李萌

蘇州大學附屬第一醫(yī)院骨科蘇州大學骨科研究所，江蘇 蘇州 215006

本研究通過測量骨癌大鼠DRG神經(jīng)元的行為特征和興奮性，研究了鞘內(nèi)注射PKC拮抗劑GF109203X對大鼠DRG外周神經(jīng)元疼痛和興奮性的影響。

1 實驗準備

1.1 實驗分組 將100只雌性SD大鼠平均分為4組：

① 假手術(shù)組，25只平均體重200.4 g的大鼠，右脛骨骨髓腔注射PBS；

②骨癌BC組，25只平均體重201.1 g的大鼠；

③ DMSO組，25只平均體重0.4 g的大鼠。F 199.2 g，骨癌大鼠。鞘內(nèi)注射二甲基亞砜DMSO；

④ GF109203X組，大鼠20只，平均體重197.9 g，鞘內(nèi)注射GF109203X治療組GF109203X組。

模型建立后15天給藥。將10 uL GF109203X10nM注入GF109203X組，在DMSO組給予等量的DMSO。

1.2 實驗結(jié)果檢測 SD大鼠7天前適應了實驗環(huán)境，從而降低了由于緊急效應而導致的實驗結(jié)果的準確性。采用“上下”法測定大鼠機械痛閾值，直至出現(xiàn)收縮反應。并將些過程重復3-5次，以減少因個體差異或?qū)嶒灢僮鞑划攲嶒灲Y(jié)果的準確性的影響。

1.3 實驗結(jié)果數(shù)據(jù)處理工具選擇 實驗數(shù)據(jù)提交和整理工具是HEKA EPC 10，處理和匯總為Patch Master軟件，統(tǒng)計分析采用Origin Pro 8和Matlab軟件。

2 實驗方法

在SD大鼠股骨內(nèi)注射乳腺癌細胞15天，建立模型。將背根神經(jīng)節(jié)L4-L6段DRG神經(jīng)元消化成單個細胞，采用單細胞膜片鉗技術(shù)檢測神經(jīng)興奮性。鞘內(nèi)注射GF109203X抑制劑，測量機械性疼痛和神經(jīng)興奮性。

3 實驗結(jié)果與分析

3.1 結(jié)果 表1所示：①BC組的縮足閾值明顯低于sham組P＜0.01。②BC組的靜息電位明顯高于sham組；BC組的域值明顯低于sham組；BC組的激強度明顯小于sham組；100pA斜坡刺激下，BC組激發(fā)的動作電位個數(shù)顯著多于sham組。P＜0.05，0.01，0.001。③GF109203X組的縮足閾值明顯高于DMSO組P＜0.05。④GF109203X組的靜息電位低于DMSO組很多；GF109203X組的域值高于DMSO組很多；GF109203X組的激強度高于DMSO組很多；與DMSO組相比，GF109203X在100pA斜坡刺激下的動作電位個數(shù)要低很多。P＜0.05，0.01，0.001。

表1 實驗數(shù)據(jù)對比

3.2 分析

3.2.1 骨癌導致大鼠痛閾降低 在SD大鼠股骨內(nèi)注射乳腺癌（Walker 256）細胞15天檢測其機械性疼痛，發(fā)現(xiàn)骨癌組的機械痛范圍要低于假手術(shù)組（P＜0.05）很多。可見，骨癌所致大鼠疼痛閾值低于假手術(shù)組P＜0.05。

3.2.2 骨癌疼痛增加大鼠DRG神經(jīng)元的興奮性 建模后15天，測定假手術(shù)組和BC組SD大鼠右腰椎L4-L6期的神經(jīng)元興奮性，BC組DRG神經(jīng)元的靜息膜電位要高于sham組很多，提示BC組神經(jīng)元的去極化、BC組神經(jīng)元的閾值有所下降，BC組的興奮強度增加明顯。所以說，骨癌對外周DRG神經(jīng)元的興奮性的提高有一定的作用。

3.2.3 PKC對骨癌痛閾值的逆轉(zhuǎn) 把同樣劑量的二甲基亞砜和GF109203X分別注射到二甲基亞砜組（DMSO）和GF109203X組大鼠鞘內(nèi)1小時后的測量骨癌模型的機械閾值。實驗結(jié)果表明，機械閾值是GF109203X組要高于DMSO組很多，說明GF109203X能對SD大鼠的骨癌疼痛的機械閾值進行調(diào)節(jié)。

3.2.4 GF109203X能降低神經(jīng)元的興奮性 建模后15天，DMSO組和GF109203X組鞘內(nèi)同劑量注射DMSO和GF109203X。采用DMSO組和GF109203X組大鼠右腰段DRG(L4-L6)檢測神經(jīng)元的興奮性。結(jié)果表明，GF109203X組DGR神經(jīng)元的靜息膜電位是低于DMSO組的，DMSO組神經(jīng)元的閾值高于DMSO組許多。在100pA時，斜坡刺激所激發(fā)動作電位的數(shù)量有所減少，說明GF109203X能降低外圍神經(jīng)元的興奮性。

4 概述

結(jié)果表明，鞘內(nèi)注射GF109203X能顯著降低SD大鼠外周神經(jīng)元的機械閾值和興奮性。這將在降低骨癌疼痛患者的疼痛方面發(fā)揮重要的作用。