孫文沫 汪亞倫
作者簡介:孫文沫(1989-),女,漢族,沈陽醫(yī)學院,研究方向是實驗血液學,E-mail:swm0901@163.com。汪亞倫(1962-),女,漢族,沈陽醫(yī)學院,研究方向是生物化學與分子生物學, E-mail:wangyalun@sohu.com。
【摘 要】 目的:探討CBLB502對造血干細胞輻射防護作用。方法:40只C57BL/6J小鼠隨機分為照射對照組和CBLB502組,每組各20只。所有小鼠均接受X射線6.5Gy一次性照射,劑量率為67.2cGy/min。CBLB502組小鼠在照射前30分鐘注射CBLB502,照射對照組予以腹腔注射等量生理鹽水,對比兩組骨髓有核細胞數(shù)和集落數(shù)。結(jié)果:照后24h,CBLB502組和照射對照組兩組骨髓有核細胞數(shù)均減少,兩組之間差異無統(tǒng)計學意義。照后24h,CBLB502組CFU-E、BFU-E、CFU-GM多于照射對照組,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。結(jié)論:CBLB502對造血干細胞有輻射防護作用。
【關鍵詞】 CBLB502;造血干細胞;輻射
【中圖分類號】R416
【文獻標志碼】A
【文章編號】1005-0019(2019)18-254-02
Toll樣受體5(Toll-like receptor 5,TLR5)是在固有免疫系統(tǒng)中發(fā)揮重要效應的模式識別受體之一,可以特異識別病原體表面的分子,抵御機體外界病原微生物的入侵,是近年來免疫學研究的重點對象[1]。CBLB502是TLR5激動劑,是經(jīng)過藥理學改構(gòu)的細菌鞭毛蛋白衍生物[2]。CBLB502具有較好的安全性和耐受性。本次研究使用X射線6.5Gy照射小鼠模型,探討CBLB502對造血干細胞輻射防護作用,結(jié)果如下。
1 材料與方法
1.1 藥物、儀器、試劑
CBLB502蛋白由pMD-18T-CBLB502質(zhì)粒為模板,利用引物擴增全長序列,植入大腸桿菌,分離純化合成;甲基纖維素培養(yǎng)基由加拿大 Stem Cell Technologies公司(重慶市華雅干細胞技術有限公司代理)生產(chǎn),批號:04434;1640培養(yǎng)基由美國Gibco 公司生產(chǎn);小鼠CD 45R/B220 抗體由美國BDB iosciences公司生產(chǎn),批號:2347812;CD90.2抗體由加拿大eBioscience 公司生產(chǎn),批號:E 07586-1631;液體1配比:1640培養(yǎng)基+2%胎牛血清+10U/ml肝素+100U /ml青鏈霉素;液體2配比:1640培養(yǎng)基+100U/ml青鏈霉素。
1.2 實驗動物
C57BL/6J雄性小鼠40只(合格證號:SCXK(遼)2015-0001),體質(zhì)量20-22g。小鼠飼養(yǎng)于沈陽醫(yī)學院SPF級屏障動物房,每籠5只,自由飲水進食。
1.3 方法
將40只C57BL/6J小鼠隨機分為照射對照組和CBLB502組,每組各20只。所有小鼠均接受X射線6.5Gy一次性照射,劑量率為67.2cGy/min。CBLB502組在照射前30分鐘為小鼠注射CBLB502,0.2mg/kg,皮下給藥,照射對照組予以腹腔注射等量生理鹽水。在照射后24h,將小鼠處死,取20ml骨髓細胞懸液加入冰乙酸中,倒置顯微鏡下計數(shù)每只小鼠的骨髓有核細胞數(shù)。將制備單細胞懸液用甲基纖維素培養(yǎng)基調(diào)整骨髓有核細胞數(shù)到5*107/L,接種到培養(yǎng)板,在37℃、5%CO 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),4d后在倒置顯微鏡下計數(shù)骨髓有核細胞數(shù)和集落數(shù),集落包括紅系集落形成單位(CFU-E)、爆式紅系集落形成單位(BFU-E)、粒單 系集落形成單位(CFU-GM)。
1.4 觀察指標 對比兩組骨髓有核細胞數(shù)和集落數(shù)。
1.5 統(tǒng)計學分析
采用SPSS20.0統(tǒng)計學軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù)±標準差(x±s)表示,采用t檢驗,P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。
2 結(jié)果
2.1 兩組方法對X射線6.5Gy射線照射小鼠照后造血的保護作用對比
照射24h后,CBLB502組和照射對照組兩組骨髓有核細胞數(shù)均減少,兩組之間差異無統(tǒng)計學意義。照后24h,CBLB502組CFU-E、BFU-E、CFU-GM多于照射對照組,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05),見表1。
3 討論
固有免疫系統(tǒng)是機體抵抗外界侵襲的重要防線,是生物在長期進化過程中形成的免疫系統(tǒng)。模式識別受體是固有免疫系統(tǒng)的重要組成部分,在固有免疫應答中發(fā)揮著及其重要的作用。TLR5是模式識別受體,可以特異性識別病原微生物表面的模式分子,促進免疫效應細胞的分化和成熟,抵御病原微生物的侵襲[3]。TLR5可表達于樹突狀細胞、腸上皮細胞、單核細胞巨噬細胞表面,細菌鞭毛蛋白是其唯一的配體。CBLB502是細菌鞭毛蛋白經(jīng)過優(yōu)化后的重組蛋白,免疫原性較低。研究表明,CBLB502具有明顯的輻射防護效果[4]。
本次研究中,照射24h后,CBLB502組和照射對照組兩組骨髓有核細胞數(shù)均減少,兩組之間差異無統(tǒng)計學意義。照后24h,CBLB502組CFU-E、BFU-E、CFU-GM多于照射對照組,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05),提示CBLB502對照射后早期的骨髓有核細胞數(shù)減少無明顯的作用,但是通過觀察到CBLB502組集落數(shù)的增加,表明CBLB502對輻射后造血干細胞具有較明顯的保護作用。CBLB502的輻射防護作用可能和細胞因子的表達調(diào)控和信號通路相關,其可能的作用機制為減少了骨髓造血干祖細胞凋亡和體內(nèi)細胞因子表達增加,從而促進骨髓造血干細胞的更新和存活,發(fā)揮輻射防護作用。
綜上所述,CBLB502對造血干細胞輻射防護作用,值得在臨床中推廣。
參考文獻
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[2] Lopetuso L R, Jia R, Wang X M, et al. Epithelial-specific Toll-like Receptor (TLR)5 Activation Mediates Barrier Dysfunction in Experimental Ileitis.[J]. Inflammatory Bowel Diseases, 2017, 23(3):392-403.
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