郭簡(jiǎn)寧， 王 燕， 趙京霞， 底婷婷， 張 璐， 李寧飛， 蒙玉嬌， 郭昕煒， 劉正榮， 翟春艷， 劉 宇， 郭肖瑤， 齊 聰， 李 萍△

(1北京中醫(yī)藥大學(xué)， 北京 100029； 2首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京中醫(yī)醫(yī)院， 北京市中醫(yī)研究所， 銀屑病中醫(yī)臨床基礎(chǔ)研究北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 北京 100010)

銀屑病是一種以角質(zhì)形成細(xì)胞過(guò)度增殖和分化為特征，并具有遺傳特性的炎癥性皮膚疾病，在自然人群中的患病率為0.1%～3%[1]，近年來(lái)銀屑病的發(fā)病率逐年升高。銀屑病不僅是一種自身免疫性疾病，也是一種心身疾病，其臨床典型表現(xiàn)為鱗屑性紅斑或斑塊，且皮損呈對(duì)稱(chēng)分布，精神變化、情緒緊張可加重病情。臨床研究表明，銀屑病患者具有抑郁、焦慮癥的風(fēng)險(xiǎn)，且伴發(fā)的焦慮癥往往與抑郁癥并存[2]，這些潛在的精神疾病，可能使銀屑病遷延不愈或惡化[3]。針對(duì)銀屑病患者出現(xiàn)的精神心理問(wèn)題，給予改善精神心理的藥物、生物制劑和特殊心理療法有一定的治療作用[4-5]。

精神心理因素屬于中醫(yī)情志范疇，肝主情志，所以針對(duì)銀屑病的心身疾病屬性，各醫(yī)家提出“從肝論治”銀屑病，并取得了良好療效[6-8]。逍遙散有疏肝解郁，養(yǎng)血健脾之功，在臨床上可運(yùn)用于治療銀屑病[9]，但其作用機(jī)制尚不明確。本實(shí)驗(yàn)采用咪喹莫特誘導(dǎo)的銀屑病樣小鼠模型進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究[10]，此種模型小鼠伴有一定情志狀態(tài)改變[11]。故此，本項(xiàng)工作觀察咪喹莫特誘導(dǎo)的銀屑病樣小鼠是否伴隨抑郁癥狀，從銀屑病樣皮損、行為學(xué)改變和抑郁癥相關(guān)神經(jīng)遞質(zhì)的含量變化角度，探究逍遙散的治療效果，明確其可能的作用機(jī)制及靶點(diǎn)，為“從肝論治”銀屑病提供參考資料。

材 料 和 方 法

1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

36只SPF級(jí)雄性BALB/c小鼠，體質(zhì)量18～20 g，6～8周齡，由北京華阜康生物科技股份有限公司提供，動(dòng)物許可證編號(hào)為SCXK(京)2014-0013。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)獲得北京中醫(yī)醫(yī)院動(dòng)物倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)。

2 試劑、藥物及儀器

2.1試劑和藥物 逍遙散采購(gòu)自北京同仁堂藥店，藥物組成為：柴胡、茯苓、白術(shù)、當(dāng)歸、白芍、甘草、生姜和薄荷。組方按照成人(60 kg)的劑量，根據(jù)人與動(dòng)物間藥物劑量換算比例換算成小鼠劑量[11]，按中藥常規(guī)煎煮法制作成水煎劑，每日灌胃。另有甲氨蝶呤片(上海信誼藥廠有限公司)、5%咪喹莫特乳膏(四川明欣藥業(yè)有限責(zé)任公司)、DAB顯色液(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)、3% (質(zhì)量分?jǐn)?shù)) H2O2去氧離子水及抗Ki67單克隆抗體和CD3單克隆抗體(eBioscience)；山羊血清工作液(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)；甲醇(色譜純)和甲酸(色譜純)均購(gòu)于北京迪科馬科技有限公司。

2.2儀器 徠卡全自動(dòng)染色機(jī)、輪轉(zhuǎn)切片機(jī)，Agilent 6410 QQQ LC-MS分析系統(tǒng)由Agilent 1290液相色譜儀及Agilent 6410 QQQ三重四極桿質(zhì)譜檢測(cè)器組成，Masshunter工作站。Hettich mzkro 220R臺(tái)式低溫高速離心機(jī)，Gene G560E渦旋式混勻儀[STUART SBH130D/3樣品濃縮儀(氮吹儀)]。

