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        逍遙散對(duì)咪喹莫特誘導(dǎo)的銀屑病樣小鼠模型皮損及抑郁神經(jīng)遞質(zhì)的影響*

        2019-11-21 05:20:28郭簡(jiǎn)寧趙京霞底婷婷李寧飛蒙玉嬌郭昕煒劉正榮翟春艷郭肖瑤
        中國(guó)病理生理雜志 2019年11期
        關(guān)鍵詞:甲氨蝶呤造模銀屑病

        郭簡(jiǎn)寧, 王 燕, 趙京霞, 底婷婷, 張 璐, 李寧飛, 蒙玉嬌, 郭昕煒, 劉正榮, 翟春艷, 劉 宇, 郭肖瑤, 齊 聰, 李 萍△

        (1北京中醫(yī)藥大學(xué), 北京 100029; 2首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京中醫(yī)醫(yī)院, 北京市中醫(yī)研究所, 銀屑病中醫(yī)臨床基礎(chǔ)研究北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 北京 100010)

        銀屑病是一種以角質(zhì)形成細(xì)胞過(guò)度增殖和分化為特征,并具有遺傳特性的炎癥性皮膚疾病,在自然人群中的患病率為0.1%~3%[1],近年來(lái)銀屑病的發(fā)病率逐年升高。銀屑病不僅是一種自身免疫性疾病,也是一種心身疾病,其臨床典型表現(xiàn)為鱗屑性紅斑或斑塊,且皮損呈對(duì)稱(chēng)分布,精神變化、情緒緊張可加重病情。臨床研究表明,銀屑病患者具有抑郁、焦慮癥的風(fēng)險(xiǎn),且伴發(fā)的焦慮癥往往與抑郁癥并存[2],這些潛在的精神疾病,可能使銀屑病遷延不愈或惡化[3]。針對(duì)銀屑病患者出現(xiàn)的精神心理問(wèn)題,給予改善精神心理的藥物、生物制劑和特殊心理療法有一定的治療作用[4-5]。

        精神心理因素屬于中醫(yī)情志范疇,肝主情志,所以針對(duì)銀屑病的心身疾病屬性,各醫(yī)家提出“從肝論治”銀屑病,并取得了良好療效[6-8]。逍遙散有疏肝解郁,養(yǎng)血健脾之功,在臨床上可運(yùn)用于治療銀屑病[9],但其作用機(jī)制尚不明確。本實(shí)驗(yàn)采用咪喹莫特誘導(dǎo)的銀屑病樣小鼠模型進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究[10],此種模型小鼠伴有一定情志狀態(tài)改變[11]。故此,本項(xiàng)工作觀察咪喹莫特誘導(dǎo)的銀屑病樣小鼠是否伴隨抑郁癥狀,從銀屑病樣皮損、行為學(xué)改變和抑郁癥相關(guān)神經(jīng)遞質(zhì)的含量變化角度,探究逍遙散的治療效果,明確其可能的作用機(jī)制及靶點(diǎn),為“從肝論治”銀屑病提供參考資料。

        材 料 和 方 法

        1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

        36只SPF級(jí)雄性BALB/c小鼠,體質(zhì)量18~20 g,6~8周齡,由北京華阜康生物科技股份有限公司提供,動(dòng)物許可證編號(hào)為SCXK(京)2014-0013。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)獲得北京中醫(yī)醫(yī)院動(dòng)物倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)。

        2 試劑、藥物及儀器

        2.1試劑和藥物 逍遙散采購(gòu)自北京同仁堂藥店,藥物組成為:柴胡、茯苓、白術(shù)、當(dāng)歸、白芍、甘草、生姜和薄荷。組方按照成人(60 kg)的劑量,根據(jù)人與動(dòng)物間藥物劑量換算比例換算成小鼠劑量[11],按中藥常規(guī)煎煮法制作成水煎劑,每日灌胃。另有甲氨蝶呤片(上海信誼藥廠有限公司)、5%咪喹莫特乳膏(四川明欣藥業(yè)有限責(zé)任公司)、DAB顯色液(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)、3% (質(zhì)量分?jǐn)?shù)) H2O2去氧離子水及抗Ki67單克隆抗體和CD3單克隆抗體(eBioscience);山羊血清工作液(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司);甲醇(色譜純)和甲酸(色譜純)均購(gòu)于北京迪科馬科技有限公司。

