河南省新鄉(xiāng)市食品藥品檢驗(yàn)所(453000)常海瑩
河南省新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院(453000)馬偉偉
鹽酸氟桂利嗪為選擇性鈣拮抗劑,可阻滯過(guò)量的鈣離子跨膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi),防止細(xì)胞內(nèi)鈣負(fù)荷過(guò)量。也可防止缺血缺氧時(shí)大量鈣進(jìn)入神經(jīng)元,改善腦微循環(huán)及神經(jīng)元代謝,抑制腦血管痙攣、血小板凝聚及血液粘滯度增高等,此外還有細(xì)胸胞膜穩(wěn)定作用。本品脂溶性高,易透過(guò)血腦屏障。臨床上主要用于腦供血不足,椎動(dòng)脈缺血,腦血栓形成后等,收載于《中國(guó)藥典》2015年版二部[1]。測(cè)量不確定度是與測(cè)量結(jié)果關(guān)聯(lián)的參數(shù),用于表征合理賦予被測(cè)量值的分散性,是判定測(cè)量結(jié)果可信的依據(jù),也代表一個(gè)實(shí)驗(yàn)室結(jié)果可信性、可比性和可接受性的重要指標(biāo)。通過(guò)對(duì)藥品檢測(cè)方法中的測(cè)量不確定度的分析評(píng)定為結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性提供了保證。本文參考我國(guó)國(guó)家計(jì)量技術(shù)規(guī)定最新版JJF1059.1_2012《測(cè)量不確定度評(píng)定與表示》[2],并查看相關(guān)書(shū)籍及文獻(xiàn),對(duì)鹽酸氟桂利嗪膠囊含量測(cè)定進(jìn)行不確定度的評(píng)定,找出影響因素,反映測(cè)量結(jié)果的準(zhǔn)確性和置信度[3][4]。
1.1 儀器 島津高效液相色譜儀LC-20AT;CP225D型電子天平(北京賽多利斯公司,d=0.01mg);AE100S型電子天平(瑞士梅特勒公司,d=0.1mg)。
1.2 藥品及試劑 鹽酸氟桂利嗪膠囊(吉林省七星山藥業(yè)有限公司,批號(hào)20171002,規(guī)格5mg);鹽酸氟桂利嗪對(duì)照品(中國(guó)食品藥品鑒定研究院,批號(hào)100844-201803)。甲醇(色譜純)其他試劑為分析純,水為純化水。
1.3 溶液的配制
1.3.1 供試品溶液 取鹽酸氟桂利嗪膠囊20粒,精密稱(chēng)定,取裝量項(xiàng)下內(nèi)容物,混合均勻,精密稱(chēng)取細(xì)粉適量(約相當(dāng)于氟桂利嗪10mg),0.2478g和0.2468g置100ml容量瓶中,加乙醇10ml,振搖使鹽酸氟桂利嗪溶解,加鹽酸溶液(取稀鹽酸24ml加水至1000ml)稀釋至刻度,搖勻,濾過(guò),精密量取5ml置50ml容量瓶中加上述鹽酸溶液稀釋至刻度,搖勻,得供試品溶液。
1.3.2 對(duì)照品溶液 精密稱(chēng)取氟桂利嗪對(duì)照品12.85mg和12.88mg,分別置100ml容量瓶中,加乙醇10ml,振搖使溶解,加上述鹽酸溶液稀釋至刻度,搖勻,精密量取1ml置10ml容量瓶中加上述鹽酸溶液稀釋至刻度,搖勻,即得。
1.4 HPLC法測(cè)定鹽酸氟桂利嗪膠囊含量 取“1.3”項(xiàng)下配制的供試品溶液及對(duì)照品溶液,在色譜條件(C18,4.6mm×250mm,5μm色譜柱),以甲醇-磷酸鹽緩沖液(取磷酸二氫鉀1.36g,加水溶解并稀釋成1000ml加三乙胺4ml,用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.5)(75∶25)為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng)為253nm,柱溫30.0℃,流速1.0ml,取20μL注入色譜儀,記錄色譜圖。
1.5 鹽酸氟桂利嗪膠囊標(biāo)示含量計(jì)算的數(shù)學(xué)模型 根據(jù)《中國(guó)藥典》2015年版四部中高效液相色譜法計(jì)算方法及藥品分析過(guò)程,得公式:y:測(cè)得含鹽酸氟桂利嗪膠囊按桂利嗪計(jì)算為標(biāo)示量的百分含量(%),AS:供試品平均峰面積;Ar:對(duì)照品平均峰面積;m:供試品20??傎|(zhì)量(g),mS:供試品稱(chēng)重(g),mr:對(duì)照品稱(chēng)重(mg),DS:供試品稀釋倍數(shù);Dr:對(duì)照品稀釋倍數(shù);P:對(duì)照品純度;5樣品的規(guī)格(mg)。
1.6 相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度(urel)的評(píng)定 根據(jù)文獻(xiàn)對(duì)測(cè)量不確定度的來(lái)源(AS、Ar、DS、Dr、P、mS、mr和m)進(jìn)行評(píng)定。
2.1 對(duì)照品稱(chēng)量的不確定度
2.1.1 天平稱(chēng)量重復(fù)性不確定度[u(mr)1]實(shí)驗(yàn)所用電子天平(d=0.01mg)的重復(fù)性誤差為0.05mg(見(jiàn)鑒定證書(shū)),按矩形分布[2](取包含因子計(jì)算:=2.89×10-2mg。
2.1.2 天平校準(zhǔn)的測(cè)量不確定度[u(mr)2]所用電子天平的鑒定證書(shū)給出的稱(chēng)量范圍的天平示值誤差為-0.01mg,按矩形分布[2](取包含因子計(jì)算:=5.77×10-3mg。