3 方法

3.1動(dòng)物造模、分組和給藥 參考Fits等[10]的小鼠銀屑病樣模型制備方法造模。實(shí)驗(yàn)前戊巴比妥鈉(80 mg/kg)腹腔注射麻醉小鼠，背部備皮，面積約2 cm×3 cm，備皮后單籠飼養(yǎng)。依據(jù)隨機(jī)數(shù)字表法，將小鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照(control)組、模型(model)組、甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)組、逍遙散高、中、低劑量(Xiaoyaosang high, medium and low dose, XH、XM、XL)組，每組6只?？瞻讓?duì)照組小鼠背部每日涂抹凡士林，余各組小鼠背部每日涂抹5%咪喹莫特乳膏62.5 mg；灌胃抹藥前進(jìn)行，每天 1 次，每次 0.2 mL，連續(xù)8 d：空白對(duì)照組與模型組給予0.2 mL 0.9% (質(zhì)量分?jǐn)?shù))的氯化鈉注射液，甲氨蝶呤組給予甲氨蝶呤片溶液0.2 mL (1 mg/kg)，逍遙散高、中、低劑量組分別給予等量的不同濃度的中藥藥液，依次為7.58、3.79和1.89 kg/L。

3.2檢測(cè)指標(biāo)及方法

3.2.1一般狀態(tài)的觀察 每日觀察各組小鼠的毛發(fā)色澤、精神狀態(tài)、活動(dòng)情況，以及舔舐梳理毛發(fā)次數(shù)。

3.2.2小鼠體重 造模前對(duì)各組小鼠體質(zhì)量進(jìn)行測(cè)量，造模第9天，取材前對(duì)其體質(zhì)量進(jìn)行測(cè)量，觀察小鼠造模前后體重的變化。

3.2.3小鼠銀屑病樣皮損面積和疾病嚴(yán)重程度評(píng)分(PASI評(píng)分) 每天對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠皮損進(jìn)行拍照，根據(jù)PASI評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)，采用雙盲法評(píng)判各組小鼠皮損嚴(yán)重程度，即一實(shí)驗(yàn)人員將小鼠組別編號(hào)打亂，采用隨機(jī)數(shù)字表法重新對(duì)小鼠編排新的序列號(hào)，找另一PASI評(píng)分經(jīng)驗(yàn)豐富的實(shí)驗(yàn)人員對(duì)重新編號(hào)的小鼠評(píng)分，負(fù)責(zé)本實(shí)驗(yàn)的研究人員與PASI評(píng)分的實(shí)驗(yàn)人員對(duì)具體各組小鼠的PASI評(píng)分并不知曉。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后對(duì)組別編號(hào)進(jìn)行揭盲，統(tǒng)計(jì)分析數(shù)據(jù)，繪制PASI評(píng)分趨勢(shì)圖，動(dòng)態(tài)觀察小鼠皮損的變化情況。

3.2.4測(cè)量小鼠皮損表皮厚度 造模第9天，取小鼠背部皮膚固定于多聚甲醛中，脫水、包埋后制備5 μm石蠟切片。用蘇木精-伊紅(hematoxylineosin，HE)染色后在400倍光鏡下拍片，每個(gè)標(biāo)本選5張不同切片，在每張切片中隨機(jī)測(cè)量5處表皮厚度，比較表皮層變化情況。

3.2.5小鼠皮損表皮層異常增生標(biāo)志物Ki67的表達(dá)及CD3+T細(xì)胞浸潤(rùn)情況檢測(cè) 制備5 μm石蠟切片，分別進(jìn)行Ki67和CD3染色，使用免疫熒光法(immunofluorescence，IF)檢測(cè)Ki67的表達(dá)，Ki67是一種增生細(xì)胞相關(guān)的核抗原，陽(yáng)性細(xì)胞核呈綠色熒光，免疫組織化學(xué)法(immunohistochemistry，IHC)檢測(cè)CD3的表達(dá)。在400倍鏡下，每例標(biāo)本隨機(jī)選取5個(gè)視野并拍照，應(yīng)用IPP 6.0圖像分析系統(tǒng)記錄數(shù)據(jù)。