        2.2儀器 徠卡全自動(dòng)染色機(jī)、輪轉(zhuǎn)切片機(jī),Agilent 6410 QQQ LC-MS分析系統(tǒng)由Agilent 1290液相色譜儀及Agilent 6410 QQQ三重四極桿質(zhì)譜檢測(cè)器組成,Masshunter工作站。Hettich mzkro 220R臺(tái)式低溫高速離心機(jī),Gene G560E渦旋式混勻儀[STUART SBH130D/3樣品濃縮儀(氮吹儀)]。

        3 方法

        3.1動(dòng)物造模、分組和給藥 參考Fits等[10]的小鼠銀屑病樣模型制備方法造模。實(shí)驗(yàn)前戊巴比妥鈉(80 mg/kg)腹腔注射麻醉小鼠,背部備皮,面積約2 cm×3 cm,備皮后單籠飼養(yǎng)。依據(jù)隨機(jī)數(shù)字表法,將小鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照(control)組、模型(model)組、甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)組、逍遙散高、中、低劑量(Xiaoyaosang high, medium and low dose, XH、XM、XL)組,每組6只??瞻讓?duì)照組小鼠背部每日涂抹凡士林,余各組小鼠背部每日涂抹5%咪喹莫特乳膏62.5 mg;灌胃抹藥前進(jìn)行,每天 1 次,每次 0.2 mL,連續(xù)8 d:空白對(duì)照組與模型組給予0.2 mL 0.9% (質(zhì)量分?jǐn)?shù))的氯化鈉注射液,甲氨蝶呤組給予甲氨蝶呤片溶液0.2 mL (1 mg/kg),逍遙散高、中、低劑量組分別給予等量的不同濃度的中藥藥液,依次為7.58、3.79和1.89 kg/L。

        3.2檢測(cè)指標(biāo)及方法

        3.2.1一般狀態(tài)的觀察 每日觀察各組小鼠的毛發(fā)色澤、精神狀態(tài)、活動(dòng)情況,以及舔舐梳理毛發(fā)次數(shù)。

        3.2.2小鼠體重 造模前對(duì)各組小鼠體質(zhì)量進(jìn)行測(cè)量,造模第9天,取材前對(duì)其體質(zhì)量進(jìn)行測(cè)量,觀察小鼠造模前后體重的變化。

        3.2.3小鼠銀屑病樣皮損面積和疾病嚴(yán)重程度評(píng)分(PASI評(píng)分) 每天對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠皮損進(jìn)行拍照,根據(jù)PASI評(píng)分標(biāo)準(zhǔn),采用雙盲法評(píng)判各組小鼠皮損嚴(yán)重程度,即一實(shí)驗(yàn)人員將小鼠組別編號(hào)打亂,采用隨機(jī)數(shù)字表法重新對(duì)小鼠編排新的序列號(hào),找另一PASI評(píng)分經(jīng)驗(yàn)豐富的實(shí)驗(yàn)人員對(duì)重新編號(hào)的小鼠評(píng)分,負(fù)責(zé)本實(shí)驗(yàn)的研究人員與PASI評(píng)分的實(shí)驗(yàn)人員對(duì)具體各組小鼠的PASI評(píng)分并不知曉。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后對(duì)組別編號(hào)進(jìn)行揭盲,統(tǒng)計(jì)分析數(shù)據(jù),繪制PASI評(píng)分趨勢(shì)圖,動(dòng)態(tài)觀察小鼠皮損的變化情況。

