張凱杰，秦思楠，趙春娟，高文惠*

（河北科技大學(xué)生物科學(xué)與工程學(xué)院，河北省發(fā)酵工程技術(shù)研究中心，河北 石家莊 050000）

莠去津是一種廣泛用于玉米、大豆、甘蔗、高粱等農(nóng)田作物的三嗪類除草劑，結(jié)構(gòu)式如圖1所示[1]。由于莠去津農(nóng)藥用量較大、性質(zhì)較穩(wěn)定，在土壤中不易降解，而且在水中有較高溶解度，因此在施用過程中可能對(duì)土壤、地表水及飲用水造成污染，從而嚴(yán)重威脅人類健康和環(huán)境安全[2-3]。研究表明，莠去津?yàn)閮?nèi)分泌干擾物質(zhì)，對(duì)人體有潛在致癌、致畸、致突變的作用，同時(shí)對(duì)動(dòng)物和水生生物的生殖發(fā)育存在毒害作用[4-5]。

圖1 莠去津結(jié)構(gòu)示意圖Fig. 1 Chemical structure of atrazine

目前常用于三嗪類農(nóng)藥的檢測(cè)方法主要包括高效液相色譜（high performance liquid chromatography，HPLC）法[6-8]、氣相色譜法[9-11]、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)[12-14]、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)[15-17]和毛細(xì)管色譜法[18-19]等。但通常情況下樣品成分復(fù)雜，而三嗪類除草劑在樣品中含量很低，在樣品前處理過程中盡量減少基質(zhì)效應(yīng)對(duì)分析效果的影響是目前學(xué)者需要解決的重要問題。因此，探索一種干擾小、識(shí)別性強(qiáng)的分離富集方法具有特別重要的意義。

分子印跡技術(shù)（molecularly imprinted technique，MIT）是一種以目標(biāo)分子為模板，合成具有特殊分子識(shí)別功能的分子印跡聚合物（molecularly imprinted polymers，MIPs）的技術(shù)[20]。因MIPs具有高選擇性和特異識(shí)別的能力，且制備簡(jiǎn)單、成本低、耐苛刻條件、可重復(fù)利用等，已被應(yīng)用于固相萃取[21-24]、手性分離[25]、仿生傳感器[26]、色譜分析等研究領(lǐng)域[27]。

MIPs有多種制備方法，如本體聚合法、沉淀聚合法、懸浮聚合法、表面印跡法等，本體聚合法雖然操作簡(jiǎn)單、易控制，但在制備過程中需研磨，可能破壞聚合物內(nèi)部的印跡孔穴，嚴(yán)重影響聚合物的選擇性和吸附性，而沉淀聚合法、懸浮聚合法、表面印跡法克服了本體聚合法的缺點(diǎn)。關(guān)于莠去津MIPs的制備已有多篇報(bào)道[28-31]，Gkementzoglou等[29]運(yùn)用微乳液聚合法和沉淀聚合法制備了莠去津納米MIPs微球，結(jié)果顯示由沉淀聚合法制備的MIPs對(duì)目標(biāo)分子表現(xiàn)出更高的吸附容量，并從聚合機(jī)理上做出了解釋，沉淀聚合法制備的MIPs可在聚合物的內(nèi)部和表面同時(shí)形成結(jié)合位點(diǎn)，而微乳液法僅在表面形成。陳凱尹等[30]以莠去津?yàn)槟０宸肿樱谆┧幔╩ethacrylic acid，MAA）為功能單體，采用沉淀聚合法制備了粒徑約210 nm的莠去津納米MIPs微球。Liu Guangyang等[31]在甲醇中以Fe3O4-殼聚糖納米粒子為載體，采用表面印跡法制備了一種新型的莠去津磁性MIPs，用于自來水中莠去津的吸附。而如果將MIPs作為固相萃取材料應(yīng)用于樣品前處理，不僅選擇性強(qiáng)，樣品凈化效果好，而且還具有固相萃取材料能反復(fù)使用，能有效防止色譜柱污染等優(yōu)點(diǎn)。

