王獻，張燦斌，鄭帥玉

（河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院 胸外科，河南 洛陽 471000）

食管鱗癌是消化道第4 常見腫瘤，嚴重威脅人類健康。近年來以手術(shù)為主的綜合治療雖然取得很好療效，但食管鱗癌患者5年生存率仍較低，其主要原因是食管鱗癌對周圍組織極強的侵襲性及容易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移[1-2]。因此，如何有效早期預(yù)測食管鱗癌預(yù)后，對于疾病診療具有極大意義。

去整合素金屬蛋白酶家族成員去整合素金屬蛋白酶8（A disintegrin and metalloproteinase 8, ADAM8）已被證實在乳腺癌、前列腺癌等多種癌癥組織中高表達，且在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮關(guān)鍵作用，與病理分級、預(yù)后密切相關(guān)。在食管鱗癌ADAM表達譜研究中證實，ADAM8 在食管鱗癌中亦高表達[3-4]。但是，ADAM8 與食管鱗癌病理、預(yù)后的關(guān)系尚不明確，尤其是預(yù)測作用仍缺乏研究。因此，本研究擬探討ADAM8 與食管鱗癌病理分級之間的關(guān)系及對預(yù)后的預(yù)測作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2014年5月—2016年5月河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院因食管鱗癌行手術(shù)治療的患者47 例。其中，男性37 例，女性10 例；年齡（63.1±12.4）歲；腫瘤直徑0.8～7.8 cm，平均（4.3±1.9）cm；食管鱗癌組織學(xué)分級：Ⅰ級11 例，Ⅱ級24 例，Ⅲ級12 例；TNM 分期：Ⅰ期8 例，Ⅱ期12 例，Ⅲ期16 例，Ⅳ期11 例；發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移24 例。選擇同期住院的正常食管黏膜47 例作為對照?；颊呒凹覍賹ρ芯績?nèi)容知情，自愿參與并簽署知情同意書，研究經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準。

1.2 納入與排除標準

納入標準：①結(jié)合患者術(shù)前資料，并經(jīng)細胞學(xué)或病理組織學(xué)診斷為食管鱗癌[5]；②有可供檢測腫瘤組織標本且不存在壞死。排除標準：①有接受放療、化療及生物細胞免疫治療病史的患者；②合并嚴重心、肝、腎等其他器官功能障礙患者；③合并血液性、感染性、免疫性疾病或其他惡性腫瘤疾病的患者。統(tǒng)計分析患者性別、年齡、腫瘤大小、腫瘤類別、TNM 分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等信息，并隨訪至2018年7月28日，無死亡及失訪病例。細胞分化程度根據(jù)病理組織學(xué)，由2 位病理科醫(yī)生判定。腫瘤分期符合2002年國際抗癌聯(lián)盟第6 版TNM 分期標準[5]。

1.3 方法

所有病理標本均于術(shù)中取材，標本獲得后立即置于4%中性甲醛溶液中固定，經(jīng)石蠟包埋切片后，篩選腫瘤細胞成分＞80%的切片進行檢測。

1.4 試劑與儀器

免疫組織化學(xué)環(huán)保脫蠟液（中國博士德生物科技有限公司）脫蠟，高溫修復(fù)抗原，3%過氧化氫H2O210 min，10%山羊血清室溫封閉1 h；Ki-67 抗體（美國Proteintech 公司）、ADAM8 多克隆兔抗（美國Proteintech 公司）4℃孵育過夜。用抗鼠/兔通用型免疫組織化學(xué)檢測試劑盒（美國Proteintech 公司）檢測Ki-67、ADAM8 抗體結(jié)合情況并顯色。蘇木精復(fù)染 2 min 后進行脫水處理，中性樹脂封片。

1.5 結(jié)果判定

Ki-67 染色結(jié)果由2 位病理科醫(yī)生根據(jù)食管癌細胞陽性率進行分級：＜50%評判為Ki-67 指數(shù)低；≥ 50%評判為Ki-67 指數(shù)高。ADAM8 染色結(jié)果由2 位病理科醫(yī)生根據(jù)食管癌細胞陽性率進行分級：≤1%為（-），＞1%～25%為（+），＞25%～50%為（++），＞50%～75%為（+++），＞75%～100%為（++++）。

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 17.0 統(tǒng)計軟件，計數(shù)資料以例（%）表示，比較采用χ2檢驗，Kaplan-Meier 法繪制生存曲線，比較采用Long-rank χ2檢驗，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同組織中ADAM8 表達比較

47 例患者癌組織ADAM8 免疫組織化學(xué)染色分級為（-）7 例（14.89%），（+）9 例（19.15%），（++）8 例（17.02%），（+++）12 例（25.53%），（++++）11 例（23.40%）。將分級（-）和（+）的免疫組織化學(xué)結(jié)果歸為ADAM8低表達，（++）～（++++）歸為ADAM8 高表達（見圖1）。食管鱗癌組織中ADAM8 高表達31 例（65.96%），低表達16 例（34.04%）；正常黏膜組織中，ADAM8 高表 達10 例（21.28%），低表達37 例（78.72%）。兩者比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=19.077，P=0.000），食管鱗癌組織中ADAM8 高表達比例＞正常組織黏膜。