3.2.6糖水偏好實(shí)驗(yàn) 于造模第7天，進(jìn)行糖水偏好實(shí)驗(yàn)。在實(shí)驗(yàn)前對(duì)各組小鼠禁食12 h，12 h后給予小鼠1瓶1 %的蔗糖水和1瓶純凈水，并稱(chēng)量?jī)蓚€(gè)水瓶的重量，將水瓶位置隨機(jī)放置以防小鼠位置偏愛(ài)效應(yīng)，讓其自主選擇飲水，1 h后分別稱(chēng)量?jī)蓚€(gè)水瓶的重量，計(jì)算出蔗糖水和純凈水的消耗量，根據(jù)公式：糖水偏愛(ài)率(%)=蔗糖水消耗量/(蔗糖水消耗量+純凈水的消耗量)×100%，計(jì)算出各組小鼠糖水偏愛(ài)率。

3.3小鼠海馬、下丘腦組織樣品處理 各組織樣品稱(chēng)重，加入200 μL 0.1%甲酸-水勻漿，4 024 ×g、 4 ℃離心10 min，取上清液100 μL并加入0.1%甲酸-甲醇300 μL，混勻，15 493 ×g、 4 ℃離心10 min，取上清液350 μL氮?dú)獯蹈?，?0 μL 0.1%甲酸-水復(fù)溶，15 493 ×g、 4 ℃離心10 min，取上清液進(jìn)樣。

3.4液相條件 色譜柱：Waters AtlantisTMT 3(2.1 mm×100 mm, 3 μm)。流動(dòng)相為水(0.1%甲酸)和甲醇。梯度洗脫：0 min，2%甲醇；0～3 min，2%～60%甲醇，3～5 min，60%～100%甲醇。流速為0.4 mL/min，進(jìn)樣量為5 μL，柱溫30 ℃。

3.5質(zhì)譜條件 ESI離子源，正離子檢測(cè)方式，MRM模式。離子源條件為干燥氣溫度(Gas Temp)：300 ℃，干燥氣流量(Gas Flow)：10 L/min，霧化器壓力(Nebulizer)：45 psi，毛細(xì)管電壓(Capillary)：4 000 V。

4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 20.0 和GraphPad Prism 6.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析及作圖。計(jì)量數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析；計(jì)量且正態(tài)分布資料相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，非正態(tài)資料采用Spearman秩相關(guān)進(jìn)行分析；以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 一般狀態(tài)的觀察

造模前，各組小鼠的毛發(fā)整齊、色澤明亮，精神狀態(tài)良好、好動(dòng)；造模后觀察發(fā)現(xiàn)，與空白對(duì)照組相比，模型組小鼠毛發(fā)凌亂、色澤枯黃，精神萎靡，舔舐梳理毛發(fā)次數(shù)較空白組減少；甲氨蝶呤組和逍遙散各劑量組小鼠較模型組小鼠上述情況有所緩解。

2 各組小鼠體質(zhì)量變化

分別在造模前和取材前對(duì)各組小鼠體質(zhì)量進(jìn)行測(cè)量,見(jiàn)表1，計(jì)算各組小鼠造模前后體質(zhì)量的變化，空白對(duì)照組小鼠體質(zhì)量變化不明顯，體質(zhì)量變化幅度顯著低于模型組(P<0.01)。此外，逍遙散高劑量組體質(zhì)量變化幅度亦顯著低于模型組(P<0.05)，見(jiàn)圖1。

3 逍遙散對(duì)咪喹莫特誘導(dǎo)的銀屑病樣小鼠皮損的影響

觀察各組小鼠皮損變化，空白對(duì)照組小鼠皮膚白嫩光滑，無(wú)鱗屑、紅斑和浸潤(rùn)現(xiàn)象；模型組于第2～3天開(kāi)始出現(xiàn)輕微皮損，其背部皮膚鱗屑、紅斑和浸潤(rùn)，隨造模時(shí)間的延長(zhǎng)不斷加重，第8天皮損最嚴(yán)重，銀白色鱗屑肥厚，表皮紅腫，皮膚變硬變厚浸潤(rùn)明顯，銀屑病樣皮損模型形成；與模型組同期相比，甲氨蝶呤組和逍遙散各劑量組皮膚鱗屑、紅斑和浸潤(rùn)情況減輕，甲氨蝶呤組與逍遙散高劑量組小鼠皮膚鱗屑、紅斑和浸潤(rùn)情況改善程度明顯，見(jiàn)圖2。

表1 各組小鼠造模前后體質(zhì)量

Table 1.Body mass of mice in each group before and after mo-deling (g. Mean±SD.n=6)

Group Before animal modelingAfter animal modelingControl21.5±0.319.9±0.3Model22.1±0.318.4±0.6MTX22.0±0.319.2±0.5XH21.8±0.219.5±0.4XM21.8±0.319.1±0.4XL21.6±0.118.7±0.5

Figure 1.The body mass change of mice in each group before and after modeling. Mean±SD.n=6.*P<0.05,**P<0.01vsmodel group.

