孫文沫 汪亞倫

作者簡介：孫文沫（1989-），女，漢族，沈陽醫(yī)學(xué)院，研究方向是實驗血液學(xué)，E-mail：swm0901@163.com。汪亞倫（1962-），女，漢族，沈陽醫(yī)學(xué)院，研究方向是生物化學(xué)與分子生物學(xué)， E-mail：wangyalun@sohu.com。

【摘 要】 目的：探討CBLB502對造血干細(xì)胞輻射防護作用。方法：40只C57BL/6J小鼠隨機分為照射對照組和CBLB502組，每組各20只。所有小鼠均接受X射線6.5Gy一次性照射，劑量率為67.2cGy/min。CBLB502組小鼠在照射前30分鐘注射CBLB502，照射對照組予以腹腔注射等量生理鹽水，對比兩組骨髓有核細(xì)胞數(shù)和集落數(shù)。結(jié)果：照后24h，CBLB502組和照射對照組兩組骨髓有核細(xì)胞數(shù)均減少，兩組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義。照后24h，CBLB502組CFU-E、BFU-E、CFU-GM多于照射對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論：CBLB502對造血干細(xì)胞有輻射防護作用。

【關(guān)鍵詞】 CBLB502;造血干細(xì)胞;輻射

【中圖分類號】R416

【文獻標(biāo)志碼】A

【文章編號】1005-0019（2019）18-254-02

Toll樣受體5（Toll-like receptor 5，TLR5）是在固有免疫系統(tǒng)中發(fā)揮重要效應(yīng)的模式識別受體之一，可以特異識別病原體表面的分子，抵御機體外界病原微生物的入侵，是近年來免疫學(xué)研究的重點對象[1]。CBLB502是TLR5激動劑，是經(jīng)過藥理學(xué)改構(gòu)的細(xì)菌鞭毛蛋白衍生物[2]。CBLB502具有較好的安全性和耐受性。本次研究使用X射線6.5Gy照射小鼠模型，探討CBLB502對造血干細(xì)胞輻射防護作用，結(jié)果如下。

1 材料與方法

1.1 藥物、儀器、試劑

CBLB502蛋白由pMD-18T-CBLB502質(zhì)粒為模板，利用引物擴增全長序列，植入大腸桿菌，分離純化合成;甲基纖維素培養(yǎng)基由加拿大 Stem Cell Technologies公司（重慶市華雅干細(xì)胞技術(shù)有限公司代理）生產(chǎn)，批號：04434;1640培養(yǎng)基由美國Gibco 公司生產(chǎn);小鼠CD 45R/B220 抗體由美國BDB iosciences公司生產(chǎn)，批號：2347812;CD90.2抗體由加拿大eBioscience 公司生產(chǎn)，批號：E 07586-1631;液體1配比：1640培養(yǎng)基+2%胎牛血清+10U/ml肝素+100U /ml青鏈霉素;液體2配比：1640培養(yǎng)基+100U/ml青鏈霉素。

1.2 實驗動物

C57BL/6J雄性小鼠40只（合格證號：SCXK（遼）2015-0001），體質(zhì)量20-22g。小鼠飼養(yǎng)于沈陽醫(yī)學(xué)院SPF級屏障動物房，每籠5只，自由飲水進食。

1.3 方法

將40只C57BL/6J小鼠隨機分為照射對照組和CBLB502組，每組各20只。所有小鼠均接受X射線6.5Gy一次性照射，劑量率為67.2cGy/min。CBLB502組在照射前30分鐘為小鼠注射CBLB502，0.2mg/kg，皮下給藥，照射對照組予以腹腔注射等量生理鹽水。在照射后24h，將小鼠處死，取20ml骨髓細(xì)胞懸液加入冰乙酸中，倒置顯微鏡下計數(shù)每只小鼠的骨髓有核細(xì)胞數(shù)。將制備單細(xì)胞懸液用甲基纖維素培養(yǎng)基調(diào)整骨髓有核細(xì)胞數(shù)到5*107/L，接種到培養(yǎng)板，在37℃、5%CO 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，4d后在倒置顯微鏡下計數(shù)骨髓有核細(xì)胞數(shù)和集落數(shù)，集落包括紅系集落形成單位（CFU-E）、爆式紅系集落形成單位（BFU-E）、粒單 系集落形成單位（CFU-GM）。