本實(shí)驗(yàn)以莠去津?yàn)槟０宸肿樱琈AA為功能單體，采用沉淀聚合法制備分子印跡聚合微球（molecularly imprinted polymer microspheres，MIPMs），并將其應(yīng)用于食品中三嗪類農(nóng)藥殘留分析，建立食品中莠去津及其結(jié)構(gòu)類似物農(nóng)藥殘留量的分子印跡固相萃取-HPLC檢測(cè)方法。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

莠去津（9 6%）；西瑪津（9 8%）；莠滅凈（9 5%）；撲草凈（9 7%）；M A A（分析純）；乙二醇二甲基丙烯酸酯（ethylene glycol dimethacrylate，EGDMA，分析純）；偶氮二異丁腈（azobisisobutyronitrile，AIBN，分析純）；甲醇、乙腈（色譜純）；冰乙酸（分析純）；實(shí)驗(yàn)用水為超純水。

1.2 儀器與設(shè)備

L C-2 0 A H P L C儀 日本島津公司；EVOLUTION220型紫外-可見分光光度計(jì) 美國(guó)Thermo公司；KH5200型超聲波清洗器 昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司；ASE-12型固相萃取儀 天津奧特賽恩斯儀器有限公司；TGL-15B型高速離心機(jī) 上海安亭科學(xué)儀器廠；DZF-6320型真空干燥箱 上海新苗醫(yī)療器械制造有限公司。

1.3 方法

1.3.1 紫外光譜測(cè)定

配制1 mmol/L莠去津的乙腈標(biāo)準(zhǔn)溶液、2 mmol/L MAA的乙腈溶液。取5 支10 mL比色管，向各管中加入莠去津標(biāo)液150 μL，按照模板分子與功能單體物質(zhì)的量比為1∶2、1∶4、1∶6、1∶8、1∶10向比色管中加入MAA的乙腈溶液150、300、450、600、750 μL。將5 支比色管用乙腈定容至10 mL，超聲10 min，于4 ℃靜置14 h，對(duì)上述混合溶液進(jìn)行紫外光譜掃描。

1.3.2 莠去津MIPMs的制備

取2 個(gè)150 mL圓底燒瓶，將0.2 mmol模板分子莠去津（空白不加）和0.8 mmol功能單體MAA放入圓底燒瓶中，用乙腈溶解，室溫超聲30 min，4 ℃預(yù)聚合6 h，形成模板分子-功能單體復(fù)合物，取出至室溫后加入1.5 mL EDMA和35 mg AIBN，超聲混合10 min。然后向圓底燒瓶中通N210 min除去氧氣，在60 ℃恒溫水浴中反應(yīng)24 h；聚合完成后，將聚合混合液于10 000 r/min離心5 min，得白色印跡聚合物（MIPs）和非印跡聚合物（NIPs），用甲醇-乙酸（90∶10，V/V）混合試劑作為洗脫劑去除MIPs中的模板分子，再將MIPs微球于45 ℃，真空度為0.04 MPa條件下干燥6 h，然后放入干燥器中備用，即得到可使用的MIPMs。

1.3.3 結(jié)合量實(shí)驗(yàn)

1.3.3.1 不同聚合物吸附性能的考察

分別向10 mL具塞比色管中加入不同致孔劑量（15、30、50、70 mL）和不同聚合溫度（50、60、70 ℃）制備的莠去津MIPMs及NIPs各20 mg，然后向各比色管中加入1 mmol/L莠去津的乙腈標(biāo)準(zhǔn)溶液5 mL，超聲混勻，25 ℃恒溫振蕩24 h后，10 000 r/min離心5 min，上清液過膜，供HPLC分析。根據(jù)HPLC分析結(jié)果可計(jì)算MIPMs和NIPs的吸附容量（式（1））和印跡因子（imprinting factor，IF，式（2））。