        3.2.4測(cè)量小鼠皮損表皮厚度 造模第9天,取小鼠背部皮膚固定于多聚甲醛中,脫水、包埋后制備5 μm石蠟切片。用蘇木精-伊紅(hematoxylineosin,HE)染色后在400倍光鏡下拍片,每個(gè)標(biāo)本選5張不同切片,在每張切片中隨機(jī)測(cè)量5處表皮厚度,比較表皮層變化情況。

        3.2.5小鼠皮損表皮層異常增生標(biāo)志物Ki67的表達(dá)及CD3+T細(xì)胞浸潤(rùn)情況檢測(cè) 制備5 μm石蠟切片,分別進(jìn)行Ki67和CD3染色,使用免疫熒光法(immunofluorescence,IF)檢測(cè)Ki67的表達(dá),Ki67是一種增生細(xì)胞相關(guān)的核抗原,陽(yáng)性細(xì)胞核呈綠色熒光,免疫組織化學(xué)法(immunohistochemistry,IHC)檢測(cè)CD3的表達(dá)。在400倍鏡下,每例標(biāo)本隨機(jī)選取5個(gè)視野并拍照,應(yīng)用IPP 6.0圖像分析系統(tǒng)記錄數(shù)據(jù)。

        3.2.6糖水偏好實(shí)驗(yàn) 于造模第7天,進(jìn)行糖水偏好實(shí)驗(yàn)。在實(shí)驗(yàn)前對(duì)各組小鼠禁食12 h,12 h后給予小鼠1瓶1 %的蔗糖水和1瓶純凈水,并稱(chēng)量?jī)蓚€(gè)水瓶的重量,將水瓶位置隨機(jī)放置以防小鼠位置偏愛(ài)效應(yīng),讓其自主選擇飲水,1 h后分別稱(chēng)量?jī)蓚€(gè)水瓶的重量,計(jì)算出蔗糖水和純凈水的消耗量,根據(jù)公式:糖水偏愛(ài)率(%)=蔗糖水消耗量/(蔗糖水消耗量+純凈水的消耗量)×100%,計(jì)算出各組小鼠糖水偏愛(ài)率。

        3.3小鼠海馬、下丘腦組織樣品處理 各組織樣品稱(chēng)重,加入200 μL 0.1%甲酸-水勻漿,4 024 ×g、 4 ℃離心10 min,取上清液100 μL并加入0.1%甲酸-甲醇300 μL,混勻,15 493 ×g、 4 ℃離心10 min,取上清液350 μL氮?dú)獯蹈?,?0 μL 0.1%甲酸-水復(fù)溶,15 493 ×g、 4 ℃離心10 min,取上清液進(jìn)樣。

        3.4液相條件 色譜柱:Waters AtlantisTMT 3(2.1 mm×100 mm, 3 μm)。流動(dòng)相為水(0.1%甲酸)和甲醇。梯度洗脫:0 min,2%甲醇;0~3 min,2%~60%甲醇,3~5 min,60%~100%甲醇。流速為0.4 mL/min,進(jìn)樣量為5 μL,柱溫30 ℃。

        3.5質(zhì)譜條件 ESI離子源,正離子檢測(cè)方式,MRM模式。離子源條件為干燥氣溫度(Gas Temp):300 ℃,干燥氣流量(Gas Flow):10 L/min,霧化器壓力(Nebulizer):45 psi,毛細(xì)管電壓(Capillary):4 000 V。

        4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

        采用SPSS 20.0 和GraphPad Prism 6.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析及作圖。計(jì)量數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示,兩組間比較采用t檢驗(yàn),多組間比較采用單因素方差分析;計(jì)量且正態(tài)分布資料相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,非正態(tài)資料采用Spearman秩相關(guān)進(jìn)行分析;以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        結(jié) 果

