胡葉青，胡云飛，吳其國*

（1.安慶醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校藥學(xué)系，安徽安慶246052；2.合肥市食品藥品檢驗(yàn)中心，安徽合肥230000）

黃精為百合科植物滇黃精（Polygonatum kingianum Coll.et Hemsl.）、黃精 （Polygonatum sibiricum Red.）或多花黃精（Polygonatum cyrtonema Hua）的干燥根莖。安徽九華山地區(qū)的黃精品種為多花黃精，該植物在九華山地區(qū)生長范圍廣泛，在云南、貴州、浙江、山東也有分布，常見于陰濕山坡和溝谷處，但藥材質(zhì)量都不如九華山地區(qū)，為突出其地方特色，取名為九華黃精[1]。安徽的九華黃精品種更是獲批國家地理標(biāo)志保護(hù)產(chǎn)品[2]。

從古至今黃精的炮制方法有很多，對黃精的炮制歷史沿革總結(jié)，傳統(tǒng)的炮制方法以九蒸九曬法為主，九華黃精作為一個(gè)地方特色品種，當(dāng)?shù)睾芏嗥髽I(yè)結(jié)合九華山旅游資源通過古法九蒸九曬炮制九華黃精，將其加工成具有地方特色的藥食兩用品種，在市場上比較受歡迎，基于此，對其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究已顯得比較重要。

多糖是黃精的主要功能性物質(zhì)[3]，現(xiàn)代研究表明黃精多糖具有多種藥理作用。主要包括以下幾個(gè)方面的內(nèi)容。

（1）有研究表明黃精多糖可提高免疫功能，傅圣斌等[4]通過實(shí)驗(yàn)研究表明黃精多糖可以提高免疫抑制模型小鼠的免疫力，肖小妹等[5]研究表明黃精多糖可呈劑量依耐性的提高腎病綜合征患兒紅細(xì)胞免疫功能。

（2）在神經(jīng)系統(tǒng)方面，黃精多糖可以呈濃度依耐性抑制多巴胺神經(jīng)元凋亡、促進(jìn)多巴胺神經(jīng)元再生作用[6]，黃芳等[7]通過大鼠迷宮實(shí)驗(yàn)證明黃精多糖可提高大鼠的記憶和學(xué)習(xí)能力，陳辰等[8]研究表明黃精多糖可通過提高抑郁小鼠腦內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的含量來改善抑郁癥模型小鼠的行為學(xué)。

（3）黃精多糖具有心肌細(xì)胞保護(hù)作用，雷升萍等[6]研究表明黃精多糖對H/R誘導(dǎo)的H9c2心肌細(xì)胞具有保護(hù)作用，其作用可能與抑制心肌細(xì)胞凋亡有關(guān)。

（4）黃精多糖對肝腎有保護(hù)作用，韓春楊等[10]研究表明黃精多糖對CCl4誘導(dǎo)的大鼠肝損傷有良好的保護(hù)保護(hù)，李超彥等[11]研究表明黃精多糖能改善順鉑（DDP）所致大鼠腎功能損害。

（5）黃精多糖還具有降血糖、抗腫瘤以及抗菌等作用，王藝等[12]研究表明黃精多糖能改善STZ誘導(dǎo)的糖尿病大鼠胰島素抵抗和癥狀，段華等[13]研究表明黃精多糖通過激活Caspase系統(tǒng)誘導(dǎo)肝癌H22移植瘤細(xì)胞凋亡，李志濤等[14]提取的黃精多糖對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和藤黃球菌均具有明顯的抑制作用。

本研究通過測定九華黃精九蒸九曬炮制過程中總多糖的含量變化，為九蒸九曬法炮制九華黃精的質(zhì)量控制提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

T90+型紫外可見分光光度計(jì)（英國PG INSTRUMENTS公司），XP26型分析天平（德國Mettler toledo公司，精度0.001 mg），HH-4型數(shù)顯恒溫水浴鍋（山東鄄城創(chuàng)新儀器有限公司）。

1.2 試藥

葡萄糖對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：110833-201707，純度：99.9%），蒽酮（分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號20170222），硫酸（分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司），水為超純水（屈臣氏公司）。

九華黃精栽培品購自池州市大王洞中藥材種植專業(yè)合作社，九華黃精野生品購于池州市九華府金蓮智慧農(nóng)業(yè)有限公司。

2 方法與結(jié)果

2.1 九蒸九曬九華黃精的制備

取野生和栽培九華黃精生藥材，除去雜質(zhì)，洗凈，每100 kg黃精，用黃酒20 kg。

（1）第1次蒸制、曬干。將黃酒總量的20%，與凈選好的生品九華黃精攪拌均勻，并悶潤至黃酒被藥材吸盡，再蒸制8 h，取出，放在太陽下曬至藥材外皮微干》

4%氟嘧啶草醚+2.5%五氟磺草胺可分散油懸浮劑100毫升/畝用藥后20d對水稻田稗草和野慈姑株防效分別為100%。可以看出4%氟嘧啶草醚+2.5%五氟磺草胺可分散油懸浮劑100毫升/畝對稗草防好，對野慈姑的防效很好。

（2）第2次至第8次蒸制、曬干。均是將上一步的半成品拌入黃酒總量的10%，悶潤至黃酒被藥材吸盡，再取出，放在太陽下曬至藥材外皮微干，反復(fù)操作7次。

（3）第9次蒸制、曬干。將剩余10%黃酒拌入上述經(jīng)8次蒸制、曬干的半成品中，蒸至表面黑漆色且發(fā)亮，取出，曬至表面干燥，即得九華黃精的九蒸九曬炮制品。