式中：Q為聚合物對(duì)莠去津的吸附容量/（μmol/g）；C0為莠去津的初始濃度/（μmol/L）；C為莠去津的平衡濃度/（μmol/L）；V為添加的溶液體積/mL；M為稱取聚合物的質(zhì)量/mg。

式中：QMIPMs為MIPMs對(duì)莠去津的吸附容量/（μmol/g）；QNIPs為NIPs對(duì)莠去津的吸附容量/（μmol/g）。

1.3.3.2 靜態(tài)吸附實(shí)驗(yàn)

稱取20 mg莠去津MIPMs及NIPs分別放入10 mL具塞比色管中，加入一定量莠去津的乙腈標(biāo)準(zhǔn)溶液，濃度范圍在0～600 μmol/L之間，將比色管置于25 ℃恒溫振蕩24 h后，10 000 r/min離心5 min，上清液過膜，供HPLC分析。

1.3.3.3 競(jìng)爭(zhēng)性吸附實(shí)驗(yàn)

稱取20 mg莠去津MIPMs放入10 mL具塞比色管中，然后加入5 mL一定濃度的西瑪津、莠去津、莠滅凈和撲草凈的乙腈溶液，混合物在25 ℃恒溫振蕩24 h后10 000 r/min離心5 min，上清液過膜，供HPLC分析。

1.3.4 莠去津-MISPE柱的制備

稱取適量MIPMs，放入水中進(jìn)行超聲分散，然后將勻漿全部裝入具砂芯玻璃層析柱內(nèi)，并裝入固相萃取裝置中待以后實(shí)驗(yàn)備用。柱內(nèi)聚合物的高度2 cm。填裝完成后，在柱頂端塞入脫脂棉，輕壓脫脂棉使其更加緊實(shí)。

1.3.5 樣品處理

1.3.5.1 提取

分別稱取磨碎或切碎后樣品5.000 g，果蔬樣品中加入3.000 g無水硫酸鈉，除去過多的水分，谷物中不加，用20 mL乙腈進(jìn)行提?。ǚ謨纱?，每次10 mL），攪拌均勻，超聲提取20 min，在4 000 r/min離心10 min，合并上清液，過濾，用乙腈定容至20 mL，待過固相萃取柱。

1.3.5.2 提取液凈化

1）活化：先用10 mL水浸潤(rùn)柱子，再用10 mL甲醇過柱活化。2）上樣：取樣品提取液1 mL移入固相萃取柱，設(shè)置固相萃取儀壓力為45 kPa。3）淋洗：當(dāng)樣品提取液全部過柱后，用20 mL水淋洗固相萃取柱。4）洗脫：用10 mL甲醇-乙酸（90∶10，V/V）溶液過柱洗脫。收集洗脫液，定容至10 mL，過0.45 μm的微孔濾膜，供HPLC分析[32]。

1.3.6 HPLC測(cè)定條件

色譜柱：Symmetry?C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；檢測(cè)波長(zhǎng)：220 nm；流動(dòng)相為甲醇-水（86∶14，V/V）；流速1 mL/min；柱溫30 ℃；進(jìn)樣量20 μL。

1.4 數(shù)據(jù)處理與分析

采用Origin 8.0和Excel 2007對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行作圖及統(tǒng)計(jì)分析，每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)測(cè)量3 次，數(shù)據(jù)均為3 次平行實(shí)驗(yàn)平均值。

2 結(jié)果與分析

2.1 模板物質(zhì)與功能單體最佳比例的選擇

合成MIPs時(shí)，功能單體用量直接影響印跡聚合物對(duì)模板分子的吸附能力。功能單體加入量少時(shí)，模板分子與功能單體在預(yù)聚合過程中形成的復(fù)合物不穩(wěn)定，特異性識(shí)別能力不足；當(dāng)功能單體用量過多時(shí)，會(huì)導(dǎo)致聚合物的非特異性吸附能力增強(qiáng)，致使特異性識(shí)別能力變差[33]。