        1 一般狀態(tài)的觀察

        造模前,各組小鼠的毛發(fā)整齊、色澤明亮,精神狀態(tài)良好、好動(dòng);造模后觀察發(fā)現(xiàn),與空白對(duì)照組相比,模型組小鼠毛發(fā)凌亂、色澤枯黃,精神萎靡,舔舐梳理毛發(fā)次數(shù)較空白組減少;甲氨蝶呤組和逍遙散各劑量組小鼠較模型組小鼠上述情況有所緩解。

        2 各組小鼠體質(zhì)量變化

        分別在造模前和取材前對(duì)各組小鼠體質(zhì)量進(jìn)行測(cè)量,見(jiàn)表1,計(jì)算各組小鼠造模前后體質(zhì)量的變化,空白對(duì)照組小鼠體質(zhì)量變化不明顯,體質(zhì)量變化幅度顯著低于模型組(P<0.01)。此外,逍遙散高劑量組體質(zhì)量變化幅度亦顯著低于模型組(P<0.05),見(jiàn)圖1。

        3 逍遙散對(duì)咪喹莫特誘導(dǎo)的銀屑病樣小鼠皮損的影響

        觀察各組小鼠皮損變化,空白對(duì)照組小鼠皮膚白嫩光滑,無(wú)鱗屑、紅斑和浸潤(rùn)現(xiàn)象;模型組于第2~3天開(kāi)始出現(xiàn)輕微皮損,其背部皮膚鱗屑、紅斑和浸潤(rùn),隨造模時(shí)間的延長(zhǎng)不斷加重,第8天皮損最嚴(yán)重,銀白色鱗屑肥厚,表皮紅腫,皮膚變硬變厚浸潤(rùn)明顯,銀屑病樣皮損模型形成;與模型組同期相比,甲氨蝶呤組和逍遙散各劑量組皮膚鱗屑、紅斑和浸潤(rùn)情況減輕,甲氨蝶呤組與逍遙散高劑量組小鼠皮膚鱗屑、紅斑和浸潤(rùn)情況改善程度明顯,見(jiàn)圖2。

        表1 各組小鼠造模前后體質(zhì)量

        Table 1.Body mass of mice in each group before and after mo-deling (g. Mean±SD.n=6)

        Group Before animal modelingAfter animal modelingControl21.5±0.319.9±0.3Model22.1±0.318.4±0.6MTX22.0±0.319.2±0.5XH21.8±0.219.5±0.4XM21.8±0.319.1±0.4XL21.6±0.118.7±0.5

        Figure 1.The body mass change of mice in each group before and after modeling. Mean±SD.n=6.*P<0.05,**P<0.01vsmodel group.

        圖1 各組小鼠造模前后體質(zhì)量變化

        Figure 2.Gross observation of mice at day 9 after modeling. A: control; B: model; C: MTX; D: XH; E: XM; F: XL.

        圖2 各組小鼠于造模第9日時(shí)的皮損表現(xiàn)

        制作PASI評(píng)分趨勢(shì)圖,空白對(duì)照組小鼠背部皮膚正常無(wú)改變,其鱗屑、紅斑、浸潤(rùn)和總分分值始終為0;其余各組小鼠從造模第2天背部皮膚出現(xiàn)皮損起,其鱗屑、浸潤(rùn)、紅斑和總分分值,隨時(shí)間推移,不同程度的升高,于第8天達(dá)到峰值,模型組的鱗屑、浸潤(rùn)、紅斑和總分分值最高;其中逍遙散高劑量組可顯著降低浸潤(rùn)情況和總分分值(P<0.05),甲氨蝶呤組與逍遙散中、低劑量組評(píng)分較模型組有降低趨勢(shì),但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),見(jiàn)圖3。

        Figure 3.PASI scoring trend chart of skin lesions in mice of each group. PASI: psoriasis area and severity index. Mean±SD.n=6.*P<0.05,**P<0.01vsmodel group.

