關(guān)艷麗

（遼寧省微生物科學(xué)研究院，遼寧朝陽122000）

液體菌種有發(fā)菌周期短、發(fā)菌整齊的優(yōu)點(diǎn)[1]，隨著食用菌工廠化栽培發(fā)展，液體菌種的應(yīng)用越來越廣泛。但液體菌種都有一定的保存期，超過保存期，菌種的生活力下降，菌種萌發(fā)慢，接種后污染率上升。試驗(yàn)以平菇（Pleurotusostreatus）為例，探討了液體菌種在不同保存溫度的保存期以及不同發(fā)酵時(shí)間的液體菌種菌絲體萌發(fā)及吃料速度，為從事液體菌種生產(chǎn)的工作者確定液體菌種最佳保存期提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

（1）平菇菌株，平菇CCEF89，由遼寧省微生物菌種保藏中心提供。（2）培養(yǎng)基。斜面培養(yǎng)基：PDA培養(yǎng)基。搖瓶液體培養(yǎng)基：玉米粉3%，葡萄糖1%，豆餅3%，KH2PO40.3%，MgSO40.15%，瓊脂0.1%。pH自然。固體培養(yǎng)基：木屑78%，麩皮20%，石膏1%，白糖1%。先將鋸木屑（最好是闊葉樹的鋸木屑）、麩皮、石膏粉混勻，再拌入白糖水，調(diào)節(jié)含水量至60%左右即可。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 液體菌種制備

將平菇斜面菌種接入平板，放入培養(yǎng)箱中，于25℃恒溫培養(yǎng)，7d左右菌絲長滿平板。取1塊大小為1cm2生長最旺盛的平板邊緣菌絲塊，在無菌條件下接入500mL三角瓶中，瓶中裝液量為100mL，避光、160r/min、25℃恒溫振蕩培養(yǎng)6d，得液體菌種[2，3]。

1.2.2 最佳菌齡的確定

將不同菌齡的平菇液體菌種轉(zhuǎn)接到固體培養(yǎng)基上。在無菌條件下分別吸取液體菌種于固體培養(yǎng)基中，每瓶接液體菌種1mL，25℃，暗光培養(yǎng)，觀察菌絲體萌發(fā)及吃料情況，取其平均值。

1.2.3 菌種萌發(fā)試驗(yàn)

設(shè)保存溫度5℃，10℃，15℃，20℃，做保存時(shí)間為3d、6d、9d、12d、15d、18d的菌種萌發(fā)試驗(yàn)。每瓶隨機(jī)挑取6個(gè)菌絲球，置PDA培養(yǎng)基上，25℃恒溫培養(yǎng)，取6個(gè)點(diǎn)萌動(dòng)時(shí)間的平均數(shù)，記錄菌球萌發(fā)情況。

1.2.4 菌種成活率試驗(yàn)

將在25℃、160r／min、暗光培養(yǎng)好的最佳菌齡的液體菌種用500mL三角瓶分裝約300mL封口，分別置于5℃，10℃，15℃，20℃溫度保存，保存時(shí)間為3d、6d、9d、12d、15d、18d。取上述保存的液體菌種，每瓶隨機(jī)挑取6個(gè)菌絲球，置PDA培養(yǎng)基上，25℃恒溫培養(yǎng)，以接種后3d菌種的萌動(dòng)為準(zhǔn)，計(jì)算成活率。

1.2.5 菌種吃料試驗(yàn)

分別吸取不同保存條件下的平菇液體菌種1mL接種在固體培養(yǎng)基中，25℃，暗光培養(yǎng)，每個(gè)處理3個(gè)重復(fù)，測(cè)定菌絲吃料速度，取其平均值。

表1 不同菌齡菌種吃料試驗(yàn)結(jié)果

2 結(jié)果與分析

2.1 平菇液體菌種最佳菌齡

從表1可以看出不同菌齡液體菌種吃料速度相差較大，其中培養(yǎng)96h菌種吃料速度最快，達(dá)到0.66cm/d。隨著菌齡的繼續(xù)延長菌種吃料速度減慢，因此在后續(xù)的試驗(yàn)中以培養(yǎng)96h的液體菌種作為研究對(duì)象。

2.2 菌種萌發(fā)試驗(yàn)結(jié)果

液體菌種平皿萌發(fā)試驗(yàn)結(jié)果見表2。由表2可看出：供試保存溫度隨著保存期的延長菌種活力下降，萌發(fā)時(shí)間均延長，試驗(yàn)保存溫度保存期為3d液體菌種萌發(fā)時(shí)間差異不大；保存期相同，菌種活力隨保存溫度升高而下降，萌發(fā)時(shí)間延長。

表2 菌種萌發(fā)時(shí)間試驗(yàn)結(jié)果

2.3 菌種成活率試驗(yàn)結(jié)果

液體菌種平皿成活率試驗(yàn)結(jié)果見表3。由表3可看出：保存溫度低于10℃，保存期在18d之內(nèi)對(duì)菌種成活率沒有影響；保存溫度超過15℃時(shí)，隨著保存時(shí)間的延長菌種的成活率明顯下降；超過18d，菌種有產(chǎn)氣，分層現(xiàn)象，但菌種沒有污染，接種后，菌種萌發(fā)遲，易被雜菌感染。

表3 菌種成活率試驗(yàn)結(jié)果

2.4 菌種吃料試驗(yàn)

前期試驗(yàn)表明保存溫度高，菌種的活力明顯下降，所以只進(jìn)行了兩個(gè)保存溫度不同保存時(shí)間液體菌種吃料的試驗(yàn)，結(jié)果見表4。

表4 不同溫度不同保存時(shí)間平菇液體菌種吃料情況

由表4可知，4℃保存液體菌種均比15℃保存菌種吃料速度快，同一溫度條件，隨著保存時(shí)間的延長，菌種的吃料速度會(huì)逐漸下降。

3 小結(jié)

試驗(yàn)考察了不同保存溫度及不同保存期平菇液體菌種的萌發(fā)時(shí)間、成活率及吃料情況。試驗(yàn)結(jié)果表明，平菇液體菌種的活力受保存溫度和保存時(shí)間的影響較大，隨著保存溫度的升高、保存時(shí)間的延長，菌種的活力逐漸下降。試驗(yàn)條件下培養(yǎng)96h平菇液體菌種活力最強(qiáng)，接種后菌絲的吃料速度最快，吃料速度達(dá)到0.66cm/d；4℃、保存期為12d左右不會(huì)影響菌種萌發(fā)及菌種活力，保存溫度25℃最多可保存3d。