江蘇省鹽城市食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)中心（224002）支榮榮

本品為樟科植物肉桂Cinnamomum cassia Presl.的干燥帶宿萼的未成熟果實(shí)，別名肉桂子、桂丁等，入藥始見(jiàn)于《百草鏡》，《綱目拾遺》引《百草鏡》曰：桂丁“形如吳茱萸，出廣西交趾，乃肉桂子也”所述與今相符。主產(chǎn)于廣西、廣東、福建；云南亦產(chǎn)。主銷(xiāo)華北、東北、并出口國(guó)外。具有溫里散寒，止痛，止呃的功效，主治心胸疼痛，胃腹冷痛，惡心，噯氣，呃逆，嘔吐，肺寒咳喘等癥[1]。桂丁香含揮發(fā)油，油中含桂皮醛（Cinnamaldehyde）等[2]，桂丁香中的桂皮醛含量高于肉桂[3]。桂皮醛能使冠狀動(dòng)脈和腦動(dòng)脈灌注壓相應(yīng)提高，促進(jìn)心肌側(cè)支循環(huán)開(kāi)放，改變其血液供應(yīng)，對(duì)心肌有保護(hù)作用，從而使肉桂油具有抗心律失常的作用[4]。2015年版《中國(guó)藥典》中，肉桂、桂枝等藥材及其制劑均以桂皮醛作為重要指標(biāo)性化合物[5]。

該品種為江蘇省地方中藥材，收載于《江蘇省中藥飲片炮制規(guī)范》（2002年版），由于標(biāo)準(zhǔn)中檢驗(yàn)項(xiàng)目較少，只有性狀項(xiàng)，已不能科學(xué)評(píng)價(jià)和全面控制桂丁香的質(zhì)量，為了完善該標(biāo)準(zhǔn)，在原標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上進(jìn)行了修訂與提高，增加了組織顯微鑒定和主成分桂皮醛HPLC法測(cè)定。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent1260高效液相色譜儀（美國(guó)Agilent）；BP211D電子天平、BT224S電子天平（德國(guó)Sartorius）；Olympus bx51顯微成像系統(tǒng)（日本Olympus）；Milli-Q超純水系統(tǒng)（德國(guó)Merk）。

1.2 試藥 桂皮醛對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，110710-201821）；乙腈（江蘇漢邦科技有限公司，色譜純）；水（Milli-Q超純水系統(tǒng)）等；其他試劑均為分析純；硅膠G薄層板（德國(guó)Merk、青島海洋化工廠分廠）；色譜柱（Capcell C18 4.6×150mm，5μm）。桂丁香樣品為8批次，購(gòu)自江蘇各地。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 顯微鑒別[6]本品粉末棕褐色至紅褐色。非腺毛單細(xì)胞，類(lèi)矛狀，多彎曲，有的胞腔內(nèi)有紅棕色分泌物，壁厚。厚壁細(xì)胞淡黃色，類(lèi)圓形，長(zhǎng)圓形或不規(guī)則形，壁明顯增厚，孔溝和紋孔均明顯，木化，多含棕色物質(zhì)。纖維淡黃色，單個(gè)或成束，長(zhǎng)梭形、類(lèi)棒形，細(xì)長(zhǎng)或較粗短，胞腔較大，孔溝和紋孔不明顯。色素細(xì)胞黃棕色至棕褐色，類(lèi)長(zhǎng)方形或不規(guī)則多邊形。網(wǎng)紋細(xì)胞長(zhǎng)圓形，具網(wǎng)狀紋孔。油細(xì)胞多已破裂，油滴黃棕色，多散在。黏液細(xì)胞類(lèi)圓形。外果皮細(xì)胞淡黃色，類(lèi)長(zhǎng)方形，外壁和側(cè)壁增厚，外壁被角質(zhì)層。中果皮果皮薄壁組織類(lèi)白色，圓形、卵圓形或不規(guī)則形，有的壁稍增厚，可見(jiàn)草酸鈣小柱晶，少見(jiàn)小方晶。內(nèi)果皮細(xì)胞為草酸鈣方晶層。胚乳細(xì)胞可見(jiàn)草酸鈣簇晶。見(jiàn)附圖1。

