)檢測(cè)11次,計(jì)算后10次檢測(cè)結(jié)果的均值、標(biāo)準(zhǔn)差和變異系數(shù)(CV)。批間精密度:以室內(nèi)質(zhì)控在控結(jié)果的CV 為評(píng)價(jià)指標(biāo),使用2個(gè)濃度(Level 2、Level 3)的質(zhì)控品,檢測(cè)當(dāng)天進(jìn)行1次室內(nèi)質(zhì)控,若出現(xiàn)失控?cái)?shù)據(jù),糾正后按批號(hào)計(jì)算所有在控?cái)?shù)據(jù)的CV。
1.3.4 正確度
取10份各項(xiàng)目結(jié)果均在參考區(qū)間內(nèi)的樣本,在兩個(gè)模塊及LH750上依次檢測(cè)。每個(gè)樣本2次,計(jì)算2次結(jié)果的均值。以作為規(guī)范檢測(cè)系統(tǒng)[6]的LH750所測(cè)均值為標(biāo)準(zhǔn),計(jì)算兩模塊結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)間的偏倚。
1.3.5 線性
針對(duì)不同項(xiàng)目,選一份結(jié)果接近廠商線性范圍上限的高值標(biāo)本(H),分別按100%、50%、25%、12.5%、6.25%、3.125%、0%的比例進(jìn)行稀釋,每個(gè)稀釋度連續(xù)測(cè)3次并計(jì)算均值。將每個(gè)稀釋度均值和理論計(jì)算值做線性回歸,計(jì)算回歸方程a 值(斜率)及相關(guān)系數(shù)平方R2。
1.3.6 實(shí)驗(yàn)比較
1.3.6.1 白細(xì)胞五分類與人工計(jì)數(shù)比較 比對(duì)實(shí)驗(yàn)在精密度實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證之后進(jìn)行,每日保證儀器穩(wěn)定質(zhì)控在控,隨機(jī)選擇8份標(biāo)本,連續(xù)5 d 共40份標(biāo)本。在A1、B4模塊分別用全血細(xì)胞計(jì)數(shù)(CBC)+白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)(Diff)模式測(cè)試后,于SP-10推片機(jī)上制備標(biāo)準(zhǔn)血片并染色,按照《WS/T246-2005白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)參考方法》[7]進(jìn)行白細(xì)胞五分類計(jì)數(shù),分別由2名中級(jí)以上職稱資深細(xì)胞學(xué)檢驗(yàn)人員重復(fù)分類計(jì)數(shù)2次并計(jì)算均值。
1.3.6.2 網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)與人工計(jì)數(shù)比較 每日儀器狀態(tài)穩(wěn)定、質(zhì)控在控的情況下,選取8份標(biāo)本,連續(xù)5 d共40份標(biāo)本,在A1模塊進(jìn)行檢測(cè),之后按照《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》(第4版)[8]的要求進(jìn)行染色制片。由2名資深細(xì)胞學(xué)檢驗(yàn)人員重復(fù)2次計(jì)數(shù)并計(jì)算均值。
采用SPSS 24.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,做一元線性回歸分析和Pearson 雙變量相關(guān)分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
本底計(jì)數(shù)兩模塊各次檢測(cè)值均為0,符合白細(xì)胞≤0.5×109/L,紅細(xì)胞≤0.05×1012/L,血紅蛋白≤2.0 g/L,血小板≤10×109/L 的檢測(cè)要求。
白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血紅蛋白、血小板的攜帶污染率A1模塊分別為-0.01%、0.13%、0.42%、0.00%,B4模塊分別為0.07%、0.00%、0.41%、0.00%,未超出白細(xì)胞≤3%,紅細(xì)胞≤2.0%,血紅蛋白≤2.0%,PLT≤4.0%的攜帶污染率標(biāo)準(zhǔn)[6]上限。
