馮麗艷， 宋晶淼

大慶龍南醫(yī)院婦產(chǎn)科(黑龍江大慶 163453)

子癇前期是一種妊娠特異性綜合征，主要發(fā)生在妊娠中后期，其可導(dǎo)致嚴(yán)重的母胎并發(fā)癥，是導(dǎo)致孕產(chǎn)婦和胎兒死亡的重要風(fēng)險(xiǎn)因素[1]。子癇前期的臨床癥狀包括高血壓、蛋白尿和水腫，但其具體的病因和發(fā)病機(jī)制尚不完全清楚[2]。不少研究[3]表明了免疫耐受失衡學(xué)說是導(dǎo)致子癇前期發(fā)生的重要原因，特別是母胎界面的免疫耐受的失衡，引起的激活的免疫細(xì)胞比例發(fā)生改變，導(dǎo)致了滋養(yǎng)細(xì)胞受損、炎癥反應(yīng)失衡，是導(dǎo)致子癇前期的發(fā)生重要因素。研究[3]表明，子癇前期輔助性T 細(xì)胞1(T helper cell 1, Th1)Th1、Th2細(xì)胞免疫中并非由母體對(duì)胚胎的Th2介導(dǎo)的體液免疫為主，而是由Th1介導(dǎo)的細(xì)胞免疫發(fā)揮作用，導(dǎo)致滋養(yǎng)細(xì)胞加重免疫受損。Th1主要產(chǎn)生的細(xì)胞因子包括白細(xì)胞介素(interleukin，IL)-12、IL-6、IL-8、IL-12、γ干擾素(interferon-γ,IFN-γ)以及腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor，TNF-α)[4]。Th17是一種新發(fā)現(xiàn)的能分泌IL-17的CD4+T淋巴細(xì)胞亞群，在自身免疫性疾病和機(jī)體防御反應(yīng)中具有重要的意義[5]。研究[6]表明，這種細(xì)胞因子的檢測通過Th1/Th17的比例反應(yīng)機(jī)體多種疾病的慢性炎癥的情況，包括癌癥、自身免疫性疾病和過敏性疾病，且較Th2/調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(regulatory T cell, Treg)更能反映病情的變化和嚴(yán)重程度。Th17細(xì)胞的生長和分化由轉(zhuǎn)化生長因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)和IL-6或IL-21的組合介導(dǎo)。此外，IL-23被認(rèn)為是誘導(dǎo)Th17的重要細(xì)胞因子。最近研究[7]證明了Th17介導(dǎo)的免疫反應(yīng)在子癇前期中顯著上調(diào)，且Treg細(xì)胞的數(shù)量和功能可能會(huì)抑制Th17介導(dǎo)介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)。但目前對(duì)于Th17相關(guān)細(xì)胞因子的變化在子癇前期的發(fā)病機(jī)制中仍未明確，本研究擬通過檢測子癇前期孕婦血清中IL-17與IL-21、IL-23和TGF-β的表達(dá)水平，評(píng)估子癇前期患者的Th17變化水平與臨床的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2016年6月至2018年5月于本院就診的子癇前期孕婦共50例，納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)符合子癇前期的診斷標(biāo)準(zhǔn)[8]；(2)年齡19～40歲；(3)獲得患者知情同意并簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并孕前慢性高血壓、糖尿病、心臟系統(tǒng)疾病的孕婦；(2)合并免疫系統(tǒng)疾病的患者；(3)合并其他產(chǎn)科并發(fā)癥的患者；(4)慢性肝腎功能不全的患者；(5)合并惡性腫瘤患者；(6)合并慢性血管病變或炎癥疾病的患者。除50例子癇前期孕婦外(子癇組)，選取同期于本院進(jìn)行孕檢的孕婦(健康組)和進(jìn)行體檢的健康女性(對(duì)照組)各40例作為對(duì)照，本研究獲得醫(yī)院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。

1.2 檢測指標(biāo)和方法 所有孕婦和受試者于清晨抽靜脈血，血液樣本用真空采血管采集，進(jìn)行3 000 r/min離心后，取血清樣本在-80℃冰箱進(jìn)型保存以備檢測。所有參與者血清中的IL-17、IL-21、IL-23和TGF-β的含量采用酶聯(lián)免疫吸附定量試驗(yàn)法(ELISA)進(jìn)行檢測，由本研究組同一技術(shù)人員使用ELISA試劑盒完成，試劑盒均購自R&D SYSTEMS(Minneapolis, MN,USA)。具體操作步驟為將標(biāo)準(zhǔn)品在試劑稀釋液中連續(xù)稀釋，以產(chǎn)生7個(gè)點(diǎn)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。將預(yù)混合的標(biāo)準(zhǔn)品或血清樣品加入每個(gè)孔中，并在4℃下孵育過夜。經(jīng)過孵育和洗滌后，將預(yù)混合的檢測抗體加入每個(gè)孔中，并將板在室溫下溫育2 h，經(jīng)洗滌后，將辣根過氧化物酶HRP標(biāo)記鏈霉親和素加入各孔中。在室溫下20 min后終止溫育。然后，向每個(gè)孔中加入終止溶液，并使用設(shè)定為450 nm的酶標(biāo)儀立即測定每個(gè)孔的光密度，得到血清IL-17、IL-21、IL-23和TGF-β含量結(jié)果以pg/mL表示。