固定莠去津的濃度，逐漸增加MAA的濃度，用紫外分光光度計(jì)測(cè)得混合液的吸收曲線，如圖2a所示。當(dāng)莠去津與MAA的比例由1∶2變化到1∶10時(shí)，混合液的最大吸收波長(zhǎng)從205 nm增加到212 nm（圖2b）。當(dāng)混合物體系最大吸收波長(zhǎng)對(duì)應(yīng)的吸光度變化趨于平緩時(shí)，說明混合物物質(zhì)的量比例對(duì)模板分子與功能單體之間的作用趨于穩(wěn)定，此時(shí)平緩區(qū)的轉(zhuǎn)折點(diǎn)所對(duì)應(yīng)的混合物比例是最佳配比[34]。由圖2b可知，莠去津與MAA物質(zhì)的量比在1∶4～1∶10范圍之間混合物的吸光度隨波長(zhǎng)紅移量的變化趨于平緩，由此推斷，莠去津與功能單體MAA的最佳物質(zhì)的量比為1∶4。

圖2 莠去津和MAA比例對(duì)預(yù)組裝體系紫外光譜的影響Fig. 2 Effect of different ratios of MAA to atrazine on UV spectrum of pre-assembled systems

2.2 致孔劑用量和聚合溫度對(duì)聚合物吸附性能的影響

在莠去津、MAA和EDMA加入量分別為0.2 mmol、0.8 mmol和1.5 mL的條件下，改變乙腈的加入量和聚合溫度，考察這些條件制備的聚合物對(duì)莠去津吸附性能的影響。通過平衡結(jié)合實(shí)驗(yàn)，比較各MIPMs和NIPs的吸附容量Q和IF，其中IF是評(píng)價(jià)印跡成功與否的最直觀指標(biāo)，結(jié)果見表1。

表1 不同聚合條件對(duì)聚合物吸附性能的影響Table 1 Effect of different polymerization conditions on adsorption properties of polymers

從表1可見，乙腈50 mL、聚合溫度60 ℃時(shí)吸附量大而且印跡效果好。MIPMs1～MIPMs3的比較發(fā)現(xiàn)，增加致孔劑的用量可以提高聚合物吸附量和選擇性；由圖3可以看出，當(dāng)乙腈用量為15 mL或30 mL時(shí)，聚合物不能形成均勻的顆粒，團(tuán)聚情況比較嚴(yán)重，這可能是因?yàn)楫?dāng)致孔劑用量較少時(shí)，聚合反應(yīng)接近于本體聚合；當(dāng)乙腈用量為50 mL或70 mL時(shí)，沉淀聚合形成聚合微球，且粒徑均勻，無團(tuán)聚現(xiàn)象，其粒徑大小分別為120 nm和200 nm左右。乙腈用量為50 mL時(shí)，聚合物微球粒徑小、比表面積大，吸附量大；但當(dāng)乙腈用量達(dá)到70 mL時(shí)，由于自由基單體濃度降低導(dǎo)致聚合反應(yīng)速率減慢，形成的聚合物較少，宏觀表現(xiàn)為材料結(jié)構(gòu)松散、易碎。因此本實(shí)驗(yàn)選擇乙腈用量為50 mL，該條件下制備的聚合物微球粒度較文獻(xiàn)[30]小很多，且分散性好。對(duì)MIPMs3、MIPMs5、MIPMs6進(jìn)行比較，研究聚合溫度對(duì)聚合物微球性能的影響。結(jié)果表明，聚合溫度越高，聚合速率越快，當(dāng)聚合溫度達(dá)到70 ℃時(shí)，出現(xiàn)爆聚現(xiàn)象，即短時(shí)間內(nèi)合成大量的MIPMs，由表1可以看出，爆聚現(xiàn)象影響了MIPMs識(shí)別位點(diǎn)的形成，導(dǎo)致MIPMs的吸附性能下降；聚合溫度為60 ℃時(shí)，12 h左右出現(xiàn)大量MIPMs；50 ℃時(shí)，常常出現(xiàn)無聚合現(xiàn)象，這可能是由于引發(fā)劑AIBN需要一定的溫度才能進(jìn)行熱引發(fā)，若溫度過低，無法達(dá)到引發(fā)劑的熱分解溫度，聚合將不能進(jìn)行。綜上，選用60 ℃作為最佳聚合溫度。