圖1 各組小鼠造模前后體質(zhì)量變化

Figure 2.Gross observation of mice at day 9 after modeling. A: control; B: model; C: MTX; D: XH; E: XM; F: XL.

圖2 各組小鼠于造模第9日時(shí)的皮損表現(xiàn)

制作PASI評(píng)分趨勢(shì)圖，空白對(duì)照組小鼠背部皮膚正常無(wú)改變，其鱗屑、紅斑、浸潤(rùn)和總分分值始終為0；其余各組小鼠從造模第2天背部皮膚出現(xiàn)皮損起，其鱗屑、浸潤(rùn)、紅斑和總分分值，隨時(shí)間推移，不同程度的升高，于第8天達(dá)到峰值，模型組的鱗屑、浸潤(rùn)、紅斑和總分分值最高；其中逍遙散高劑量組可顯著降低浸潤(rùn)情況和總分分值(P<0.05),甲氨蝶呤組與逍遙散中、低劑量組評(píng)分較模型組有降低趨勢(shì)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)圖3。

Figure 3.PASI scoring trend chart of skin lesions in mice of each group. PASI: psoriasis area and severity index. Mean±SD.n=6.*P<0.05,**P<0.01vsmodel group.

圖3 各組小鼠皮損PASI評(píng)分趨勢(shì)圖

4 HE染色觀察各組小鼠皮損組織形態(tài)學(xué)變化

HE染色結(jié)果顯示，空白對(duì)照組小鼠皮膚表皮層較薄，模型組較空白對(duì)照組表皮層明顯增厚數(shù)倍，并可見(jiàn)明顯的角化不全及角化過(guò)度、嚴(yán)重的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)以及Munro微膿腫；甲氨蝶呤組和逍遙散各劑量組組織形態(tài)學(xué)變化相似，表皮層均比模型組薄，角化不全和角化過(guò)度減少，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)程度減輕及Munro微膿腫減少，見(jiàn)圖4。

Figure 4.Histomorphological changes of mice in each group after HE staining. A: control; B: model; C: MTX; D: XH; E: XM; F: XL.

圖4 各組小鼠皮膚HE染色后組織形態(tài)學(xué)改變

測(cè)量各組小鼠表皮垂直厚度，模型組表皮層厚度比空白對(duì)照組增厚4～5倍(P<0.01)；甲氨蝶呤組和逍遙散各劑量組表皮層厚度均較模型組減少(P<0.01)，見(jiàn)圖5。

5 各組小鼠皮損中Ki67和CD3+T淋巴細(xì)胞表達(dá)情況檢測(cè)

免疫熒光染色法觀察各組小鼠皮損中Ki67表達(dá)情況，空白對(duì)照組小鼠Ki67表達(dá)于基底層細(xì)胞，見(jiàn)圖6A；模型組小鼠Ki67在基底層和顆粒層均有表達(dá)，其陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量較空白對(duì)照組顯著增多(P<0.01)；甲氨蝶呤組和逍遙散各劑量組小鼠陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量均較模型組顯著減少(P<0.01)；逍遙散中劑量組陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量顯著少于甲氨蝶呤組(P<0.05)，見(jiàn)圖6、表2。

Figure 5.Comparison of epidermal thickness between each group on day 9 after modeling. Mean±SD.n=6.##P<0.01vscontrol group;**P<0.01vsmodel group.

圖5 各組小鼠造模第9天時(shí)的表皮厚度比較

Figure 6.The expression of Ki67 in skin of mice in each group (IF). Blue: DAPI; Green: Alexa Fluor488. A: control; B: model; C: MTX; D: XH; E: XM; F: XL.

圖6 各組小鼠皮膚中Ki67的表達(dá)情況

表2 各組小鼠皮膚皮損中Ki67及CD3陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量

Table 2.The number of Ki67 and CD3 positive cells in skin lesions of mice in each group (Number. Mean±SD.n=6)

GroupKi67CD3Control3.6±0.54.3±0.3Model65.3±3.0##22.40±1.6##MTX40.5±3.2##??9.9±0.4##??XH38.9±1.7##??10.5±0.6##??XM30.8±1.6##??△10.6±0.6##??XL41.7±1.6##??10.1±0.5##??

