賈仕杰，張海華，張 煥，劉 暢，陳思睿，唐琳琳，王金玲,4,*

（1.東北林業(yè)大學(xué)林學(xué)院，黑龍江 哈爾濱 150040；2.黑龍江省標(biāo)檢產(chǎn)品檢測(cè)有限公司，黑龍江 哈爾濱 150000；3.黑龍江省譜尼測(cè)試科技有限公司，黑龍江 哈爾濱 150040；4.黑龍江省森林食品資源利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，黑龍江 哈爾濱 150040）

紅樹(shù)莓（Rubus ideaus L.）屬薔薇科懸鉤子屬，俗稱覆盆子、托盤等。紅樹(shù)莓在世界溫帶范圍內(nèi)被廣泛種植[1]，我國(guó)東北地區(qū)是紅樹(shù)莓的主產(chǎn)區(qū)，資源豐富，種植歷史久，規(guī)模大，品種多。在過(guò)去的20 a中，樹(shù)莓和其他小漿果的產(chǎn)量不斷增長(zhǎng)，市場(chǎng)也在不斷擴(kuò)大[2]。然而紅樹(shù)莓葉的利用程度沒(méi)有紅樹(shù)莓果實(shí)高，僅有少數(shù)制成茶葉或用于醫(yī)藥用途，并未得到充分的利用[3-4]。近年來(lái)植物豐富的多酚類物質(zhì)已成為目前研究的熱點(diǎn)[5]。曠慧等[6]對(duì)紅樹(shù)莓多酚的組分構(gòu)成進(jìn)行分析并通過(guò)脂質(zhì)過(guò)氧化實(shí)驗(yàn)證明其具有良好的抗氧化活性。有研究表明樹(shù)莓葉中的酚類物質(zhì)含量較高，可作為天然的抗氧化劑來(lái)源[7]。

植物葉片中的酚類物質(zhì)還被認(rèn)為是各種飲料和加工食品中的功能性成分，并因其健康相關(guān)性質(zhì)成為研究熱點(diǎn)[8-9]。Teleszko等[10]研究發(fā)現(xiàn)在漿果類植物中，葉片中的酚類物質(zhì)明顯高于果實(shí)，與水果相比葉片具有更高的抗氧化能力。Han Na等[11]研究了樹(shù)莓葉乙醇提取物的抗血栓作用，結(jié)果表明從樹(shù)莓葉中分離出的山柰酚、槲皮素和銀鍛苷3 種物質(zhì)對(duì)血漿復(fù)鈣時(shí)間有著明顯的延遲作用。Asmita等[12]通過(guò)大鼠實(shí)驗(yàn)證明樹(shù)莓葉中的活性物質(zhì)是通過(guò)特異性作用或受體介導(dǎo)途徑來(lái)調(diào)節(jié)平滑肌松弛度。

本研究對(duì)東北地區(qū)6 種不同品種的紅樹(shù)莓營(yíng)養(yǎng)葉片的活性物質(zhì)和抗氧化活性進(jìn)行研究并通過(guò)超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（ultra performance liquid chromatographytandem mass spectrometry，UPLC-MS/MS）法對(duì)其中的多酚進(jìn)行定性定量分析，豐富樹(shù)莓研究相關(guān)數(shù)據(jù)，并為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)和利用樹(shù)莓資源、提高樹(shù)莓附加值提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

歐洲紅、澳洲紅、紅寶石、秋福、哈瑞泰茲、杜拉明6 種紅樹(shù)莓葉片均采自黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院園藝分院試驗(yàn)田，2018年8月19日采莖尖第5～10片葉，密封冷藏避光運(yùn)回東北林業(yè)大學(xué)食品科學(xué)實(shí)驗(yàn)室凍藏。

標(biāo)準(zhǔn)品：蘆丁、槲皮苷、金絲桃苷、綠原酸、鞣花酸、異鼠李素、表兒茶素、兒茶素、丁香酸、沒(méi)食子酸、阿魏酸、咖啡酸、木犀草素（均為色譜純，純度≥98%） 上海源葉生物科技有限公司；其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

