河南省新鄉(xiāng)市食品藥品檢驗(yàn)所（453000）常海瑩

河南省新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院（453000）馬偉偉

鹽酸氟桂利嗪為選擇性鈣拮抗劑，可阻滯過(guò)量的鈣離子跨膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，防止細(xì)胞內(nèi)鈣負(fù)荷過(guò)量。也可防止缺血缺氧時(shí)大量鈣進(jìn)入神經(jīng)元，改善腦微循環(huán)及神經(jīng)元代謝，抑制腦血管痙攣、血小板凝聚及血液粘滯度增高等，此外還有細(xì)胸胞膜穩(wěn)定作用。本品脂溶性高，易透過(guò)血腦屏障。臨床上主要用于腦供血不足，椎動(dòng)脈缺血，腦血栓形成后等，收載于《中國(guó)藥典》2015年版二部[1]。測(cè)量不確定度是與測(cè)量結(jié)果關(guān)聯(lián)的參數(shù)，用于表征合理賦予被測(cè)量值的分散性，是判定測(cè)量結(jié)果可信的依據(jù)，也代表一個(gè)實(shí)驗(yàn)室結(jié)果可信性、可比性和可接受性的重要指標(biāo)。通過(guò)對(duì)藥品檢測(cè)方法中的測(cè)量不確定度的分析評(píng)定為結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性提供了保證。本文參考我國(guó)國(guó)家計(jì)量技術(shù)規(guī)定最新版JJF1059.1_2012《測(cè)量不確定度評(píng)定與表示》[2]，并查看相關(guān)書(shū)籍及文獻(xiàn)，對(duì)鹽酸氟桂利嗪膠囊含量測(cè)定進(jìn)行不確定度的評(píng)定，找出影響因素，反映測(cè)量結(jié)果的準(zhǔn)確性和置信度[3][4]。

1 材料與方法

1.1 儀器 島津高效液相色譜儀LC-20AT；CP225D型電子天平（北京賽多利斯公司，d=0.01mg）；AE100S型電子天平（瑞士梅特勒公司，d=0.1mg）。

1.2 藥品及試劑 鹽酸氟桂利嗪膠囊（吉林省七星山藥業(yè)有限公司，批號(hào)20171002，規(guī)格5mg）；鹽酸氟桂利嗪對(duì)照品（中國(guó)食品藥品鑒定研究院，批號(hào)100844-201803）。甲醇（色譜純）其他試劑為分析純，水為純化水。

1.3 溶液的配制

1.3.1 供試品溶液 取鹽酸氟桂利嗪膠囊20粒，精密稱(chēng)定，取裝量項(xiàng)下內(nèi)容物，混合均勻，精密稱(chēng)取細(xì)粉適量（約相當(dāng)于氟桂利嗪10mg），0.2478g和0.2468g置100ml容量瓶中，加乙醇10ml，振搖使鹽酸氟桂利嗪溶解，加鹽酸溶液（取稀鹽酸24ml加水至1000ml）稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，精密量取5ml置50ml容量瓶中加上述鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，得供試品溶液。

1.3.2 對(duì)照品溶液 精密稱(chēng)取氟桂利嗪對(duì)照品12.85mg和12.88mg，分別置100ml容量瓶中，加乙醇10ml，振搖使溶解，加上述鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，精密量取1ml置10ml容量瓶中加上述鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，即得。

1.4 HPLC法測(cè)定鹽酸氟桂利嗪膠囊含量 取“1.3”項(xiàng)下配制的供試品溶液及對(duì)照品溶液，在色譜條件（C18，4.6mm×250mm，5μm色譜柱），以甲醇-磷酸鹽緩沖液（取磷酸二氫鉀1.36g，加水溶解并稀釋成1000ml加三乙胺4ml，用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.5）（75∶25）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為253nm，柱溫30.0℃，流速1.0ml，取20μL注入色譜儀，記錄色譜圖。

1.5 鹽酸氟桂利嗪膠囊標(biāo)示含量計(jì)算的數(shù)學(xué)模型 根據(jù)《中國(guó)藥典》2015年版四部中高效液相色譜法計(jì)算方法及藥品分析過(guò)程，得公式：y：測(cè)得含鹽酸氟桂利嗪膠囊按桂利嗪計(jì)算為標(biāo)示量的百分含量（%），AS：供試品平均峰面積；Ar：對(duì)照品平均峰面積；m：供試品20?？傎|(zhì)量（g），mS：供試品稱(chēng)重（g），mr：對(duì)照品稱(chēng)重（mg），DS：供試品稀釋倍數(shù)；Dr：對(duì)照品稀釋倍數(shù)；P：對(duì)照品純度；5樣品的規(guī)格（mg）。

1.6 相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度(urel)的評(píng)定 根據(jù)文獻(xiàn)對(duì)測(cè)量不確定度的來(lái)源（AS、Ar、DS、Dr、P、mS、mr和m）進(jìn)行評(píng)定。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)照品稱(chēng)量的不確定度

2.1.1 天平稱(chēng)量重復(fù)性不確定度[u(mr)1]實(shí)驗(yàn)所用電子天平（d=0.01mg）的重復(fù)性誤差為0.05mg(見(jiàn)鑒定證書(shū))，按矩形分布[2]（取包含因子計(jì)算：=2.89×10-2mg。

2.1.2 天平校準(zhǔn)的測(cè)量不確定度[u(mr)2]所用電子天平的鑒定證書(shū)給出的稱(chēng)量范圍的天平示值誤差為-0.01mg，按矩形分布[2]（取包含因子計(jì)算：=5.77×10-3mg。