##P<0.01vscontrol group;**P<0.01vsmodel;△P<0.05vsMTX group.

免疫組織化學(xué)染色法觀察各組小鼠皮損中真皮層CD3陽(yáng)性T細(xì)胞浸潤(rùn)情況，空白對(duì)照組小鼠真皮層CD3陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量較少，模型組小鼠較空白對(duì)照組CD3陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量顯著增多(P<0.01)，甲氨蝶呤組和逍遙散各劑量組小鼠皮膚組織中CD3陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量顯著少于模型組(P<0.01)，見(jiàn)圖7、表2。

6 糖水偏好實(shí)驗(yàn)

糖水偏好實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，模型組小鼠糖水偏愛(ài)率顯著低于空白對(duì)照組小鼠(P<0.01)，甲氨蝶呤組和逍遙散各劑量組小鼠糖水偏愛(ài)率較模型組小鼠有一定升高趨勢(shì)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)圖8。

7 小鼠海馬和下丘腦組織中多巴胺(dopamine,DA)、3,4-二羥基苯乙酸(3,4-Dihydroxyphenylacetic acid, DOPAC)、高香草酸(homovanillic acid,HVA)和腎上腺素(adrenaline,AD)等神經(jīng)遞質(zhì)含量的變化

液相色譜-質(zhì)譜分析結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組相比，模型組海馬區(qū)腦組織中DOPAC、谷氨酸(glutamate,Glu)、AD和γ-氨基丁酸(γ-aminobutylic acid,GABA)含量顯著降低(P<0.05)，DA和HVA的含量無(wú)顯著差異(P>0.05)；與空白對(duì)照組相比，甲氨蝶呤組海馬區(qū)腦組織中DA、AD、DOPAC和GLU含量顯著降低(P<0.05)，見(jiàn)表3。

與空白對(duì)照組小鼠相比，模型組下丘腦區(qū)腦組織AD和GABA的含量顯著降低(P<0.05)，DA、DOPAC、HVA和GLU的含量無(wú)顯著差異(P>0.05)；甲氨蝶呤組下丘腦區(qū)腦組織GABA含量明顯低于空白對(duì)照組(P<0.01)，逍遙散高劑量組下丘腦區(qū)腦組織AD的含量較模型組顯著增多(P<0.01)，逍遙散低劑量組下丘腦區(qū)腦組織HVA的含量較模型組顯著增多(P<0.01)，見(jiàn)表4。

Figure 7.Expression of CD3 positive cells in the skin of mice in each group(IHC). A: control; B: model; C: MTX; D: XH; E: XM; F: XL.

圖7 各組小鼠皮膚中CD3陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)情況

Figure 8.The sugar water preference rate of each group on the seventh day after modeling. Mean±SD.n=5.##P<0.01vscontrol group.

圖8 造模第7天時(shí)各組小鼠的糖水偏好率

8 PASI評(píng)分與小鼠海馬和下丘腦區(qū)腦組織中DA、DOPAC、HVA和AD等含量的相關(guān)性分析

DA、DOPAC、HVA和AD等計(jì)量資料均呈正態(tài)分布，采用雙變量相關(guān)分析統(tǒng)計(jì)其各自與PASI評(píng)分的相關(guān)性，結(jié)果顯示，PASI評(píng)分與海馬區(qū)腦組織DOPAC、AD、GLU和GABA的含量呈負(fù)相關(guān)，與下丘腦區(qū)腦組織AD、GLU和GABA的含量也呈負(fù)相關(guān)，即PASI評(píng)分越高，小鼠背部皮損越重，抑郁相關(guān)神經(jīng)遞質(zhì)表達(dá)量越低，表明小鼠抑郁程度越高。海馬區(qū)腦組織DA、HVA含量，下丘腦區(qū)腦組織DA、DOPAC和HVA含量與PASI評(píng)分無(wú)相關(guān)性(P>0.05)，見(jiàn)圖9、10。

表3 各組小鼠海馬區(qū)腦組織神經(jīng)遞質(zhì)含量

#P<0.05,##P<0.01vscontrol group;**P<0.01vsmodel group.

表4 各組小鼠下丘腦區(qū)腦組織神經(jīng)遞質(zhì)含量

#P<0.05,##P<0.01vscontrol group;**P<0.01vsmodel group.

Figure 9.Scatter plot of the relationship between DA, DOPAC, HVA, AD, Glu, GABA and PASI score in the hippocampus.

