張娜娜

【摘 要】目的：分析熒光定量PCR法檢測食管癌中Livin基因特征，探究其臨床意義。方法：選取2018年2月-2019年2月在我院接受治療的86例食管癌患者作為研究對象，采用熒光定量PCR法分別對患者的癌組織以及癌旁（距離>6cm）的正常組織中的Livin基因進行檢測，探究其表達與食管癌之間的關(guān)系。結(jié)果：采用熒光定量PCR法進行檢測后，食管癌患者的癌組織中Livin基因表達水平明顯高于正常組織中的Livin基因表達水平，其中P<0.05，差異性顯著。結(jié)論：通過熒光定量PCR法對食管癌患者的癌組織和正常組織中Livin基因特征進行分析后，可以明確得出Livin基因的表達水平與食管癌的發(fā)生具有相關(guān)性，為食管癌的預(yù)防和檢測提供有力的參考依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】熒光定量PCR法;食管癌;Livin基因;相關(guān)性

【中圖分類號】R691.4【文獻標(biāo)識碼】A【文章編號】1005-0019（2019）20--02

食管癌屬于一種多發(fā)性消化道腫瘤，具有極高的死亡率，給患者的生命健康造成嚴(yán)重的威脅。食管癌患者早期癥狀不明顯，因此食管癌被確診后往往已經(jīng)為中晚期，延誤了最佳治療時期[1]。因此，探究食管癌癌組織與正常組織中某些基因表達的差異對于食管癌的早期診斷具有重要的意義。我院為了探究Livin基因特征與食管癌的相關(guān)性，進行了本次研究，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2018年2月-2019年2月在我院接受治療的86例食管癌患者作為研究對象，取患者癌組織和正常組織各86例離體制成標(biāo)本，置于超低溫下冷凍保存。86例患者中男性為56例，女性為30例，年齡在38-75歲，平均年齡為（57.21±3.54）歲，病程在1-5年，平均病程為（2.53±1.24）年，其中腺鱗癌患者為12例，食管鱗癌患者為74例。本次研究所選患者均被確診為食管癌，臨床資料完整，手術(shù)前均未進行放化療治療。本次研究經(jīng)過倫理委員會的批準(zhǔn)，且經(jīng)過患者和家屬的知情且同意。

1.2 方法

1.2.1 材料和設(shè)備 該研究選用RNA提取劑和qPCR試劑均為熒光定量PCR檢測專用試劑，cDNA 第一鏈合成試劑盒、引物以及探針均購自中山醫(yī)科大學(xué)達安基因有限公司，實時熒光定量PCR檢測儀器（ 型號： Piko-Real 96 Real - Time PCR System） 購自美國賽默飛世爾公司[2]。

1.2.2 樣品RNA提取和cDNA的制備 分別取患者癌組織和正常組織樣品研磨后加入1mlRNA提取劑，混勻靜置5min，按照標(biāo)準(zhǔn)提取方法提取組織中的RNA，提取后采用紫外分光光度計和1%甲醛變性凝膠電泳對其進行定量分析，選取純度和濃度均合格的RNA備用。采用標(biāo)準(zhǔn)cDNA進行反轉(zhuǎn)錄，制備cDNA，取2 μg上述制得的RNA樣品為模板，加無RNase 水定容至6 μL，加入1 μL 50 μmol/L Oligo（ dT），5 μL純水，混勻后，置于65℃條件下反應(yīng)5 min，迅速冰浴后依次加入緩沖液及其他試劑后混勻，置于42℃ 反應(yīng)60 min，最后將其70℃反應(yīng)10min，即得。將制備的cDNA冷凍保存后，備用[3]。

1.2.3 熒光定量PCR檢測 采用熒光定量PCR檢測法對上述制得的cDNA進行基因定量檢測，反應(yīng)條件為：50℃條件下反應(yīng)10s，升溫至95℃反應(yīng)10min，之后維持同溫度反應(yīng)15s，之后溫度降至60℃反應(yīng)反應(yīng)1min，按照這個反應(yīng)為一次，共反應(yīng)42次，反應(yīng)結(jié)束后，觀察輸出的標(biāo)準(zhǔn)曲線，并計算患者癌組織和正常組織中Livin基因的相對含量[4]。

1.3 評價指標(biāo) 采用熒光定量PCR檢測患者癌組織和正常組織中Livin基因的相對表達量，對患者癌組織和正常組織中Livin基因水平進行比較，探究Livin基因特征與食管癌發(fā)生的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS21.0統(tǒng)計軟件對本次食管癌患者的研究結(jié)果進行統(tǒng)計和分析，運用t檢驗方法，并采用進行檢驗，采用重復(fù)多次的實驗方法計算兩組患者的Livin基因水平。當(dāng)P<0.05時，表示兩組數(shù)據(jù)之間的差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 食管癌患者癌組織和正常組織中Livin基因水平對比情況

采用熒光定量PCR檢測患者癌組織和正常組織中Livin基因的相對表達量水平后，得出：食管癌患者的癌組織中Livin基因水平明顯高于正常組織中的Livin基因水平，其中t=6.212，P=0.021，差異性顯著，詳細數(shù)據(jù)見表1。

3 討論

Livin基因所表達的蛋白為一種人類凋亡抑制蛋白，該種蛋白具有抗細胞凋亡的特性，能夠使得腫瘤細胞獲得不死性。大量的研究表明，該種基因的存在與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展均具有一定的關(guān)系[5]。

我院為了探究食管癌與Livin基因特征之間的相關(guān)性，選取2018年2月-2019年2月在我院接受治療的86例食管癌患者，采用熒光定量PCR法分別對患者的癌組織以及正常組織中的Livin基因進行檢測后得出：食管癌患者的癌組織中Livin基因表達水平明顯高于正常組織中的Livin基因表達水平，其中P<0.05，差異性顯著。

綜上所述，通過熒光定量PCR法對食管癌患者的癌組織和正常組織中Livin基因特征進行分析后，可以明確得出Livin基因的表達水平與食管癌的發(fā)生具有相關(guān)性，為食管癌的預(yù)防和檢測提供有力的參考依據(jù)。

參考文獻

黃麗萍，彭安邦.凋亡抑制蛋白Livin與消化道腫瘤關(guān)系的研究進展[J].基層醫(yī)學(xué)論壇，2012，1604：507-508.

李娜，李勇，高洪波，郭淑霞，楊鑫磊，王冬慧，鞏平.凋亡抑制蛋白Livin在食管癌中的表達及意義[J].山東醫(yī)藥，2011，5148：85-86+120.

錢志英，何流，何曉松，馮繼峰，唐金海，潘良熹，張成陽.熒光定量PCR法檢測食管癌外周血Survivinm-RNA的臨床意義[J].實用臨床醫(yī)藥雜志，2006，07：56-58.

李慎柯，吳新，劉月芬，姜祖光，岳文彬.實時熒光定量PCR法檢測食管癌組織中細胞周期蛋白CyclinD1和CyclinA基因的表達[J].醫(yī)藥論壇雜志，2014，3505：56-58.

錢志英，何流，潘良熹，何曉松，張成陽.熒光定量PCR法檢測食管癌中Survivin基因的臨床研究[J].腫瘤研究與臨床，2005，02：86-88.