722S分光光度計(jì) 上海光譜儀器有限公司；FA2004電子天平 常熟市意歐儀器儀表有限公司；DHG-9030A電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱 鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司；PHS-3E型pH計(jì) 上海儀電科學(xué)儀器股份有限公司；超聲波清洗機(jī) 昆山市超聲儀器有限公司；6470液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（配有電噴霧離子源，Mass Hunter數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)） 美國(guó)安捷倫公司。

1.3 方法

1.3.1 紅樹(shù)莓葉中活性成分含量測(cè)定

1.3.1.1 紅樹(shù)莓葉片水分含量

參照GB 5009.3—2016《食品中水分的測(cè)定》測(cè)定6 種樹(shù)莓葉片中的水分活度，根據(jù)紅樹(shù)莓葉水分活度折算成每克紅樹(shù)莓葉干質(zhì)量的活性物質(zhì)含量及抗氧化活性能力。

1.3.1.2 樣品提取

紅樹(shù)莓葉解凍后研磨成勻漿，精確稱取5.00 g勻漿液加入50 mL含0.1%乙酸的甲醇溶液超聲提取1 h。將提取物于4 ℃黑暗環(huán)境中放置24 h，過(guò)濾并收集上清液（以上程序重復(fù)3 次）。在40 ℃條件下減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)餾分物質(zhì)，合并餾分，用60%甲醇溶液定容至100 mL容量瓶中。用于酚類化合物分析和抗氧化評(píng)價(jià)[13]。

1.3.1.3 福林-酚法測(cè)定總酚含量

參考Pantelidis等[14]的方法測(cè)定。以沒(méi)食子酸為標(biāo)準(zhǔn)品，沒(méi)食子酸質(zhì)量濃度（mg/mL）為橫坐標(biāo)，765 nm波長(zhǎng)處吸光度為縱坐標(biāo)。其線性回歸方程為y=8.850 3x＋0.011 1（R2=0.999 1）。總酚含量根據(jù)紅樹(shù)莓葉含水量折算成每克紅樹(shù)莓葉干質(zhì)量含總酚的質(zhì)量（mg/g）。

1.3.1.4 硝酸鋁比色法測(cè)定總黃酮含量

參考張海悅等[15]的方法測(cè)定。以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品，蘆丁質(zhì)量濃度（mg/mL）為橫坐標(biāo)，510 nm波長(zhǎng)處吸光度為縱坐標(biāo)。其線性回歸方程為y=1.022 9x＋0.000 3（R2=0.999 2）?？傸S酮含量根據(jù)紅樹(shù)莓葉含水量折算成每克紅樹(shù)莓葉干質(zhì)量含總黃酮的質(zhì)量（mg/g）。

1.3.1.5 香草醛-硫酸法測(cè)定原花青素含量

參考孫蕓等[16]的方法測(cè)定。以兒茶素為標(biāo)準(zhǔn)品，兒茶素質(zhì)量濃度（mg/mL）為橫坐標(biāo)，500 nm波長(zhǎng)處吸光度為縱坐標(biāo)。其線性回歸方程為y=1.695 7x-0.001 0（R2=0.999 4）。原花青素含量根據(jù)紅樹(shù)莓葉含水量折算成每克紅樹(shù)莓葉干質(zhì)量含原花青素的質(zhì)量（mg/g）。

1.3.2 紅樹(shù)莓葉的抗氧化能力測(cè)定

1.3.2.1 鐵離子還原能力（ferric reducing antioxidant power，F(xiàn)RAP）測(cè)定

參考Benzie等[17]的方法測(cè)定。以VC作陽(yáng)性對(duì)照。紅樹(shù)莓葉片提取物采用恒質(zhì)量法確定樣品質(zhì)量濃度進(jìn)行適當(dāng)稀釋。通過(guò)比較不同紅樹(shù)莓葉片提取物中加入FRAP工作液后的吸光度大小，分析其FRAP強(qiáng)弱。