        圖3 各組小鼠皮損PASI評(píng)分趨勢(shì)圖

        4 HE染色觀察各組小鼠皮損組織形態(tài)學(xué)變化

        HE染色結(jié)果顯示,空白對(duì)照組小鼠皮膚表皮層較薄,模型組較空白對(duì)照組表皮層明顯增厚數(shù)倍,并可見(jiàn)明顯的角化不全及角化過(guò)度、嚴(yán)重的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)以及Munro微膿腫;甲氨蝶呤組和逍遙散各劑量組組織形態(tài)學(xué)變化相似,表皮層均比模型組薄,角化不全和角化過(guò)度減少,炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)程度減輕及Munro微膿腫減少,見(jiàn)圖4。

        Figure 4.Histomorphological changes of mice in each group after HE staining. A: control; B: model; C: MTX; D: XH; E: XM; F: XL.

        圖4 各組小鼠皮膚HE染色后組織形態(tài)學(xué)改變

        測(cè)量各組小鼠表皮垂直厚度,模型組表皮層厚度比空白對(duì)照組增厚4~5倍(P<0.01);甲氨蝶呤組和逍遙散各劑量組表皮層厚度均較模型組減少(P<0.01),見(jiàn)圖5。

        5 各組小鼠皮損中Ki67和CD3+T淋巴細(xì)胞表達(dá)情況檢測(cè)

        免疫熒光染色法觀察各組小鼠皮損中Ki67表達(dá)情況,空白對(duì)照組小鼠Ki67表達(dá)于基底層細(xì)胞,見(jiàn)圖6A;模型組小鼠Ki67在基底層和顆粒層均有表達(dá),其陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量較空白對(duì)照組顯著增多(P<0.01);甲氨蝶呤組和逍遙散各劑量組小鼠陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量均較模型組顯著減少(P<0.01);逍遙散中劑量組陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量顯著少于甲氨蝶呤組(P<0.05),見(jiàn)圖6、表2。

        Figure 5.Comparison of epidermal thickness between each group on day 9 after modeling. Mean±SD.n=6.##P<0.01vscontrol group;**P<0.01vsmodel group.

        圖5 各組小鼠造模第9天時(shí)的表皮厚度比較

        Figure 6.The expression of Ki67 in skin of mice in each group (IF). Blue: DAPI; Green: Alexa Fluor488. A: control; B: model; C: MTX; D: XH; E: XM; F: XL.

        圖6 各組小鼠皮膚中Ki67的表達(dá)情況

        表2 各組小鼠皮膚皮損中Ki67及CD3陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量

        Table 2.The number of Ki67 and CD3 positive cells in skin lesions of mice in each group (Number. Mean±SD.n=6)

        GroupKi67CD3Control3.6±0.54.3±0.3Model65.3±3.0##22.40±1.6##MTX40.5±3.2##??9.9±0.4##??XH38.9±1.7##??10.5±0.6##??XM30.8±1.6##??△10.6±0.6##??XL41.7±1.6##??10.1±0.5##??

        ##P<0.01vscontrol group;**P<0.01vsmodel;△P<0.05vsMTX group.

        免疫組織化學(xué)染色法觀察各組小鼠皮損中真皮層CD3陽(yáng)性T細(xì)胞浸潤(rùn)情況,空白對(duì)照組小鼠真皮層CD3陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量較少,模型組小鼠較空白對(duì)照組CD3陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量顯著增多(P<0.01),甲氨蝶呤組和逍遙散各劑量組小鼠皮膚組織中CD3陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量顯著少于模型組(P<0.01),見(jiàn)圖7、表2。

        6 糖水偏好實(shí)驗(yàn)

        糖水偏好實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,模型組小鼠糖水偏愛(ài)率顯著低于空白對(duì)照組小鼠(P<0.01),甲氨蝶呤組和逍遙散各劑量組小鼠糖水偏愛(ài)率較模型組小鼠有一定升高趨勢(shì),但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),見(jiàn)圖8。

        7 小鼠海馬和下丘腦組織中多巴胺(dopamine,DA)、3,4-二羥基苯乙酸(3,4-Dihydroxyphenylacetic acid, DOPAC)、高香草酸(homovanillic acid,HVA)和腎上腺素(adrenaline,AD)等神經(jīng)遞質(zhì)含量的變化