圖3 不同乙腈用量聚合物微球的掃描電鏡圖Fig. 3 Scanning electron micrographs of polymer microspheres with different amounts of different acetonitrile

2.3 聚合物吸附性能

2.3.1 靜態(tài)平衡結(jié)合實(shí)驗(yàn)及Scatchard分析

一般通過靜態(tài)平衡吸附法評(píng)價(jià)MIPs對(duì)目標(biāo)分子的選擇性能。由圖4可以看出，MIPMs比NIPs對(duì)模板分子有更好的吸附性，在莠去津濃度大于300 μmol/L時(shí)，在相同濃度下，MIPMs吸附量遠(yuǎn)大于NIPs吸附量。這說明，MIPMs在制備過程中，形成了與模板分子互補(bǔ)的三維空穴結(jié)構(gòu)，它對(duì)模板分子有記憶功能，具有特異選擇性。但是合成NIPs時(shí)由于未加入模板物質(zhì)，因此NIPs對(duì)模板分子無特異選擇性。

圖4 MIPMs和NIPs對(duì)莠去津的靜態(tài)吸附等溫線Fig. 4 Static adsorption isotherms of MIPMs and NIPs toward atrazine

圖5 MIPMs吸附性的Scatchard曲線Fig. 5 Scatchard curve of MIPMs adsorption

由Scatchard分析可以獲得聚合物對(duì)目標(biāo)分子吸附位點(diǎn)的種類、解離常數(shù)及最大吸附量等信息。Scatchard方程見式（3）：

式中：Q為聚合物對(duì)莠去津的吸附量/（μmol/g）；C為莠去津的平衡濃度/（μmol/L）；Qmax為吸附位點(diǎn)的最大表觀結(jié)合量/（μmol/g）；Kd為吸附位點(diǎn)的解離平衡常數(shù)/（μmol/L）。

由圖5可知，Q/C對(duì)Q是非線性的，說明MIPMs對(duì)莠去津的吸附是非均一的，原因可能是聚合過程中加熱容易造成體系中熱力學(xué)條件的不均勻，使模板分子和功能單體產(chǎn)生不同的作用形式，同時(shí)自由基聚合過程的不穩(wěn)定性致使空穴的大小產(chǎn)生差異，影響了結(jié)合動(dòng)力學(xué)特性的均一性[35]。從圖5可以看出，Scatchard分析圖中有兩個(gè)線性較好的部分，說明MIPMs對(duì)模板分子主要存在兩類吸附位點(diǎn)。對(duì)兩個(gè)線性部分進(jìn)行擬合，得到兩個(gè)線性方程：第1類吸附位點(diǎn)的方程為y=2.486-0.042 7x，其解離常數(shù)Kd1為23.42 μmol/L，最大表觀結(jié)合量Qmax1為58.22 μmol/g；第2類吸附位點(diǎn)的方程為y=0.735-0.002 6x，解離常數(shù)Kd2為384.62 μmol/L，最大表觀結(jié)合量Qmax2為282.69 μmol/g。

2.3.2 競(jìng)爭(zhēng)性吸附性能

為考察MIPs的特異性吸附能力，用莠去津MIPMs對(duì)莠去津及其結(jié)構(gòu)類似物西瑪津、莠滅凈、撲草凈的吸附性能進(jìn)行測(cè)試。