1.3.2.2 1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH）自由基清除能力測(cè)定

參考孫麗萍等[18]的方法測(cè)定，稍有改動(dòng)。在100 μL樣品中依次加入0.1 mmol/L的DPPH-乙醇溶液4 mL，避光反應(yīng)30 min，以去離子水為參比，在517 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度（A1）；用等體積無(wú)水乙醇代替DPPH溶液，測(cè)定吸光度（A2），用等體積無(wú)水乙醇代替樣品，測(cè)定吸光度（A3）。VC為陽(yáng)性對(duì)照。DPPH自由基清除率按式（1）計(jì)算：

1.3.2.3 2,2’-聯(lián)氮-雙-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸二銨鹽)（2,2’-azino-bis(3-ethylbenzthiazoline- 6-sulphonate)，ABTS）陽(yáng)離子自由基清除能力測(cè)定

參考王振宇等[19]的方法測(cè)定，稍有改動(dòng)。在100 μL樣品中加入ABTS溶液9 mL，避光反應(yīng)6 min后，在734 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度（Ai）；用等體積水代替ABTS溶液，測(cè)定吸光度（Aj），用等體積無(wú)水乙醇代替樣品，測(cè)定吸光度（A0）。VC為陽(yáng)性對(duì)照。ABTS陽(yáng)離子自由基清除率按式（2）計(jì)算：

1.3.3 紅樹(shù)莓葉中活性成分與抗氧化能力相關(guān)性分析

采用Pearson法對(duì)紅樹(shù)莓葉中總黃酮、總酚、原花青素與3 種抗氧化能力的相關(guān)性進(jìn)行分析。

1.3.4 紅樹(shù)莓葉中多酚類物質(zhì)的UPLC-MS/MS鑒定

1.3.4.1 樣品前處理

取1 mL提取液經(jīng)0.45 μm微孔濾膜后轉(zhuǎn)移至進(jìn)樣小瓶，用于UPLC-MS/MS分析。

1.3.4.2 單點(diǎn)外標(biāo)法標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

準(zhǔn)確稱取10.00 mg標(biāo)準(zhǔn)品，置于10 mL容量瓶中，用甲醇-二甲亞砜（90∶10，V/V）溶液溶解至刻度，搖勻，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，制成1.0 mg/mL溶液作為對(duì)照溶液。在相同測(cè)定條件下，以標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量濃度為對(duì)照計(jì)算紅樹(shù)莓葉中目標(biāo)物質(zhì)的絕對(duì)質(zhì)量濃度。

1.3.4.3 色譜條件

色譜柱為Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18（3.0 mm×50 mm，1.8 μm）；流動(dòng)相為A為0.1%甲酸溶液，流動(dòng)相B為乙腈；流速0.3 mL/min；柱溫40 ℃；進(jìn)樣量5 μL。梯度洗脫程序：0～0.5 min，0%～90% A；0.50～2.00 min，90%～10% A；2.00～4.00 min，10% A；4.00～4.10 min，10%～90% A；4.10～6.00 min，90% A。

1.3.4.4 質(zhì)譜條件

電噴霧離子源；接口電壓4 000 V；正離子與負(fù)離同時(shí)掃描；多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式，吹掃氣體為氮?dú)猓瑲怏w流量12 L/min；接口溫度325 ℃；脫溶劑管溫度325 ℃，加熱模塊溫度400 ℃；碰撞氣壓力138 kPa，氣體為高純氮?dú)狻?/p>

1.4 數(shù)據(jù)處理

2 結(jié)果與分析

2.1 紅樹(shù)莓葉活性成分分析

表1 紅樹(shù)莓葉片水分含量Table 1 Moisture content of red raspberry leaves

圖1 紅樹(shù)莓葉總酚、總黃酮、原花青素含量Fig. 1 Contents of total polyphenols, total flavonoids and proanthocyanidins in red raspberry leaf extracts