2.1.3 對(duì)照品稱(chēng)量的urel因稱(chēng)量為減重法，即2次稱(chēng)量均是相對(duì)獨(dú)立的，每一次的稱(chēng)量都會(huì)受天平校準(zhǔn)帶來(lái)的不確定度影響，故對(duì)照品稱(chēng)量的urel分別為：urel(mr1)

2.2 對(duì)照品純度的urel鹽酸氟桂利嗪對(duì)照品由中國(guó)食品藥品檢定研究院提供，純度100.0%，屬于B類(lèi)測(cè)量不確定度，故假定其分散區(qū)間的半寬度為0.05%，按矩形分布[2]（取包含因子計(jì)算：urel(p)=u(p)/ 1 00. 0 % = 22..89×10-4。

2.3 供試品稱(chēng)量的不確定度

2.3.1 天平稱(chēng)量重復(fù)性不確定度[u(ms)1]實(shí)驗(yàn)所用電子天平（d=0.1mg）的重復(fù)性誤差為1.0mg(見(jiàn)鑒定證書(shū))，按矩形分布[2]（取包含因子）計(jì)算：=0.577mg。

2.3.2 天平校準(zhǔn)的測(cè)量不確定度[u(ms)2]所用電子天平的鑒定證書(shū)給出的示值誤差為-0.1mg，按矩形分布[2]（取包含因子計(jì)算：

2.3.3 供試品總質(zhì)量urel(m)20粒膠囊內(nèi)容物重量（m=2.5840g）的urel(m)為urel(m)

2.3.4 供試品稱(chēng)量的urel(ms)每份供試品稱(chēng)重的urel分別為：

2.4 對(duì)照品稀釋體積的不確定度

2.4.1 校準(zhǔn) 實(shí)驗(yàn)中用到A級(jí)100ml容量瓶，允差為0.10ml。A級(jí)10ml容量瓶，允差為0.02ml。A級(jí)1ml移液管，允差為0.007ml。按三角分布（取包含因子計(jì)算：

2.4.2 溫度 因水的膨脹系數(shù)（2.1×10-4.℃-1）大于玻璃的膨脹系數(shù)，因此可忽略溫度對(duì)容器容積的影響。試驗(yàn)是溶液和量瓶的溫度差異變化為3℃。按矩形分布[2]（取包含因子計(jì)算：u(vr2)1

2.4.3 對(duì)照品稀釋體積的urel(Dr)urel(Dr1)

2.5 供試品稀釋體積的不確定度

2.5.1 校準(zhǔn) 實(shí)驗(yàn)中用到A級(jí)100ml容量瓶及50ml容量瓶和A級(jí)5ml單標(biāo)線移液管，容量允差分別0.10ml為、0.05ml和0.015ml，均按三角分布（取包含因子計(jì)算：ml。

2.5.2 溫度 按“2.4.2”項(xiàng)下評(píng)定：u(vs1)1

2.5.3 供試品稀釋體積urel(Ds)urel(DS1)

2.6 對(duì)照品溶液色譜峰面積的不確定度

2.6.1urel(Ar1)對(duì)照品溶液1測(cè)量5次得峰面積；698780、697790、697860、697752、698020，平均峰面積按貝賽爾公式計(jì)算：=6.10×10-4。

2.6.2urel(Ar2)對(duì)照品溶液2測(cè)量2次得峰面積；699770、699790，平均峰面積=699780，按貝賽爾公式計(jì)算：urel(Ar2)

2.6.3urel(Ar)對(duì)照品溶液色譜峰面積引起的=6.10×10-4。

2.7 供試品溶液色譜峰面積引起的不確定度 取供試品溶液1和供試品溶液2分別進(jìn)樣2次，峰面積（A1和A2）分別為593960、594460和592850、593020，平均分別為594210和592940。采用極差法[2]評(píng)定，即R1＝500，R2＝170，C＝1.13極差系數(shù)，urel(As1)=R1/CA1=7.45×10-4；urel(As2)=R2/CA2=2.54×10-4；=3.73×10-4。

2.9 測(cè)得結(jié)果的合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度uc(y)=99.7%×1.03×10-2=0.8%。

2.10 擴(kuò)展不確定度u(y)=kuc(y)，本實(shí)驗(yàn)取包含因子K＝2（置信概率為95%），擴(kuò)展不確定度為u(y)=1.6%。含量測(cè)定結(jié)果可表示為，即（96.7±1.6）%，K＝2。

3 討論

檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性直接關(guān)系到藥品的質(zhì)量，實(shí)驗(yàn)中人員、儀器、環(huán)境等因素都會(huì)對(duì)測(cè)量結(jié)果的不確定度產(chǎn)生影響。因此要對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)、方法進(jìn)行不確定度評(píng)定。由上述不確定度的分析評(píng)定結(jié)果可知，稱(chēng)量是定量分析中不確定度的最大影響因素，應(yīng)選擇高精密度的天平，盡量提高對(duì)照品和供試品的稱(chēng)樣量。其次是體積的影響，選用干燥潔凈的實(shí)驗(yàn)器具，減少操作步驟，規(guī)范人員操作，是降低不確定度分量值的關(guān)鍵。從高效液相色譜儀峰面積的重復(fù)性未產(chǎn)生較大的不確定度分量可知定期做好液相色譜儀的計(jì)量檢定和期間核查工作尤為重要，使液相色譜儀處于良好的工作狀態(tài)。