圖6 MIPMs對(duì)莠去津及其結(jié)構(gòu)類似物的吸附選擇性Fig. 6 Adsorption selectivity of MIPMs toward atrazine and its structural analogues

由圖6可知，MIPMs對(duì)4 種三嗪類除草劑均有吸附，吸附效果依次為莠去津＞西瑪津＞莠滅凈＞撲草凈，說明多種物質(zhì)存在時(shí)MIPMs對(duì)其吸附性能存在差異，主要原因是4 種農(nóng)藥的結(jié)構(gòu)與分子質(zhì)量的大小不同。首先是MIPMs對(duì)模板物質(zhì)莠去津的吸附性能最好，其次是分子質(zhì)量最小的西瑪津，而分子質(zhì)量大于模板物質(zhì)的莠滅凈與撲草凈吸附量較小。

2.4 分子印跡固相萃取柱的重復(fù)性和穩(wěn)定性

為驗(yàn)證分子印跡固相萃取柱的重復(fù)性和穩(wěn)定性，實(shí)驗(yàn)取濃度為1 mmol/L莠去津標(biāo)液1 mL按1.3.5.2節(jié)方法過分子印跡固相萃取柱。由表2可以看出，使用分子印跡固相萃取柱10、30、50、70、90、100 次，莠去津過MISPE洗脫液峰面積沒有發(fā)生明顯變化，即固相萃取柱并未隨著使用次數(shù)的增加其吸附效果有所降低，說明分子印跡固相萃取柱具有良好的重復(fù)性和穩(wěn)定性。

表2 固相萃取柱可反復(fù)使用次數(shù)Table 2 Reusability of MISPE column

2.5 色譜條件的選擇

2.5.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

圖7 4 種三嗪類農(nóng)藥的紫外光譜圖Fig. 7 UV absorption spectra of four triazine herbicides

由圖7可知，西瑪津、莠滅凈、莠去津和撲草凈的最大吸收波長(zhǎng)分別為212、218、222、222 nm，綜合考慮各物質(zhì)的紫外吸收情況，檢測(cè)波長(zhǎng)以220 nm為宜。

2.5.2 流動(dòng)相比例選擇

本實(shí)驗(yàn)分別考察不同比例的甲醇-水（90∶10、86∶14、83∶17、80∶20，V/V）對(duì)4 種三嗪類農(nóng)藥保留行為的影響。流動(dòng)相中當(dāng)甲醇比例較高時(shí)（如90%甲醇），4 種三嗪類農(nóng)藥出峰快；水體積相對(duì)較少時(shí)，如80∶20，則4 種三嗪類農(nóng)藥保留時(shí)間偏長(zhǎng)；當(dāng)甲醇-水（86∶14，V/V）時(shí)，4 種三嗪類農(nóng)藥保留時(shí)間適宜，且分離效果好，如圖8所示。因此，本實(shí)驗(yàn)選擇甲醇-水（86∶14，V/V）作為流動(dòng)相。

圖8 4 種三嗪類農(nóng)藥分離過程中流動(dòng)相比例的選擇Fig. 8 Selection of mobile phase composition for separation of four triazine herbicides

2.6 莠去津-MISPE-HPLC檢測(cè)食品中三嗪類農(nóng)藥殘留

2.6.1 線性關(guān)系與檢出限

分別配制4 種三嗪類農(nóng)藥質(zhì)量濃度為0.5～50 μg/mL的一系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，在1.3.6節(jié)色譜條件下對(duì)配制的溶液進(jìn)行測(cè)定。以待測(cè)物質(zhì)量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)作圖，得到線性關(guān)系曲線，結(jié)果如表3所示。

表3 4 種三嗪類農(nóng)藥線性關(guān)系及檢出限Table 3 Linear relationship and detection limits for four triazine herbicides