2.2 ADAM8 表達與病理特征的關(guān)系

高分級腫瘤患者ADAM8 表達高于低分級腫瘤患者，Ⅲ、Ⅳ期患者ADAM8 表達高于Ⅰ、Ⅱ期患者，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者ADAM8 表達高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

圖1 癌組織中ADAM8 表達 （免疫組織化學(xué)染色×200）

2.3 ADAM8 表達與預(yù)后的關(guān)系

癌組織中ADAM8 高表達患者與ADAM8 低表達患者，術(shù)后2年生存率的比較，經(jīng)Long-rank 生存分析，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=3.462，P=0.025），ADAM8低表達患者生存率高于ADAM8 高表達患者。見圖2。

表1 ADAM8 表達水平與臨床病理特征的關(guān)系 例（%）

圖2 不同ADAM8 表達患者術(shù)后2年生存分析

3 討論

食管鱗癌細胞高侵襲轉(zhuǎn)移能力是其預(yù)后差、病死率高的重要原因之一。近年來，與食管癌侵襲、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)的蛋白逐漸被發(fā)現(xiàn)，研究表明這類蛋白對預(yù)測患者預(yù)后，輔助病理分級診斷具有重要意義，因此，探討與食管鱗癌病理分級并預(yù)測其預(yù)后的相關(guān)蛋白是近年研究熱點[1-2]。ADAM8 是去整合素金屬蛋白酶家族的一員，有膜型（ADAM8m）和分泌型（ADAM8s）2 種亞型，在腫瘤中的作用逐漸受到學(xué)者重視。研究表明，ADAM8 可作為惡性黑素瘤診斷標志物[6]。亦有學(xué)者在Ⅳ期神經(jīng)母細胞瘤中觀察到ADAM8 表達上調(diào)[7]。ADAM8 在多種惡性腫瘤中的作用已得到廣泛研究，并已經(jīng)證明可通過多種機制調(diào)控腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移[8-9]。但是關(guān)于ADAM8 在食管癌中的作用及機制研究卻相對匱乏。本研究表明，ADAM8 表達越高，食管鱗癌分級程度越高、TNM 分期越高、發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移可能性越大、Ki-67指數(shù)越高，預(yù)后越差。與乳腺癌、前列腺癌、肝癌等研究結(jié)果一致。

ADAM8 與食管鱗癌病理特征相關(guān)的機制可能是，ADAM8 通過激活分解多種膜結(jié)合配體，如表皮生長因子、胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白、Notch 配體δ樣1 和胎盤亮氨酸氨肽酶等，降解細胞外基質(zhì)，增加腫瘤細胞侵襲性[10-11]。本研究表明，在高分級，TNM分期Ⅲ、Ⅳ期患者，ADAM8 高表達比例更大，提示ADAM8 可能與食管鱗癌惡性程度及相關(guān)生物學(xué)行為存在關(guān)系。在發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中進一步證實，ADAM8 高表達患者，更可能發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。由此推測，ADAM8 可能是參與食管鱗癌惡性轉(zhuǎn)化和侵襲過程的重要分子。另外，在高Ki-67 指數(shù)患者中，ADAM8高表達比例更大，提示ADAM8 可能還影響食管鱗癌細胞增殖。但是，在不同腫瘤大小比較中，ADAM8 表達無差異，可能的解釋是腫瘤大小受多因素影響，不僅僅與腫瘤的增殖能力相關(guān)，食管鱗癌部位、類型等亦可能影響就診時腫瘤大小[12]。因此，ADAM8 影響食管鱗癌細胞增殖的作用仍有待進一步探討。由此可推測，ADAM8 水平可能對判斷食管癌分化程度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等具有一定參考價值。既往在膠質(zhì)瘤、肝癌等研究中證實，ADAM8 可通過調(diào)控細胞骨架蛋白，調(diào)控癌細胞EMT，進而影響癌細胞侵襲、遷移、增殖[13]。但ADAM8 參與影響食管鱗癌病理特征的具體機制尚不明確，ADAM8 是否通過相同機制調(diào)控食管癌仍有待進一步探討。

另外，本研究發(fā)現(xiàn)，ADAM8 表達與患者預(yù)后密切相關(guān)，生存期較短患者中，ADAM8 高表達比例更大，其可能的機制是ADAM8 參與調(diào)控食管癌細胞病理特征。提示術(shù)后ADAM8 檢查結(jié)果可作為臨床預(yù)測食管鱗癌患者預(yù)后與生存期重要指標，在臨床中加以應(yīng)用。

綜上所述，食管鱗癌組織中ADAM8 表達上調(diào)，其表達水平與腫瘤分化程度、TNM 分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及 Ki-67 指數(shù)有關(guān)，并影響預(yù)后。通過檢測ADAM8 表達對判斷食管鱗癌患者病理特征與預(yù)后具有一定參考價值。