邱連建，何泰東，周才杰

(1. 深圳市龍崗區(qū)中醫(yī)院，廣東 518033； 2. 深圳市中醫(yī)院，廣東 518033)

胃舒寧顆粒由甘草、白芍、延胡索、白術(shù)、黨參與海螵蛸6味中藥組成，具有補氣健脾，制酸止痛的功效，收載于《中國藥典》一部[1]，臨床上用于脾胃氣虛、肝胃不和所致的胃脘疼痛、喜溫喜按、泛吐酸水；胃及十二指腸潰瘍見上述癥候者。臨床實驗表明，胃舒寧顆粒有較好的抗胃潰瘍和制酸、鎮(zhèn)痛作用[2，3]。目前基于文獻[4-10]分析，其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)主要是測定芍藥苷、甘草酸和延胡索乙素，但是都是單獨測定，多指標(biāo)含量測定能更加客觀評價中成藥的質(zhì)量[11-13]。因此，本試驗建立了同時測定胃舒寧顆粒中芍藥苷、甘草酸和延胡索乙素含量的高效液相色譜法，有助于提高其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，保證臨床用藥的有效性。

1 儀器與試藥

1.1儀器 沃特世2695高效液相色譜儀(PDA 檢測器、Empower工作站，美國沃特世公司)；賽多利斯BD303 型電子分析天平(德國賽多利斯公司)；天津康杰X2100超聲儀。

1.2試藥 芍藥苷對照品(批號110736-201842，標(biāo)示含量為97.4%)、甘草酸銨對照品(批號110731-201720，標(biāo)示含量為93.0%)、延胡索乙素對照品(批號110726-201819，標(biāo)示含量為99.8%)，均購自中國食品藥品檢定研究院。水為超純水，甲醇與乙腈均為色譜純(科密歐公司)。胃舒寧顆粒[葵花藥業(yè)集團(冀州)有限公司，批號為180808、181011、190105]。

2 方法與結(jié)果

2.1色譜條件 色譜柱：Ultimate-C18柱(150 mm×4.6 mm，3.5 μm)；流動相A相為甲醇-乙腈(1∶9)，B相為0.1% 磷酸水溶液，梯度洗脫：0～15 min，10%→20% A；15～30 min，20%→45% A；30～40 min，10% A；流量: 0.9 ml/min，分段變波長測定：0～15.0 min為230 nm，15.0～21.0 min為280 nm，21.0～40.0 min為250 nm；柱溫:35 ℃；進樣量: 20 μl。

2.2溶液制備

2.2.1對照品溶液的制備 分別精密稱定芍藥苷、甘草酸和延胡索乙素適量，分別置50 ml量瓶中，加流動相超聲溶解，稀釋至刻度，得約含芍藥苷340 μg/ml、甘草酸 530 μg/ml、延胡索乙素3.0 μg/ml的對照品貯備液1，備用。再精密稱定芍藥苷、甘草酸和延胡索乙素適量，分別置50 ml量瓶中，加流動相超聲溶解，稀釋至刻度，得含芍藥苷800 μg/ml、甘草酸 1 200 μg/ml、延胡索乙素10 μg/ml的對照品貯備液2，備用。再精密吸取對照品貯備液2適量置量瓶中，流動相稀釋至刻度，得含芍藥苷40 μg/ml、甘草酸 60 μg/ml、延胡索乙素0.5 μg/ml的混合對照品溶液，備用。

2.2.2供試品溶液的制備 取胃舒寧顆粒( 批號為180808) 適量研細(xì)，取約1.0 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入流動相25 ml，稱定重量，浸泡1 h，超聲處理0.5 h，放冷，再稱定重量，用流動相補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。

2.2.3陰性樣品溶液的制備 按照胃舒寧顆粒的處方工藝分別制備缺芍藥、缺甘草、缺延胡索的陰性樣品，并照“2.2.2”項下方法制成陰性樣品溶液。

2.3專屬性試驗 分別取混合對照品溶液、供試品溶液和陰性樣品溶液，照“2.1”項下色譜條件測定。結(jié)果芍藥苷、甘草酸和延胡索乙素的分離度均符合要求，單個色譜峰的理論塔板數(shù)均不低于 3 000；空白無干擾。色譜圖見圖 1。