        液相色譜-質(zhì)譜分析結(jié)果顯示,與空白對(duì)照組相比,模型組海馬區(qū)腦組織中DOPAC、谷氨酸(glutamate,Glu)、AD和γ-氨基丁酸(γ-aminobutylic acid,GABA)含量顯著降低(P<0.05),DA和HVA的含量無(wú)顯著差異(P>0.05);與空白對(duì)照組相比,甲氨蝶呤組海馬區(qū)腦組織中DA、AD、DOPAC和GLU含量顯著降低(P<0.05),見(jiàn)表3。

        與空白對(duì)照組小鼠相比,模型組下丘腦區(qū)腦組織AD和GABA的含量顯著降低(P<0.05),DA、DOPAC、HVA和GLU的含量無(wú)顯著差異(P>0.05);甲氨蝶呤組下丘腦區(qū)腦組織GABA含量明顯低于空白對(duì)照組(P<0.01),逍遙散高劑量組下丘腦區(qū)腦組織AD的含量較模型組顯著增多(P<0.01),逍遙散低劑量組下丘腦區(qū)腦組織HVA的含量較模型組顯著增多(P<0.01),見(jiàn)表4。

        Figure 7.Expression of CD3 positive cells in the skin of mice in each group(IHC). A: control; B: model; C: MTX; D: XH; E: XM; F: XL.

        圖7 各組小鼠皮膚中CD3陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)情況

        Figure 8.The sugar water preference rate of each group on the seventh day after modeling. Mean±SD.n=5.##P<0.01vscontrol group.

        圖8 造模第7天時(shí)各組小鼠的糖水偏好率

        8 PASI評(píng)分與小鼠海馬和下丘腦區(qū)腦組織中DA、DOPAC、HVA和AD等含量的相關(guān)性分析

        DA、DOPAC、HVA和AD等計(jì)量資料均呈正態(tài)分布,采用雙變量相關(guān)分析統(tǒng)計(jì)其各自與PASI評(píng)分的相關(guān)性,結(jié)果顯示,PASI評(píng)分與海馬區(qū)腦組織DOPAC、AD、GLU和GABA的含量呈負(fù)相關(guān),與下丘腦區(qū)腦組織AD、GLU和GABA的含量也呈負(fù)相關(guān),即PASI評(píng)分越高,小鼠背部皮損越重,抑郁相關(guān)神經(jīng)遞質(zhì)表達(dá)量越低,表明小鼠抑郁程度越高。海馬區(qū)腦組織DA、HVA含量,下丘腦區(qū)腦組織DA、DOPAC和HVA含量與PASI評(píng)分無(wú)相關(guān)性(P>0.05),見(jiàn)圖9、10。

        表3 各組小鼠海馬區(qū)腦組織神經(jīng)遞質(zhì)含量

        #P<0.05,##P<0.01vscontrol group;**P<0.01vsmodel group.

        表4 各組小鼠下丘腦區(qū)腦組織神經(jīng)遞質(zhì)含量

        #P<0.05,##P<0.01vscontrol group;**P<0.01vsmodel group.

        Figure 9.Scatter plot of the relationship between DA, DOPAC, HVA, AD, Glu, GABA and PASI score in the hippocampus.

        圖9 海馬區(qū)腦組織DA、DOPAC、HVA、Glu、GABA和AD等神經(jīng)遞質(zhì)含量與PASI評(píng)分關(guān)系散點(diǎn)圖