2.6.2 莠去津固相萃取柱對(duì)樣品的凈化和吸附能力

為考察莠去津固相萃取柱對(duì)樣品中4 種三嗪類農(nóng)藥的凈化吸附能力，實(shí)驗(yàn)選擇多種樣品進(jìn)行測(cè)定，按照1.3.1節(jié)對(duì)樣品進(jìn)行提取，樣品提取液和樣品加標(biāo)提取液用分子印跡固相萃取柱進(jìn)行處理，然后用HPLC儀檢測(cè)。由圖9和圖10a、b可知，在樣品中未檢出目標(biāo)物。

圖9 小麥樣品提取液（a）、過MISPE洗脫液（b）和樣品加標(biāo)提取液過MISPE洗脫液（c）色譜圖Fig. 9 Chromatograms of wheat extract (a), eluate from MISPE (b)and spiked eluate from MISPE (c)

圖10 蘋果樣品提取液（a）、過MISPE洗脫液（b）和樣品加標(biāo)提取液過MISPE洗脫液（c）色譜圖Fig. 10 Chromatograms of apple extract (a), eluate from MISPE (b)and spiked eluate from MISPE (c)

同時(shí)，從圖9、10還可以看出，該固相萃取柱可以從復(fù)雜基質(zhì)中特異性分離富集目標(biāo)物，對(duì)樣品凈化效果好（比較圖9和圖10a、b），該萃取柱只對(duì)目標(biāo)物質(zhì)及其結(jié)構(gòu)類似物有選擇性，而對(duì)雜質(zhì)不具有吸附能力（比較圖9和圖10a、c）。

2.6.3 樣品回收率和精密度實(shí)驗(yàn)

表4 回收率和精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果（n=5）Table 4 Recovery and precision of the method (n= 5)

為考察莠去津-MISPE-HPLC方法準(zhǔn)確性和重復(fù)性，本實(shí)驗(yàn)選取玉米、小麥、甘蔗和蘋果樣品，分別在0.1 μg/mL和5 μg/mL加標(biāo)量條件下進(jìn)行回收率實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見表4。樣品中4 種三嗪類農(nóng)藥的加標(biāo)平均回收率在86.2%～95.7%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（relative standard deviation，RSD）為1.98%～4.51%（n=5），說明本方法回收率高、精密度好，基本滿足農(nóng)藥殘留分析要求。

3 結(jié) 論

采用沉淀聚合法合成了莠去津MIPs微球，并優(yōu)化了聚合工藝。當(dāng)莠去津和MAA物質(zhì)的量比1∶4、致孔劑乙腈用量50 mL、聚合溫度60 ℃時(shí)，制備的莠去津MIPMs吸附效果最好。靜態(tài)吸附結(jié)果表明，所制得的MIPMs對(duì)模板物質(zhì)具有較強(qiáng)的吸附能力；由Scatchard分析可知，莠去津和功能單體MAA形成了兩類結(jié)合位點(diǎn)。競(jìng)爭(zhēng)性吸附實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明MIPMs不僅對(duì)模板物質(zhì)莠去津有很好的吸附能力，對(duì)其他3 種結(jié)構(gòu)類似物西瑪津、莠滅凈和撲草凈均有吸附，吸附能力依次為莠去津＞西瑪津＞莠滅凈＞撲草凈。將莠去津MIPMs作為固相萃取填料制備了MISPE柱，建立了莠去津-MISPEHPLC檢測(cè)食品中4 種三嗪類農(nóng)藥殘留的方法。結(jié)果表明，莠去津MISPE柱對(duì)三嗪類農(nóng)藥殘留有很好的吸附富集能力和樣品凈化效果，樣品加標(biāo)平均回收率為86.2%～95.7%， RSD不高于4.51%（n=5），檢出限為0.5～5 ng/mL，基本滿足農(nóng)藥殘留分析要求。