吳小樂 謝海嘯 吳長春 胡王強(qiáng) 陳堅

[摘要] 目的 研究溫州地區(qū)急性白血病與RAD50基因多態(tài)性的關(guān)系。 方法 選取2018年6月～2019年6月來我院血液科就診治療的溫州地區(qū)急性白血病100例患者為研究對象，并將其納入急性白血病組（n=100）。100名體檢正常者為對照組。采用PCR技術(shù)確定兩組RAD50第4號內(nèi)含子（rs17166050）基因分型（GA型、GG型），比較健康對照組與急性白血病組基因型頻率。 結(jié)果 健康對照組與急性白血病組的RAD50（rs17166050）基因型GA型和GG型出現(xiàn)的頻率比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。 結(jié)論 溫州地區(qū)急性白血病與RAD50第4號內(nèi)含子（rs17166050）的G等位基因的易感性相關(guān)。

[關(guān)鍵詞] RAD50;PCR;急性白血病;多態(tài)性

[中圖分類號] R733.71 ? ? ? ? ?[文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A ? ? ? ? ?[文章編號] 1673-9701（2019）29-0029-03

Study on the gene polymorphism of RAD50 in acute leukemia

WU Xiaole XIE Haixiao WU Changchun HU Wangqiang CHEN Jian

The First Affiliated Hospital of Wenzhou Medical University，Wenzhou 325000，China

[Abstract] Objective To study the relationship between acute leukemia and RAD50 gene polymorphism in Wenzhou area. Methods 100 patients with acute leukemia in Wenzhou area who were diagnosed and treated in the department of hematology in our hospital from June 2018 to June 2019 were selected as the study subjects， and they were included in the acute leukemia group（n=100）， 100 normal patients receiving physical examinations were included in the control group. The genotypes （GA type， GG type） of RAD50 intron 4 （rs17166050） was determined by PCR. The genotype frequencies were compared between the healthy control group and the acute leukemia group. Results The differences in the frequencies of RAD50（rs17166050） genotypes GA and GG between the healthy control group and the acute leukemia group were statistically significant（P<0.05）. Conclusion Acute leukemia in Wenzhou area is associated with susceptibility to the G allele of RAD50 intron 4（rs17166050）.

[Key words] RAD50; PCR; Acute leukemia; Polymorphism

急性白血病俗稱“血癌”，患者骨髓中大量的原始細(xì)胞增殖分化蓄積，并廣泛浸潤人體各器官。急性白血病的發(fā)生有多方面的因素，相關(guān)研究[1]表明急性白血病的遺傳因素與腫瘤的發(fā)生有密切關(guān)系，遺傳因素中基因組的不穩(wěn)定性起重要作用。Mosor M等[2]發(fā)現(xiàn)RAD50基因中部分基因變異與兒童急性白血病的易感性相關(guān)。李雯等[3]亦研究表明RAD50的基因多態(tài)性可能會增加我國中部地區(qū)兒童急性淋巴細(xì)胞白血病的患病率。RAD50基因多態(tài)性和急性白血病的關(guān)系鮮見報道。本文以溫州地區(qū)100例急性白血病患者為研究對象，探討急性白血病與RAD50第4號內(nèi)含子rs17166050（單核苷酸多態(tài)性數(shù)據(jù)庫編號為17166050）基因多態(tài)性的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2018年6月～2019年6月來我院血液科就診治療的浙江溫州地區(qū)急性白血病初診100例患者為研究對象，入選標(biāo)準(zhǔn)是經(jīng)骨髓穿刺確診為急性白血病患者。急性白血病組中，男53例，女47例，年齡19～55歲。100例急性白血病患者中有29例急性淋巴細(xì)胞白血病（ALL），8例急性粒細(xì)胞白血病未分化型（M1），11例急性白血病部分分化型（M2），33例急性早幼粒細(xì)胞白血?。∕3），19例急性單核細(xì)胞白血?。∕5）。100例體檢正常者為對照。對照組納入標(biāo)準(zhǔn)：一般體格檢查及血常規(guī)肝腎功能等各項(xiàng)檢查正常。對照組中，男51例，女49例，年齡22～58歲。兩組所在地均為浙江溫州或其周邊地區(qū)。兩組構(gòu)成基本資料無明顯差異（P>0.05）。該項(xiàng)實(shí)驗(yàn)通過溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院倫理委員會審批，所有參與人員均簽署知情同意書。

1.2 RAD rs17166050基因的多態(tài)性分析

急性白血病組治療前和對照組分別于早晨8點(diǎn)采集患者肘部靜脈血2 mL，采用乙二胺四乙酸二鈉（EDTA-2Na）抗凝劑抗凝，充分顛倒混勻。全血標(biāo)本凍存于-40℃冰箱。DNA提取試劑盒來自北京天根生物有限公司，操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。引物設(shè)計分別為：正向5-CGAG AAAT GATC AGTT CTCT TGG-3，反向5-GTTC AATA ACTT AATG GACT ACAA AGT-3，引物由上海桑尼生物科技有限公司合成。PCR總反應(yīng)量為25 μL，包括PCR Buffer，MgCl2，dNTP，Taq DNA聚合酶和引物。反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性5 min，95℃變性30 s，55℃30 s退火，72℃30 s延伸，30個循環(huán)。PCR反應(yīng)擴(kuò)增目的產(chǎn)物長度為186 bp。PCR產(chǎn)物5 μL在1.2%瓊脂糖凝膠上電泳，用Goldview標(biāo)記PCR產(chǎn)物大小，待電泳出目的條帶，割膠提取純化，在全自動測序儀上進(jìn)行測序（美國Applera公司，ABI 3730XL型）。

[18] Lee JH，Mand MR，Deshpande RA，et al. Ataxia Telangiectasia Mutated（ATM）Kinase Activity is regulated by ATP.Driven conformationaI changes in the Mrell/Rad50/Nbsl f MRN）Complex[J].J Biol Chem，2013，288（18）：12840-12851.

[19] Fan C，Zhang J，Ouyang T，et al. RAD50 germline mutations are associated with poor survival in BRCA1/2-negative breast cancer patients[J]. Cancer，2018，143（8）：1935-1942.

[20] 嚴(yán)睿成，王君，黃子真. 突變型Rad50蛋白增強(qiáng)放射線對鼻咽癌細(xì)胞株CNEl的殺傷作用[J]. 中華耳鼻咽頭頸外科雜志，2016，51（10）：746-750.

[21] Rhee JG，Li D，Suntharalingam M，et al. Radiosensitization of head/neck sqaumous cell carcinoma by adenovirus-mediated expression of the Nbs1 protein[J]. International Journal of Radiation Oncology Biology Physics，2007，67（1）：273-278.

[22] Travis HS，John HJ. The MRE11 complex：Starting from the ends[J]. Nat Rev Mol Cell Biol，2011，12（2）：90-103.

[23] Karanika S，Karantanos T，Li L，et al. DNA damage response and prostate cancer： Defects，regulation and therapeutic implications[J].Oncogene，2015，34（22）：2815-2822.

[24] 徐忠偉，王鳳梅，王聰聰. 鈉鉀ATP酶抑制劑通過調(diào)節(jié)DNA損傷感應(yīng)復(fù)合體Mre11/Rad50/Nbs1的表達(dá)誘導(dǎo)肝癌HepG2細(xì)胞周期阻滯[J]. 中國藥理學(xué)通報，2016， 32（3）：323-327.

（收稿日期：2019-04-23）