如表1、圖1所示，6 種紅樹(shù)莓葉片提取物的總酚含量為3.48～5.56 mg/g；總黃酮含量為2.29～3.77 mg/g；原花青素含量為1.81～3.06 mg/g。歐洲紅和紅寶石的總酚含量較高，分別為（5.56±0.06）mg/g與（5.40±0.07）mg/g，二者之間在95%水平具有顯著性差異；總酚含量最低的為秋福（3.48±0.09）mg/g。歐洲紅的總黃酮含量最高，為（3.77±0.06）mg/g；總黃酮含量最低的為紅寶石（2.29±0.05）mg/g。哈瑞泰茲的原花青素含量最高，為（3.06±0.04）mg/g，原花青素含量最低的為秋福（1.81±0.03）mg/g。

6 種不同紅樹(shù)莓葉片中活性成分含量最高的為總酚，這與曠慧等[20]在紅樹(shù)莓果渣中測(cè)得的實(shí)驗(yàn)結(jié)果相似。原花青素含量均為最低。但遲超[21]及寧瑋鈺[22]等的研究結(jié)果顯示，果籽與果實(shí)中的原花青素含量相對(duì)較高，分析其原因可能是取樣的部位不同，也可能是紅樹(shù)莓不同部位樣品的采摘時(shí)期不同及成熟度不同。

2.2 紅樹(shù)莓葉提取物抗氧化能力分析

2.2.1 ABTS陽(yáng)離子自由基清除能力分析

圖2 紅樹(shù)莓葉提取物對(duì)ABTS陽(yáng)離子自由基的清除能力Fig. 2 ABTS cation radical scavenging capacity of red raspberry leaf extracts

由圖2可知，當(dāng)樣品質(zhì)量濃度在12～50 mg/mL之間時(shí)，6 種不同品種的紅樹(shù)莓葉提取物清除ABTS陽(yáng)離子自由基的能力隨質(zhì)量濃度增加而上升；在質(zhì)量濃度大于50 mg/mL后，變化趨于平緩。在測(cè)定質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，6 種紅樹(shù)莓葉提取物清除ABTS陽(yáng)離子自由基能力均大于VC。在質(zhì)量濃度大于50 mg/mL時(shí)所有紅樹(shù)莓葉提取物ABTS陽(yáng)離子自由基清除率均高于95%。

表2 紅樹(shù)莓葉提取物清除ABTS陽(yáng)離子自由基的IC50值Table 2 IC50 values for ABTS cation radical scavenging capacity of red raspberry leaf extracts

由表2可知，所有品種的紅樹(shù)莓葉提取物清除ABTS陽(yáng)離子自由基的IC50值均小于VC，即紅樹(shù)莓葉提取物的ABTS陽(yáng)離子自由基清除能力大于VC。6 種紅樹(shù)莓葉提取物對(duì)ABTS陽(yáng)離子自由基的清除能力由大到小依次為紅寶石＞歐洲紅＞澳洲紅＞杜拉明＞哈瑞泰茲＞秋福。

2.2.2 DPPH自由基清除能力分析

如圖3所示，當(dāng)樣品質(zhì)量濃度在12～50 mg/mL之間時(shí)，紅樹(shù)莓葉提取物清除DPPH自由基的能力隨質(zhì)量濃度增加而上升，在質(zhì)量濃度大于50 mg/mL后，變化趨于平緩。在質(zhì)量濃度為12～30 mg/mL時(shí)，紅寶石葉的提取物對(duì)DPPH自由基清除能力明顯高于其他品種和VC處理組。當(dāng)質(zhì)量濃度高于50 mg/mL時(shí)，所有品種的葉提取物清除率均穩(wěn)定在85%左右，略低于VC組。

表3 紅樹(shù)莓葉提取物清除DPPH自由基的IC50值Table 3 IC50 values for DPPH radical scavenging capacity of red raspberry leaf extracts

