關(guān)艷麗
(遼寧省微生物科學(xué)研究院,遼寧朝陽122000)
液體菌種有發(fā)菌周期短、發(fā)菌整齊的優(yōu)點[1],隨著食用菌工廠化栽培發(fā)展,液體菌種的應(yīng)用越來越廣泛。但液體菌種都有一定的保存期,超過保存期,菌種的生活力下降,菌種萌發(fā)慢,接種后污染率上升。試驗以平菇(Pleurotusostreatus)為例,探討了液體菌種在不同保存溫度的保存期以及不同發(fā)酵時間的液體菌種菌絲體萌發(fā)及吃料速度,為從事液體菌種生產(chǎn)的工作者確定液體菌種最佳保存期提供參考。
(1)平菇菌株,平菇CCEF89,由遼寧省微生物菌種保藏中心提供。(2)培養(yǎng)基。斜面培養(yǎng)基:PDA培養(yǎng)基。搖瓶液體培養(yǎng)基:玉米粉3%,葡萄糖1%,豆餅3%,KH2PO40.3%,MgSO40.15%,瓊脂0.1%。pH自然。固體培養(yǎng)基:木屑78%,麩皮20%,石膏1%,白糖1%。先將鋸木屑(最好是闊葉樹的鋸木屑)、麩皮、石膏粉混勻,再拌入白糖水,調(diào)節(jié)含水量至60%左右即可。
1.2.1 液體菌種制備
將平菇斜面菌種接入平板,放入培養(yǎng)箱中,于25℃恒溫培養(yǎng),7d左右菌絲長滿平板。取1塊大小為1cm2生長最旺盛的平板邊緣菌絲塊,在無菌條件下接入500mL三角瓶中,瓶中裝液量為100mL,避光、160r/min、25℃恒溫振蕩培養(yǎng)6d,得液體菌種[2,3]。
1.2.2 最佳菌齡的確定
將不同菌齡的平菇液體菌種轉(zhuǎn)接到固體培養(yǎng)基上。在無菌條件下分別吸取液體菌種于固體培養(yǎng)基中,每瓶接液體菌種1mL,25℃,暗光培養(yǎng),觀察菌絲體萌發(fā)及吃料情況,取其平均值。
1.2.3 菌種萌發(fā)試驗
設(shè)保存溫度5℃,10℃,15℃,20℃,做保存時間為3d、6d、9d、12d、15d、18d的菌種萌發(fā)試驗。每瓶隨機挑取6個菌絲球,置PDA培養(yǎng)基上,25℃恒溫培養(yǎng),取6個點萌動時間的平均數(shù),記錄菌球萌發(fā)情況。
1.2.4 菌種成活率試驗
將在25℃、160r/min、暗光培養(yǎng)好的最佳菌齡的液體菌種用500mL三角瓶分裝約300mL封口,分別置于5℃,10℃,15℃,20℃溫度保存,保存時間為3d、6d、9d、12d、15d、18d。取上述保存的液體菌種,每瓶隨機挑取6個菌絲球,置PDA培養(yǎng)基上,25℃恒溫培養(yǎng),以接種后3d菌種的萌動為準,計算成活率。
1.2.5 菌種吃料試驗
分別吸取不同保存條件下的平菇液體菌種1mL接種在固體培養(yǎng)基中,25℃,暗光培養(yǎng),每個處理3個重復(fù),測定菌絲吃料速度,取其平均值。
表1 不同菌齡菌種吃料試驗結(jié)果
從表1可以看出不同菌齡液體菌種吃料速度相差較大,其中培養(yǎng)96h菌種吃料速度最快,達到0.66cm/d。隨著菌齡的繼續(xù)延長菌種吃料速度減慢,因此在后續(xù)的試驗中以培養(yǎng)96h的液體菌種作為研究對象。
液體菌種平皿萌發(fā)試驗結(jié)果見表2。由表2可看出:供試保存溫度隨著保存期的延長菌種活力下降,萌發(fā)時間均延長,試驗保存溫度保存期為3d液體菌種萌發(fā)時間差異不大;保存期相同,菌種活力隨保存溫度升高而下降,萌發(fā)時間延長。
表2 菌種萌發(fā)時間試驗結(jié)果
液體菌種平皿成活率試驗結(jié)果見表3。由表3可看出:保存溫度低于10℃,保存期在18d之內(nèi)對菌種成活率沒有影響;保存溫度超過15℃時,隨著保存時間的延長菌種的成活率明顯下降;超過18d,菌種有產(chǎn)氣,分層現(xiàn)象,但菌種沒有污染,接種后,菌種萌發(fā)遲,易被雜菌感染。
表3 菌種成活率試驗結(jié)果
前期試驗表明保存溫度高,菌種的活力明顯下降,所以只進行了兩個保存溫度不同保存時間液體菌種吃料的試驗,結(jié)果見表4。
表4 不同溫度不同保存時間平菇液體菌種吃料情況
由表4可知,4℃保存液體菌種均比15℃保存菌種吃料速度快,同一溫度條件,隨著保存時間的延長,菌種的吃料速度會逐漸下降。
試驗考察了不同保存溫度及不同保存期平菇液體菌種的萌發(fā)時間、成活率及吃料情況。試驗結(jié)果表明,平菇液體菌種的活力受保存溫度和保存時間的影響較大,隨著保存溫度的升高、保存時間的延長,菌種的活力逐漸下降。試驗條件下培養(yǎng)96h平菇液體菌種活力最強,接種后菌絲的吃料速度最快,吃料速度達到0.66cm/d;4℃、保存期為12d左右不會影響菌種萌發(fā)及菌種活力,保存溫度25℃最多可保存3d。