圖9 海馬區(qū)腦組織DA、DOPAC、HVA、Glu、GABA和AD等神經(jīng)遞質(zhì)含量與PASI評(píng)分關(guān)系散點(diǎn)圖

討 論

中醫(yī)藥在治療銀屑病等皮膚疾病中積累了豐富的臨床經(jīng)驗(yàn)，形成了完整的辨證論治體系，具有一定優(yōu)勢(shì)。中醫(yī)認(rèn)為銀屑病屬于情志疾病，與“心”、“肝”最為密切[12]，肝主疏泄，藏血，在體合筋,其華在爪；若肝失疏泄，氣機(jī)不暢，久郁化火，熱毒壅絡(luò)，則發(fā)紅斑，顏色鮮紅，搔抓皮損有篩狀出血；肝不藏血，血無(wú)法營(yíng)養(yǎng)滋潤(rùn)腠理，所以有肌膚干燥脫屑、鱗屑疊起，瘙癢等癥；肝血虛，爪甲不榮，而出現(xiàn)指甲頂針樣改變[13]。銀屑病遷延不愈，給患者造成心身打擊，情志失調(diào)反過(guò)來(lái)亦可影響肝的生理功能，形成惡性循環(huán)。逍遙散源于宋《太平惠民和劑局方》，其藥味配伍，既補(bǔ)肝體，又助肝用，氣血兼顧，達(dá)到疏肝解郁、養(yǎng)血健脾之效，可針對(duì)銀屑病肝失疏泄、肝血失養(yǎng)等病機(jī)。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，逍遙散可改善銀屑病樣小鼠皮損，降低PASI評(píng)分及表皮厚度，減少表皮細(xì)胞增殖，角化不全和T細(xì)胞浸潤(rùn)。此外通過(guò)小鼠一般狀態(tài)、體質(zhì)量變化和糖水偏好實(shí)驗(yàn)，觀察小鼠抑郁狀態(tài)，實(shí)驗(yàn)小鼠取材時(shí)間為第9天，空白對(duì)照組與模型組小鼠行為學(xué)結(jié)果產(chǎn)生差異后進(jìn)行取材。糖水偏好實(shí)驗(yàn)是基于小鼠對(duì)甜味偏好這一特點(diǎn)，可評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物抑郁樣行為及抗抑郁藥物治療效果，當(dāng)小鼠出現(xiàn)抑郁樣行為時(shí)，其對(duì)糖水的偏嗜度也隨之降低[14]。實(shí)驗(yàn)表明，逍遙散可提高小鼠糖水偏好率。除此之外，我們采用HPLC-MS技術(shù)，分析各組小鼠腦組織海馬區(qū)和下丘腦區(qū)AD、GABA和GLU等反應(yīng)抑郁程度的單胺類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)的含量。海馬和下丘腦區(qū)是應(yīng)激反應(yīng)作用靶區(qū)，參與情緒反應(yīng)，抑郁癥相關(guān)研究多集中于這2個(gè)腦區(qū)。結(jié)果顯示空白對(duì)照組神經(jīng)遞質(zhì)含量顯著高于模型組和甲氨蝶呤組，逍遙散可顯著提高下丘腦區(qū)AD和HVA的含量，其余神經(jīng)遞質(zhì)有一定升高趨勢(shì)，但沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。以上結(jié)果顯示出此聯(lián)系后，我們進(jìn)一步研究了銀屑病與抑郁相關(guān)神經(jīng)遞質(zhì)的相關(guān)性分析，結(jié)果表明PASI評(píng)分與海馬區(qū)DOPAC、AD、GLU和GABA的含量呈負(fù)相關(guān)，與下丘腦區(qū)AD、GLU和GABA的含量也呈負(fù)相關(guān)，即PASI評(píng)分越高，小鼠背部皮損越重，抑郁相關(guān)神經(jīng)遞質(zhì)表達(dá)量越低，提示小鼠抑郁程度越高。

Figure 10.Scatter plot of the relationship between DA, DOPAC, HVA, AD, Glu, GABA and PASI score in the in hypothalamus.

圖10 下丘腦區(qū)腦組織DA、DOPAC、HVA、Glu、GABA和AD等神經(jīng)遞質(zhì)含量與PASI評(píng)分關(guān)系散點(diǎn)圖

綜上所述，逍遙散可有效緩解小鼠銀屑病樣皮損，在一定程度上可減輕其抑郁程度，銀屑病發(fā)病機(jī)制與抑郁癥相互作用靶點(diǎn)，還有待進(jìn)一步探究。