由表3可知，秋福、哈瑞泰茲與杜拉明的DPPH自由基清除能力IC50值略高于VC，其余3 種的IC50值小于VC，其中紅寶石的IC50值為（18.16±0.11）mg/mL，明顯低于VC組。6 種紅樹(shù)莓葉提取物對(duì)DPPH自由基的清除能力由大到小依次為紅寶石＞歐洲紅＞澳洲紅＞杜拉明＞哈瑞泰茲＞秋福。

2.2.3 FRAP分析

圖4 紅樹(shù)莓葉提取物FRAPFig. 4 FRAP of red raspberry leaf extracts

表4 紅樹(shù)莓葉提取物的FRAPTable 4 FRAP values for reducing capacity of red raspberry leaf extracts

如圖4所示，紅樹(shù)莓葉提取物的FRAP與樣品質(zhì)量濃度呈良好的質(zhì)效關(guān)系。在質(zhì)量濃度為50～70 mg/mL時(shí)，秋福、紅寶石、澳洲紅的FRAP均高于VC對(duì)照組。其余3 種略低于VC組。當(dāng)質(zhì)量濃度為100 mg/mL時(shí)，除杜拉明外，其他品種紅樹(shù)莓葉提取物FRAP高于VC對(duì)照組。以不同濃度FeSO4（mmol/L）溶液為橫坐標(biāo)，734 nm波長(zhǎng)處吸光度為縱坐標(biāo)，得到曲線方程為y=0.560 3x＋0.157 9（R2=0.999 8），求得樣品的FRAP值見(jiàn)表4。由表4可知，所有品種紅樹(shù)莓葉提取物的FRAP均高于VC，6 種紅樹(shù)莓葉提取物的FRAP大小依次為秋福＞紅寶石＞澳洲紅＞歐洲紅＞哈瑞泰茲＞杜拉明。

2.3 紅樹(shù)莓葉提取物活性成分與抗氧化活性的相關(guān)性分析

表5 紅樹(shù)莓葉提取物活性成分與抗氧化活性的相關(guān)性分析Table 5 Correlation analysis between antioxidant activities and contents of active components in red raspberry leaf extracts

由表5可知，紅樹(shù)莓葉提取物的總酚與ABTS陽(yáng)離子自由基清除能力（r=0.886，P＜0.05）和DPPH自由基清除能力（r=0.891，P＜0.05）有顯著的正相關(guān)關(guān)系；ABTS陽(yáng)離子自由基清除能力與DPPH自由基清除能力的相關(guān)性極顯著，相關(guān)系數(shù)為0.992；即總酚對(duì)抗氧化活性的貢獻(xiàn)最高，在檢驗(yàn)紅樹(shù)莓葉抗氧化活性時(shí)可以選用ABTS陽(yáng)離子自由基清除能力與DPPH自由基清除能力中的一種與其他檢測(cè)方法共同評(píng)價(jià)紅樹(shù)莓葉片的抗氧化能力；這與Floegel等[23]的結(jié)論相似。本研究中總黃酮和原花青素與DPPH自由基清除能力和ABTS陽(yáng)離子自由基清除能力均為正相關(guān)但不顯著，但總黃酮與總酚的相關(guān)性較高（r=0.801），因?yàn)辄S酮從屬于多酚[24]，所以在抗氧化活性貢獻(xiàn)上黃酮可以歸入酚類物質(zhì)行列，按照這種方法計(jì)算出總黃酮對(duì)DPPH自由基清除能力和ABTS陽(yáng)離子自由基清除能力相關(guān)性為0.710和0.713，與Pearson分析結(jié)果相近（0.607、0.631）；說(shuō)明在總酚的抗氧化活性貢獻(xiàn)上總黃酮起到了較高程度的貢獻(xiàn)作用，與劉世馨等[25]的實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致。