2.4線性關(guān)系試驗 精密吸取按“2.2.1”項下方法制備的對照品貯備液2的不同體積，以流動相定容，搖勻，即得系列質(zhì)量濃度的線性試驗溶液。以濃度為橫坐標(biāo)(X)，峰面積為縱坐標(biāo)(Y)進行線性回歸，各成分在各自線性范圍內(nèi)均呈良好的線性關(guān)系。結(jié)果見表1。

2.5精密度試驗 精密吸取混合對照品溶液 20 μl，按照“2.1”項下色譜條件進樣，連續(xù)進樣 6 次，測得芍藥苷、甘草酸和延胡索乙素峰面積的 RSD 值分別為 0.6%、0.5% 和 0.9%(n=6)，表明精密度良好。

2.6穩(wěn)定性試驗 取同一供試品(批號180808)按“2.2.2”項下方法制備成供試品溶液，于0、1、2、4、6、8、10和12 h，按照“2.1”項下色譜條件進樣，測定芍藥苷、甘草酸和延胡索乙素的峰面積。測得峰面積RSD值分別為 1.4%、1.5% 和 1.8%，表明在室溫條件下，供試品溶液在12 h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7重復(fù)性試驗 取同一供試品(批號180808)，按“2.2.2”項下方法平行制備 6 份供試品溶液，照“2.1”項下色譜條件，測得芍藥苷、甘草酸和延胡索乙素的平均含量分別為3.352、5.273 和 0.029 mg/g，RSD 值分別為 1.4%、1.1% 和1.8%，表明該方法的重復(fù)性良好。

1.芍藥苷 2.甘草酸 3.延胡索乙素

表1 線性方程

2.8加樣回收試驗 取已知含量的供試品(批號180808) 9份，每3份1組，每份1 g，精密稱定，分別加入對照品貯備液1(低濃度組8 ml、中濃度組10 ml、高濃度組12 ml)，再加入流動相，再按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，照“2.1”項下色譜條件測定，計算回收率，結(jié)果芍藥苷、甘草酸和延胡索乙素的平均回收率分別為99.89%、100.09%和99.63%，RSD分別為1.5%、0.74% 和2.75%。結(jié)果見表2-4。

2.9樣品測定 取供試品3批，每批3份，按照“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件測定，記錄峰面積，外標(biāo)法測定樣品中各成分含有量，結(jié)果見表5。

表2 芍藥苷加樣回收率試驗結(jié)果(n=9)

表3 甘草酸加樣回收率試驗結(jié)果(n=9)

表4 延胡索乙素加樣回收率試驗結(jié)果(n=9)

表5 樣品中各成分的含量

3 討論

3.1色譜條件選擇 首先對于色譜填料進行了篩選，考查了常用的色譜填料苯基柱、C8柱、C18柱，優(yōu)選C18柱，進而對于不同品牌的C18柱進行篩選，優(yōu)選Ultimate-C18柱，同時考查該型號不同規(guī)格的色譜柱，選擇了150 mm×4.6 mm，5 μm。其次對流動相進行了篩選，考查了磷酸體系與甲酸體系，優(yōu)選磷酸體系。

3.2樣品制備方法的選擇 考查了不同的提取溶劑，從甲醇、乙醇、流動相中，優(yōu)選流動相；考查了不同的浸泡時間和超聲時間，包括0.5、1和1.5 h，浸泡時間優(yōu)選1 h，超聲時間優(yōu)選0.5 h，提取效率最高。

本試驗建立了 HPLC 法測定胃舒寧顆粒中芍藥苷、甘草酸和延胡索乙素的含量，該方法快速、高效、準(zhǔn)確，可用于胃舒寧顆粒的質(zhì)量控制。