        討 論

        中醫(yī)藥在治療銀屑病等皮膚疾病中積累了豐富的臨床經(jīng)驗(yàn),形成了完整的辨證論治體系,具有一定優(yōu)勢(shì)。中醫(yī)認(rèn)為銀屑病屬于情志疾病,與“心”、“肝”最為密切[12],肝主疏泄,藏血,在體合筋,其華在爪;若肝失疏泄,氣機(jī)不暢,久郁化火,熱毒壅絡(luò),則發(fā)紅斑,顏色鮮紅,搔抓皮損有篩狀出血;肝不藏血,血無(wú)法營(yíng)養(yǎng)滋潤(rùn)腠理,所以有肌膚干燥脫屑、鱗屑疊起,瘙癢等癥;肝血虛,爪甲不榮,而出現(xiàn)指甲頂針樣改變[13]。銀屑病遷延不愈,給患者造成心身打擊,情志失調(diào)反過(guò)來(lái)亦可影響肝的生理功能,形成惡性循環(huán)。逍遙散源于宋《太平惠民和劑局方》,其藥味配伍,既補(bǔ)肝體,又助肝用,氣血兼顧,達(dá)到疏肝解郁、養(yǎng)血健脾之效,可針對(duì)銀屑病肝失疏泄、肝血失養(yǎng)等病機(jī)。

        實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,逍遙散可改善銀屑病樣小鼠皮損,降低PASI評(píng)分及表皮厚度,減少表皮細(xì)胞增殖,角化不全和T細(xì)胞浸潤(rùn)。此外通過(guò)小鼠一般狀態(tài)、體質(zhì)量變化和糖水偏好實(shí)驗(yàn),觀察小鼠抑郁狀態(tài),實(shí)驗(yàn)小鼠取材時(shí)間為第9天,空白對(duì)照組與模型組小鼠行為學(xué)結(jié)果產(chǎn)生差異后進(jìn)行取材。糖水偏好實(shí)驗(yàn)是基于小鼠對(duì)甜味偏好這一特點(diǎn),可評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物抑郁樣行為及抗抑郁藥物治療效果,當(dāng)小鼠出現(xiàn)抑郁樣行為時(shí),其對(duì)糖水的偏嗜度也隨之降低[14]。實(shí)驗(yàn)表明,逍遙散可提高小鼠糖水偏好率。除此之外,我們采用HPLC-MS技術(shù),分析各組小鼠腦組織海馬區(qū)和下丘腦區(qū)AD、GABA和GLU等反應(yīng)抑郁程度的單胺類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)的含量。海馬和下丘腦區(qū)是應(yīng)激反應(yīng)作用靶區(qū),參與情緒反應(yīng),抑郁癥相關(guān)研究多集中于這2個(gè)腦區(qū)。結(jié)果顯示空白對(duì)照組神經(jīng)遞質(zhì)含量顯著高于模型組和甲氨蝶呤組,逍遙散可顯著提高下丘腦區(qū)AD和HVA的含量,其余神經(jīng)遞質(zhì)有一定升高趨勢(shì),但沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。以上結(jié)果顯示出此聯(lián)系后,我們進(jìn)一步研究了銀屑病與抑郁相關(guān)神經(jīng)遞質(zhì)的相關(guān)性分析,結(jié)果表明PASI評(píng)分與海馬區(qū)DOPAC、AD、GLU和GABA的含量呈負(fù)相關(guān),與下丘腦區(qū)AD、GLU和GABA的含量也呈負(fù)相關(guān),即PASI評(píng)分越高,小鼠背部皮損越重,抑郁相關(guān)神經(jīng)遞質(zhì)表達(dá)量越低,提示小鼠抑郁程度越高。

        Figure 10.Scatter plot of the relationship between DA, DOPAC, HVA, AD, Glu, GABA and PASI score in the in hypothalamus.

        圖10 下丘腦區(qū)腦組織DA、DOPAC、HVA、Glu、GABA和AD等神經(jīng)遞質(zhì)含量與PASI評(píng)分關(guān)系散點(diǎn)圖

        綜上所述,逍遙散可有效緩解小鼠銀屑病樣皮損,在一定程度上可減輕其抑郁程度,銀屑病發(fā)病機(jī)制與抑郁癥相互作用靶點(diǎn),還有待進(jìn)一步探究。

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