2.2 桂皮醛的含量測(cè)定[6]

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 取桂皮醛對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加甲醇制成每1ml含10μg的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備 取本品粉末（過(guò)三號(hào)篩）約0.25g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，稱(chēng)定重量，超聲處理（功率500W，頻率40kHz）15分鐘，放置過(guò)夜，同法超聲處理一次，再稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)。精密量取續(xù)濾液1ml，置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

附圖1 桂丁香粉末顯微特征圖

2.2.3 色譜條件 色譜柱為Capcell C18 柱(4.6mm×150mm，5μm)；流動(dòng)相為乙腈-水（33∶67）；檢測(cè)波長(zhǎng)為290nm，柱溫為30℃；流速為1.0ml/mlm；進(jìn)樣量10μl。在該色譜條件下，桂皮醛可達(dá)到基線分離，其他成分對(duì)測(cè)定無(wú)干擾。見(jiàn)附圖2。

附圖2 桂丁香高效液相色譜圖。A供試品溶液；B對(duì)照品溶液；C空白溶劑

2.2.4 線性關(guān)系考察 精密吸取對(duì)照品溶液（10μg·mL-1）1μl、2μl、4μl、8μl、10μl、20μl、30μl，40μl注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積。以峰面積Y為縱坐標(biāo)，對(duì)照品的質(zhì)量X（μg）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算得回歸方程：Y=10×103X+9.3，R=0.9999（n=8）；桂皮醛在0.01μg～0.40μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.2.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液（10μg·mL-1），連續(xù)進(jìn)樣6次，對(duì)照品溶液峰面積的RSD為0.2%，結(jié)果表明精密度良好。

2.2.6 穩(wěn)定性考察 取同一供試品溶液，分別于0，2，4，8，12，18，24h分別進(jìn)樣10μl，按上述條件測(cè)定峰面積，RSD為0.5%（n=5），結(jié)果表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱(chēng)取同一樣品，按供試品溶液制備方法平行制備6份，依次測(cè)定，計(jì)算得桂皮醛的含量，RSD為1.2%，結(jié)果表明重復(fù)性良好。

2.2.8 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱(chēng)取已知含量的樣品（含量5.3%）6份，每份0.125g，分別精密加入1.08mg·mL-1的對(duì)照品溶液6.1ml（6.6mg），依法測(cè)定供試品溶液。分別吸取上述溶液各10μl測(cè)定回收率，平均回收率為99.2%（RSD%=0.60%）。

2.2.9 樣品測(cè)定及限度擬定 依2.2.3方法測(cè)定8批樣品，結(jié)果按干燥品計(jì)算，含桂皮醛分別為5.4%，5.3%，5.5%，4.7%，5.8%，5.9%，4.0%，2.8%，平均4.9%，以平均值80%為限，故擬定本品按干燥品計(jì)算，含桂皮醛（C9H8O）不得少于3.9%。

3 討論

3.1 顯微鑒別中，果實(shí)橫切面觀察：中果皮薄壁細(xì)胞可見(jiàn)草酸鈣小柱晶，少見(jiàn)小方晶；內(nèi)果皮細(xì)胞為草酸鈣方晶層；胚乳細(xì)胞中可見(jiàn)草酸鈣簇晶，由于果實(shí)橫切面不易操作，故只在粉末鑒定中注明有關(guān)特征及特征存在的部位。

3.2 桂皮醛的含量測(cè)定，供試品的制備，比較了乙醇、甲醇兩種溶劑，結(jié)果甲醇提取效果最好。方法中浸漬過(guò)夜的目的：考慮到桂皮醛易揮發(fā)，隨著超聲時(shí)間的增加，水溫增加，桂皮醛易揮發(fā)，所以采取了兩次超聲法，同時(shí)，浸漬過(guò)夜能使溶液充分滲透到組織細(xì)胞中，利于成分的溶出，并比較了不同超聲時(shí)間（10min，15min，20min），最終采取了超聲處理15分鐘，放置過(guò)夜，再同法超聲處理一次的提取方法。