2.1.3 對(duì)照品稱(chēng)量的urel因稱(chēng)量為減重法,即2次稱(chēng)量均是相對(duì)獨(dú)立的,每一次的稱(chēng)量都會(huì)受天平校準(zhǔn)帶來(lái)的不確定度影響,故對(duì)照品稱(chēng)量的urel分別為:urel(mr1)
2.2 對(duì)照品純度的urel鹽酸氟桂利嗪對(duì)照品由中國(guó)食品藥品檢定研究院提供,純度100.0%,屬于B類(lèi)測(cè)量不確定度,故假定其分散區(qū)間的半寬度為0.05%,按矩形分布[2](取包含因子計(jì)算:urel(p)=u(p)/ 1 00. 0 % = 22..89×10-4。
2.3 供試品稱(chēng)量的不確定度
2.3.1 天平稱(chēng)量重復(fù)性不確定度[u(ms)1]實(shí)驗(yàn)所用電子天平(d=0.1mg)的重復(fù)性誤差為1.0mg(見(jiàn)鑒定證書(shū)),按矩形分布[2](取包含因子)計(jì)算:=0.577mg。
2.3.2 天平校準(zhǔn)的測(cè)量不確定度[u(ms)2]所用電子天平的鑒定證書(shū)給出的示值誤差為-0.1mg,按矩形分布[2](取包含因子計(jì)算:
2.3.3 供試品總質(zhì)量urel(m)20粒膠囊內(nèi)容物重量(m=2.5840g)的urel(m)為urel(m)
2.3.4 供試品稱(chēng)量的urel(ms)每份供試品稱(chēng)重的urel分別為:
2.4 對(duì)照品稀釋體積的不確定度
2.4.1 校準(zhǔn) 實(shí)驗(yàn)中用到A級(jí)100ml容量瓶,允差為0.10ml。A級(jí)10ml容量瓶,允差為0.02ml。A級(jí)1ml移液管,允差為0.007ml。按三角分布(取包含因子計(jì)算:
2.4.2 溫度 因水的膨脹系數(shù)(2.1×10-4.℃-1)大于玻璃的膨脹系數(shù),因此可忽略溫度對(duì)容器容積的影響。試驗(yàn)是溶液和量瓶的溫度差異變化為3℃。按矩形分布[2](取包含因子計(jì)算:u(vr2)1
2.4.3 對(duì)照品稀釋體積的urel(Dr)urel(Dr1)
2.5 供試品稀釋體積的不確定度
2.5.1 校準(zhǔn) 實(shí)驗(yàn)中用到A級(jí)100ml容量瓶及50ml容量瓶和A級(jí)5ml單標(biāo)線移液管,容量允差分別0.10ml為、0.05ml和0.015ml,均按三角分布(取包含因子計(jì)算:ml。
2.5.2 溫度 按“2.4.2”項(xiàng)下評(píng)定:u(vs1)1
2.5.3 供試品稀釋體積urel(Ds)urel(DS1)
2.6 對(duì)照品溶液色譜峰面積的不確定度
2.6.1urel(Ar1)對(duì)照品溶液1測(cè)量5次得峰面積;698780、697790、697860、697752、698020,平均峰面積按貝賽爾公式計(jì)算:=6.10×10-4。
2.6.2urel(Ar2)對(duì)照品溶液2測(cè)量2次得峰面積;699770、699790,平均峰面積=699780,按貝賽爾公式計(jì)算:urel(Ar2)
2.6.3urel(Ar)對(duì)照品溶液色譜峰面積引起的=6.10×10-4。
2.7 供試品溶液色譜峰面積引起的不確定度 取供試品溶液1和供試品溶液2分別進(jìn)樣2次,峰面積(A1和A2)分別為593960、594460和592850、593020,平均分別為594210和592940。采用極差法[2]評(píng)定,即R1=500,R2=170,C=1.13極差系數(shù),urel(As1)=R1/CA1=7.45×10-4;urel(As2)=R2/CA2=2.54×10-4;=3.73×10-4。
2.9 測(cè)得結(jié)果的合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度uc(y)=99.7%×1.03×10-2=0.8%。
2.10 擴(kuò)展不確定度u(y)=kuc(y),本實(shí)驗(yàn)取包含因子K=2(置信概率為95%),擴(kuò)展不確定度為u(y)=1.6%。含量測(cè)定結(jié)果可表示為,即(96.7±1.6)%,K=2。
檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性直接關(guān)系到藥品的質(zhì)量,實(shí)驗(yàn)中人員、儀器、環(huán)境等因素都會(huì)對(duì)測(cè)量結(jié)果的不確定度產(chǎn)生影響。因此要對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)、方法進(jìn)行不確定度評(píng)定。由上述不確定度的分析評(píng)定結(jié)果可知,稱(chēng)量是定量分析中不確定度的最大影響因素,應(yīng)選擇高精密度的天平,盡量提高對(duì)照品和供試品的稱(chēng)樣量。其次是體積的影響,選用干燥潔凈的實(shí)驗(yàn)器具,減少操作步驟,規(guī)范人員操作,是降低不確定度分量值的關(guān)鍵。從高效液相色譜儀峰面積的重復(fù)性未產(chǎn)生較大的不確定度分量可知定期做好液相色譜儀的計(jì)量檢定和期間核查工作尤為重要,使液相色譜儀處于良好的工作狀態(tài)。