兩模塊的批內(nèi)精密度、批間精密度結(jié)果見(jiàn)表1~2,精密度驗(yàn)證結(jié)果符合標(biāo)準(zhǔn)[6]要求。
A1、B4模塊的正確度驗(yàn)證結(jié)果見(jiàn)表3,均未超出正確度驗(yàn)證允許偏倚的最大范圍[6]。
表1 批內(nèi)精密度驗(yàn)證結(jié)果(%)
表2 批間精密度驗(yàn)證結(jié)果(%)
表3 A1、B4模塊的正確度驗(yàn)證結(jié)果
A1、B4模塊的線性驗(yàn)證結(jié)果見(jiàn)表4,結(jié)果均未超出標(biāo)準(zhǔn)[6]要求。
表4 A1、B4模塊的線性驗(yàn)證結(jié)果
兩模塊白細(xì)胞分類和網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果與手工計(jì)數(shù)均具有相關(guān)性(P <0.01),A1、B4模塊嗜堿性粒細(xì)胞相關(guān)系數(shù)分別為0.675、0.678,相比其他參數(shù)較小。見(jiàn)表5。
XN9000是旨在滿足包含大量異常樣品的高通量實(shí)驗(yàn)室的工作空間和效率要求而設(shè)計(jì)的模塊化分析系統(tǒng)。該儀器使用阻抗、電導(dǎo)率和光學(xué)檢測(cè)來(lái)確定全血細(xì)胞計(jì)數(shù)、白細(xì)胞分類和網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)的參數(shù)。XN9000組件包括分類歸檔、自動(dòng)推片和染色機(jī)、擴(kuò)展信息處理單元和多達(dá)9個(gè)個(gè)性化分析器模塊。具有對(duì)空間要求不高、靈活適應(yīng)各種場(chǎng)地和檢測(cè)需求的特點(diǎn)[9]。該儀器還引入了一些改進(jìn)和新的測(cè)量通道包括白細(xì)胞成核(WNR)、白細(xì)胞分類(WDF)、白細(xì)胞前體細(xì)胞(WPC)和熒光血小板(PLT-F)通道[10]。儀器的性能驗(yàn)證是在安裝和操作驗(yàn)證的基礎(chǔ)上,檢查儀器的重復(fù)性,評(píng)價(jià)儀器的穩(wěn)定性、準(zhǔn)確性、靈敏度等指標(biāo),是保證檢驗(yàn)質(zhì)量的必要過(guò)程[11]。本室嚴(yán)格按照目前所運(yùn)行的ISO15189質(zhì)量管理體系的程序文件和操作手冊(cè),對(duì)XN9000做性能驗(yàn)證,兩模塊的空白計(jì)數(shù)、攜帶污染率、正確度、精密度、線性結(jié)果均符合標(biāo)準(zhǔn)[6]。
表5 A1模塊與手工計(jì)數(shù)檢測(cè)相關(guān)性分析
白細(xì)胞分類與手工分類結(jié)果顯示顯著的相關(guān)性,這與熊仲波等[12]研究結(jié)果一致。相比其他細(xì)胞嗜堿性粒細(xì)胞的相關(guān)性較弱,可能與手工分類白細(xì)胞,總共只計(jì)數(shù)200個(gè),而與其中嗜堿性粒細(xì)胞的比例低有關(guān)[7,13]。且血細(xì)胞本身有著復(fù)雜的生物學(xué)外觀,不一致的染色和光照變化,人工鏡檢本身受限于技術(shù)人員的技能和經(jīng)驗(yàn)可能導(dǎo)致重復(fù)性差[14]。Ciepiela等[15]認(rèn)為血涂片制備過(guò)程會(huì)導(dǎo)致嗜酸性粒細(xì)胞損傷的比例增加,因此與自動(dòng)化方法比較,人工檢查中嗜酸性粒細(xì)胞的數(shù)量較少是由于排除了破碎的細(xì)胞。任朝翔等[16]研究發(fā)現(xiàn)血液分析儀自動(dòng)計(jì)數(shù)出現(xiàn)嗜堿性粒細(xì)胞結(jié)果不符,以異常淋巴細(xì)胞干擾最多見(jiàn),此外還包括中毒性顆粒、未成熟粒細(xì)胞等的干擾。另有文獻(xiàn)[17-18]報(bào)道儀器分類識(shí)別異常淋巴細(xì)胞以及未成熟粒細(xì)胞還存在一定缺陷。