DPPH自由基清除能力和ABTS陽(yáng)離子自由基清除能力與FRAP相關(guān)性不高；這與Huang Haizhi等[26]的實(shí)驗(yàn)結(jié)果不同，其實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明ABTS陽(yáng)離子自由基清除能力、DPPH自由基清除能力與FRAP均有較高的相關(guān)性。分析原因是FRAP雖然與總黃酮與原花青素的相關(guān)性較好但與總酚的相關(guān)性不高，并且葉片中總酚的含量為最高，在抗氧化貢獻(xiàn)上起主要作用，因此本實(shí)驗(yàn)中FRAP與其余2 種方法的相關(guān)性偏低。

2.4 紅樹(shù)莓葉提取物多酚的UPLC-MS/MS鑒定

由Pearson相關(guān)性分析可知，紅樹(shù)莓葉提取物清除ABTS陽(yáng)離子自由基能力和清除DPPH自由基能力與其總酚呈現(xiàn)顯著相關(guān)，為進(jìn)一步明確紅樹(shù)莓葉提取物中的酚類物質(zhì)的具體組成，利用UPLC-MS/MS法分析鑒定紅樹(shù)莓葉提取物中酚類物質(zhì)，酚類物質(zhì)的鑒定通過(guò)與標(biāo)準(zhǔn)品的總離子流色譜圖的母離子峰、二級(jí)質(zhì)譜的碎片和保留時(shí)間等質(zhì)譜行為進(jìn)行比較分析。采用外標(biāo)法進(jìn)行酚類物質(zhì)的定量分析。如圖5、表6～8所示。

圖5 樣品多酚總離子流色譜圖Fig. 5 Total ion current chromatograms of polyphenols in different samples

表6 多酚類物質(zhì)質(zhì)譜檢測(cè)參數(shù)Table 6 Tandem mass spectrometric parameters for polyphenols

表7 紅樹(shù)莓葉提取物中多酚含量Table 7 Polyphenol contents in red raspberry leaf extracts mg/100 g

表8 總量化多酚占總酚的百分比Table 8 Total quantified polyphenols as a percentage of total polyphenols

由表7、8可知，此方法測(cè)定出的13 種多酚總和占6 種紅樹(shù)莓葉中各自總酚的40.53%～86.07%，其中歐洲紅、哈瑞泰茲、秋福均在75%以上，而其余3 種為40.53%～49.65%。6 種紅樹(shù)莓葉中除杜拉明外蘆丁的含量最高，均超過(guò)了120 mg/100 g。丁香酸與木犀草素僅在哈瑞泰茲中鑒定出，分別為0.18 mg/100 g與0.08 mg/100 g。阿魏酸僅在杜拉明中鑒定出，為0.40 mg/100 g。檢測(cè)出的13 種量化多酚在6 種樹(shù)莓葉（根據(jù)含水量折算出干質(zhì)量）中大小依次為歐洲紅478.24 mg/100 g＞哈瑞泰茲316.00 mg/100 g＞秋福272.58 mg/100 g＞紅寶石219.19 mg/100 g＞澳洲紅210.01 mg/100 g＞杜拉明209.91 mg/100 g。

本方法共檢測(cè)出6 種酚酸，其中鞣花酸為主要酚酸。Aleksandra等[27]的研究結(jié)果顯示鞣花酸也為漿果類植物的主要酚酸，此外還含有大量的阿魏酸和綠原酸；但是本實(shí)驗(yàn)測(cè)定紅樹(shù)莓葉中的阿魏酸含量很低，原因可能是在果實(shí)和葉片中含量有差別，也可能是取樣時(shí)果實(shí)和葉片的成熟度不同導(dǎo)致。6 種紅樹(shù)莓葉除紅寶石外，對(duì)DPPH自由基與ABTS陽(yáng)離子自由基清除能力強(qiáng)弱與其鞣花酸含量大小排列順序一致，因?yàn)榧t寶石中鑒定出的酚類物質(zhì)僅占其總酚的40%左右，起到顯著抗氧化作用的物質(zhì)也可能是其余未檢出的酚類物質(zhì)或是黃酮與原花青素類物質(zhì)。