1.4 觀察指標(biāo) 對比兩組骨髓有核細(xì)胞數(shù)和集落數(shù)。

1.5 統(tǒng)計學(xué)分析

采用SPSS20.0統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用t檢驗，P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組方法對X射線6.5Gy射線照射小鼠照后造血的保護作用對比

照射24h后，CBLB502組和照射對照組兩組骨髓有核細(xì)胞數(shù)均減少，兩組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義。照后24h，CBLB502組CFU-E、BFU-E、CFU-GM多于照射對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表1。

3 討論

固有免疫系統(tǒng)是機體抵抗外界侵襲的重要防線，是生物在長期進化過程中形成的免疫系統(tǒng)。模式識別受體是固有免疫系統(tǒng)的重要組成部分，在固有免疫應(yīng)答中發(fā)揮著及其重要的作用。TLR5是模式識別受體，可以特異性識別病原微生物表面的模式分子，促進免疫效應(yīng)細(xì)胞的分化和成熟，抵御病原微生物的侵襲[3]。TLR5可表達于樹突狀細(xì)胞、腸上皮細(xì)胞、單核細(xì)胞巨噬細(xì)胞表面，細(xì)菌鞭毛蛋白是其唯一的配體。CBLB502是細(xì)菌鞭毛蛋白經(jīng)過優(yōu)化后的重組蛋白，免疫原性較低。研究表明，CBLB502具有明顯的輻射防護效果[4]。

本次研究中，照射24h后，CBLB502組和照射對照組兩組骨髓有核細(xì)胞數(shù)均減少，兩組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義。照后24h，CBLB502組CFU-E、BFU-E、CFU-GM多于照射對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），提示CBLB502對照射后早期的骨髓有核細(xì)胞數(shù)減少無明顯的作用，但是通過觀察到CBLB502組集落數(shù)的增加，表明CBLB502對輻射后造血干細(xì)胞具有較明顯的保護作用。CBLB502的輻射防護作用可能和細(xì)胞因子的表達調(diào)控和信號通路相關(guān)，其可能的作用機制為減少了骨髓造血干祖細(xì)胞凋亡和體內(nèi)細(xì)胞因子表達增加，從而促進骨髓造血干細(xì)胞的更新和存活，發(fā)揮輻射防護作用。

綜上所述，CBLB502對造血干細(xì)胞輻射防護作用，值得在臨床中推廣。

參考文獻

[1] Lei W， Wen Z， Ge C H， et al. Toll‐likereceptor 5 signaling restrains T‐cell/natural killer T‐cell activation and protects against concanavalin A–induced hepatic injury[J]. Hepatology， 2017， 65（6）：2059-2073.

[2] Lopetuso L R， Jia R， Wang X M， et al. Epithelial-specific Toll-like Receptor （TLR）5 Activation Mediates Barrier Dysfunction in Experimental Ileitis.[J]. Inflammatory Bowel Diseases， 2017， 23（3）：392-403.

[3] Jager S D， Pijvelde G V， Anas A A， et al. 36Leukocyte TLR5 deficiency inhibits atherosclerosis by reduced macrophage recruitment and defective T cell responsiveness[J]. Scientific Reports， 2017， 7（103）：42688.

[4] 張源， 楊福軍， 徐文清. 輻射防護藥物研究最新進展[J]. 國際放射醫(yī)學(xué)核醫(yī)學(xué)雜志， 2017， 41（5）：353.