因此儀器的局限和異常標(biāo)本本身的原因,都可能導(dǎo)致自動(dòng)和手動(dòng)計(jì)數(shù)嗜堿性粒細(xì)胞的差異。本研究標(biāo)本來(lái)自隨機(jī)日常門(mén)診住院患者,并未對(duì)異常淋巴或粒細(xì)胞及幼稚細(xì)胞進(jìn)行區(qū)分,且在實(shí)際分類過(guò)程中對(duì)有核紅細(xì)胞和未成熟粒細(xì)胞進(jìn)行剔除,不能排除此類不確定干擾,可能導(dǎo)致結(jié)果不符。有文獻(xiàn)[19]報(bào)道自動(dòng)血液分析儀計(jì)數(shù)單核細(xì)胞的結(jié)果不太準(zhǔn)確,特別是在計(jì)數(shù)嚴(yán)重白細(xì)胞減少的樣本時(shí)。本研究中兩模塊單核細(xì)胞百分比與手工分類相關(guān)性較高,可能與比對(duì)實(shí)驗(yàn)所選取的樣本中白細(xì)胞減少樣本所占比例較低有關(guān)。
網(wǎng)織紅細(xì)胞(RET)計(jì)數(shù)反映了人體骨髓的紅細(xì)胞生成活性[20],對(duì)于骨髓功能狀態(tài)的監(jiān)測(cè)、貧血的診斷評(píng)估等有重要臨床意義。由于傳統(tǒng)的人工顯微鏡檢方法,受限于制片染色效果、鏡檢人員的經(jīng)驗(yàn)等因素,存在變異較大且重復(fù)性較差的問(wèn)題。隨著自動(dòng)化學(xué)和熒光染色網(wǎng)織紅細(xì)胞RNA 技術(shù)的發(fā)展,目前,已經(jīng)出現(xiàn)了各種使用不同試劑和技術(shù)來(lái)測(cè)量網(wǎng)織紅細(xì)胞的分析儀。XN9000的RET 計(jì)數(shù)是運(yùn)用Fluorocell RET染液,在稀釋的血樣中測(cè)定網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)、網(wǎng)織紅細(xì)胞比率及血小板數(shù)。其中RET-He 是由Sysmex 開(kāi)發(fā)的獨(dú)特項(xiàng)目,它使用了網(wǎng)織紅細(xì)胞散射光信號(hào)和Sysmex專有的運(yùn)算法則。同時(shí)運(yùn)用了新參數(shù)的自動(dòng)化流式細(xì)胞分析技術(shù),是網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)的顯著進(jìn)步,并且提供了可接受的精確度和偏差[21-22]。研究顯示使用熒光染料進(jìn)行自動(dòng)網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)的分析儀之間有比較好的一致性[15,23]。本研究中A1模塊的網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)與人工計(jì)數(shù)結(jié)果的比較,表現(xiàn)出良好的相關(guān)性(r=0.996)。此外,有文獻(xiàn)[24]報(bào)道某些血液成分、疾病狀態(tài)或熒光藥物會(huì)對(duì)儀器網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果造成干擾,本研究病例樣本局限,未對(duì)可能的干擾因素做進(jìn)一步分類研究。實(shí)際工作中可以通過(guò)檢查儀器狀態(tài)、報(bào)警信息,查看歷史記錄、搜集病史信息等途徑來(lái)排查是否存在干擾因素,并用人工鏡檢來(lái)校正。
綜上所述,兩模塊XN9000血液分析系統(tǒng)的各項(xiàng)性能指標(biāo)良好,符合相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)和本實(shí)驗(yàn)室技術(shù)和質(zhì)量要求。本研究中的白細(xì)胞分類與手工比對(duì)實(shí)驗(yàn),并未針對(duì)細(xì)胞總數(shù)不同進(jìn)行區(qū)分,特別是未對(duì)低值白細(xì)胞樣本做儀器與人工的分類比對(duì),因此存在一定局限。同時(shí)由于兩模塊的檢測(cè)系統(tǒng)相對(duì)獨(dú)立,后續(xù)使用中還應(yīng)關(guān)注兩模塊間相互的結(jié)果比較和偏倚評(píng)估。