蘆丁是植物中含量最豐富的化合物之一，在漿果果實(shí)中平均占總量化多酚的44.66%，在抗氧化活性貢獻(xiàn)上起到重要作用[19,28-29]。本實(shí)驗(yàn)中測(cè)得蘆丁含量約為總量化多酚的55%。在量化多酚占比高于70%的3 個(gè)品種（歐洲紅、哈瑞泰茲、秋福）和量化多酚占比在40%～50%間的3 個(gè)品種（澳洲紅、紅寶石、杜拉明）中蘆丁含量與清除ABTS陽(yáng)離子自由基能力和清除DPPH自由基能力呈正相關(guān)。因本實(shí)驗(yàn)中存在未知酚類物質(zhì)的作用（未檢出），導(dǎo)致無(wú)法斷定蘆丁含量與抗氧化活性間的相關(guān)性是否顯著，仍需繼續(xù)深入的研究。

據(jù)報(bào)道，酚類物質(zhì)在體外具有很強(qiáng)的抗氧化作用，存在于酚環(huán)中的雙鍵，羥基側(cè)鏈和糖基化都有助于清除自由基活性[30]。多酚類物質(zhì)包括酚酸、類黃酮、芪類、單寧類等。而類黃酮物質(zhì)包括黃酮醇（槲皮素、異鼠李素、金絲桃苷）、黃烷醇（兒茶素類）、黃酮（木犀草素、蘆丁）等[24]。Fukumoto等[31]認(rèn)為，在多酚分子結(jié)構(gòu)中B環(huán)中的羥基增強(qiáng)了活性，相對(duì)于3和4碳位，在3、4和5碳位均含有萜類或羥基的多酚抗氧化活性更高。Seeram等[32]研究發(fā)現(xiàn)在C環(huán)中連接的糖苷上糖單位數(shù)與抗氧化活性呈負(fù)相關(guān)的關(guān)系。按照此方法推斷本實(shí)驗(yàn)鑒定出的類似分子結(jié)構(gòu)的7 種酚類物質(zhì)（除酚酸）的抗氧化活性排列順序?yàn)辄S烷醇＞黃酮醇＞黃酮。但對(duì)本研究中量化多酚占總酚含量相近的樹(shù)莓品種（40%左右的3 種：澳洲紅、紅寶石、杜拉明；70%左右的3 種：歐洲紅、哈瑞泰茲、秋福）抗氧化活性強(qiáng)弱順序比較發(fā)現(xiàn)，黃烷醇含量相對(duì)較高的紅樹(shù)莓葉與其抗氧化活性并不呈良好的量效關(guān)系，無(wú)法證實(shí)此結(jié)論。但袁博等[33]的實(shí)驗(yàn)中證實(shí)了黃酮醇（槲皮素）的抗氧化活性高于黃酮（蘆丁），驗(yàn)證了此結(jié)論。分析其原因可能是紅樹(shù)莓中存在未知酚類物質(zhì)的作用（未檢出）或多種多酚的協(xié)同作用導(dǎo)致的整體抗氧化活性變化。

3 結(jié) 論

本實(shí)驗(yàn)比較了6 種不同品種紅樹(shù)莓葉中總酚、總黃酮、原花青素的含量及其與抗氧化活性的相關(guān)性；采用UPLC-MS/MS法對(duì)樹(shù)莓葉中多酚類物質(zhì)進(jìn)行定性定量檢測(cè)，該方法靈敏，高效。檢出的13 種多酚以蘆丁和鞣花酸為主，含有少量的兒茶素、表兒茶素、金絲桃苷、綠原酸、沒(méi)食子酸，微量的槲皮苷、木犀草素、異鼠李素、阿魏酸、咖啡酸、丁香酸。相較于VC，6 種紅樹(shù)莓葉提取物抗氧化活性良好。紅樹(shù)莓葉中的其他酚類（酚酸類）物質(zhì)尚需進(jìn)一步鑒定。