2.2 對照品溶液的制備

取經(jīng)105°C干燥至恒重的無水葡萄糖對照品33 mg，精密稱定，置100 mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻即得（每1 mL中含無水葡萄糖0.33 mg）。

2.3 測定波長的選擇

精密吸取多糖溶液適量，置10 mL具塞刻度試管中，加水至2.0 mL，搖勻，在冰水浴中緩緩滴加0.2%蒽酮-硫酸溶液至刻度，混勻，放冷后置水浴中保溫10 min，取出，立即置冰水浴中冷卻10 min，取出，以未加葡萄糖溶液為空白對照，然后于450～700 nm波長范圍內(nèi)掃描，結(jié)果如圖1所示。

由圖1可知，黃精多糖與蒽酮-濃硫酸反應(yīng)后在635 nm處有最大吸收峰，由此可以確定635 nm為測定波長。

圖1 蒽酮-硫酸分光光度法的紫外掃描圖譜

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

精密量取對照品溶液 0.l、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 mL，分別置 10 mL具塞刻度試管中，各加水至2.0 mL，搖勻，在冰水浴中緩緩滴加0.2%蒽酮-硫酸溶液至刻度，混勻，放冷后置水浴中保溫10 min，取出，立即置冰水浴中冷卻10 min，取出，以相應(yīng)試劑為空白。參照紫外-可見分光光度法（通則0401)，在635 nm波長處測定吸光度。

以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖2所示，得線性回歸方程：y=0.003 1 x+0.176 7（r=0.999 0）。

由圖2可知，葡萄糖濃度在16.5～198.0 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

圖2 葡萄糖的標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.5 供試品溶液的制備

取60℃干燥至恒重的本品細(xì)粉約0.20 g，精密稱定，置圓底燒瓶中，加80%乙醇60 mL，置水浴中加熱回流1 h，趁熱濾過，殘?jiān)?0%熱乙醇洗滌3次，每次10 mL，將殘?jiān)盀V紙置燒瓶中，加水60 mL，置沸水浴中加熱回流1 h，趁熱濾過，殘?jiān)盁坑脽崴礈?次，每次8 mL，合并濾液與洗液，放冷，轉(zhuǎn)移至100 mL量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得供試品溶液。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取供試品溶液1 mL，置10 mL具塞干燥試管中，照2.4項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制的方法，自“加水至2.0 mL”起，顯色后，分別于 0、0.5、1、2、4、8、12、24 h 依法測定吸光度，RSD 為 1.97%，結(jié)果表明樣品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7 精密度試驗(yàn)

精密吸取對照品溶液0.5 mL于10 mL具塞干燥試管中，照2.4項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制的方法，自“加水至2.0 mL”起，依法測定吸光度，重復(fù)測定6次，RSD為0.62%，結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn)

取60℃干燥至恒重的九曬九曬九華黃精粉約0.2 g，精密稱定，按2.5項(xiàng)供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，平行制備6份供試品溶液，分別精密量取供試品溶液1 mL，置10 mL具塞干燥試管中，照2.4項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制的方法，自“加水至2.0 mL”起，依法測定吸光度。經(jīng)計(jì)算6份供試品溶液的RSD為1.77%，結(jié)果表明該方法重復(fù)性良好。

2.9 加樣回收率試驗(yàn)

取6份經(jīng)60℃干燥至恒重的九曬九曬九華黃精粉約0.2 g，精密稱定，置100 mL圓底燒瓶中，精密加入對照品溶液適量，按照供試品溶液制備方法制備供試品溶液，分別精密量取供試品溶液1 mL，置10 mL具塞干燥試管中，照2.4項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制的方法，自“加水至2.0 mL”起，依法測定吸光度。計(jì)算平均回收率為98.23%，RSD為2.05%，表明該方法回收率良好。

2.10 樣品溶液的測定

精密量取供試品溶液1 mL，置10 mL具塞干燥試管中，照2.4項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制的方法，自“加水至2.0 mL”起，依法測定吸光度，計(jì)算多糖含量，結(jié)果如表1所示。

表1 九華黃精九蒸九曬過程中總多糖含量的變化 （%）

3 總結(jié)與討論

3.1 結(jié)論

通過對九華黃精的九蒸九曬炮制過程中總多糖的含量測定可以得出以下結(jié)論。

（1）野生和栽培九華黃精的總多糖隨著蒸制次數(shù)的增加，總多糖的含量均是先增加后減少，栽培九華黃精的總多糖含量由一蒸一曬的18.68%降為九蒸九曬的10.84%，四蒸四曬時(shí)達(dá)到最高31.51%》。

（2）野生九華黃精的總多糖含量由一蒸一曬的22.18%降為九蒸九曬的12.67%，五蒸五曬時(shí)達(dá)到最高32.81%。

3.2 討論

目前，九華黃精炮制多要反復(fù)蒸制，且以“反復(fù)蒸至滋潤黑色”為經(jīng)驗(yàn)指標(biāo)[15]，九蒸九曬這種炮制方法雖然會導(dǎo)致多糖含量降低，但卻是傳統(tǒng)的經(jīng)典炮制方法，而2015年版《中國藥典》僅規(guī)定了黃精多糖作為其含量限度，這種方法的專屬性不夠，難以反映黃精的質(zhì)量特點(diǎn)[16]。因此，在九華黃精炮制過程中，如何控制蒸制次數(shù)、時(shí)間等，并結(jié)合炮制過程中其它成分的變化，來制定其質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，需要進(jìn)行更深入的研究。