1.3 臨床指標(biāo) 記錄所有孕婦和健康參與者的基本信息，包括年齡、孕周、孕前體質(zhì)指數(shù)(BMI)、抽血時(shí)BMI、初產(chǎn)婦的比例，對(duì)比3組婦女的收縮壓和舒張壓、血常規(guī)白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC)，記錄子癇組患者的24 h尿蛋白定量。根據(jù)《妊娠期高血壓疾病診治指南》進(jìn)一步對(duì)50例子癇前期患者分為輕度子病前期(輕度組)、重度子病前期 (重度組)。

2 結(jié)果

2.1 一般資料對(duì)比 3組婦女年齡對(duì)比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，其中子癇組與健康組孕婦的孕周、孕前和抽血時(shí)的BMI及初產(chǎn)婦的比例對(duì)比差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表1。

項(xiàng)目例數(shù)年齡(歲)孕周(周)BMI(kg/m2)孕前抽血時(shí)初產(chǎn)婦[例(%)]子癇組5027.4±3.232.6±4.321.7±1.527.2±2.6?39(78.0)健康組4026.9±4.331.7±3.121.3±1.827.0±2.4?35(87.5)對(duì)照組4026.4±4.0--22.1±1.4-t/2值0.8511.1121.1506.6210.832P值0.5240.2690.253<0.0010.362

*與對(duì)照組比較P<0.05

2.2 3組的血壓及WBC比較 子癇組的收縮壓、舒張壓和WBC水平均顯著高于健康組和對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，子癇組孕婦的24 h尿蛋白定量為(1 462±254)mg。見表2。

項(xiàng)目例數(shù)收縮壓(mmHg)舒張壓(mmHg)WBC(×109·L-1)24 h尿蛋白(mg)子癇組50155±1292±14 9.8±2.31 462±254健康組40116±15?76±10?8.6±1.8?-對(duì)照組40114±13?80±12?8.2±1.6?-F值11.5619.7274.294-P值<0.001<0.0010.004-

*與子癇組比較P<0.05

2.3 3組的血清IL-17、IL-21、IL-23和TGF-β含量對(duì)比 3組婦女的血清IL-17、IL-21、IL-23和TGF-β含量對(duì)比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，其中子癇組的血清IL-17、IL-21和TGF-β水平顯著高于健康組和對(duì)照組(P<0.05)，健康組和對(duì)照組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；子癇組的血清IL-23水平顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，與健康組對(duì)比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表3。

項(xiàng)目例數(shù)IL-17 IL-21 IL-23TGF-β子癇組50534±10274±13717±119417±76健康組40403±94?61±11?682±102206±84?對(duì)照組40376±89?56±17?952±135?197±68?F值8.9625.5677.17313.517P值<0.001<0.001<0.001<0.001

*與子癇組比較P<0.05

2.4 不同嚴(yán)重程度子癇前期孕婦血清IL-17、IL-21、IL-23和TGF-β含量的對(duì)比 重度組的血清IL-17和TGF-β水平顯著高于輕度組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而兩組的血清IL-21和IL-23水平對(duì)比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表4。

項(xiàng)目例數(shù)IL-17 IL-21 IL-23TGF-β輕度組31496±9873±10709±134372±86重度組19596±11776±14730±114489±95t值3.2520.8830.5684.488P值0.0020.3820.573<0.001

2.5 血清IL-17與IL-21、IL-23和TGF-β含量的相關(guān)性分析 50例子癇前期孕婦的血清IL-17與TGF-β含量呈顯著的正相關(guān)(r=0.576，P<0.001)，而血清IL-17與IL-21、IL-23無相關(guān)性(r=0.081,P=0.344;r=0.105,P=0.216)。

3 討論

近年來研究[9]表明子癇前期被認(rèn)為是母體和胎盤間的免疫失衡介導(dǎo)的免疫反應(yīng)，其具體與母胎界面免疫耐受失衡有關(guān)，特別是免疫應(yīng)答所介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)。既往主要的觀點(diǎn)認(rèn)為這種炎癥被母體Th1/Th2的失衡所介導(dǎo)[10]，而在本項(xiàng)研究中，通過評(píng)估子癇前期患者血清的IL-17、IL-21、IL-23和TGF-β表達(dá)水平，并與健康的孕婦和女性進(jìn)行比較，本研究的結(jié)果顯示子癇前期孕婦其血清IL-17水平顯著高于健康孕婦和普通的健康女性，表明Th17這種CD4+T淋巴細(xì)胞亞群參與了子癇前期疾病的發(fā)生，同時(shí)，進(jìn)一步對(duì)比輕度組和重度組子癇前期孕婦的血清IL-17水平，結(jié)果顯示重度組子癇前期孕婦顯著升高，進(jìn)一步表明了Th17的功能與子癇前期的病情嚴(yán)重程度密切相關(guān)。進(jìn)一步分析IL-17與IL-21、IL-23和TGF-β的關(guān)系顯示了IL-17與TGF-β呈顯著的正相關(guān)，表明了子癇前期孕婦中Th17的功能主要由TGF-β進(jìn)行介導(dǎo)。

目前針對(duì)子癇前期孕婦Th17的功能研究結(jié)果仍然具有一定的爭議，既往有國外研究[11]顯示子癇前期婦女和正常孕婦血清的IL-17水平之間沒有顯著差異。國內(nèi)有研究[12]指出，子癇前期孕婦血清IL-17水平顯著高于健康孕婦，而在本研究中，擬通過ELISA的方法評(píng)估子癇前期和健康孕婦的血清IL-17，同時(shí)與年齡相近的健康非懷孕女性進(jìn)行匹配后對(duì)比發(fā)現(xiàn)，子癇前期孕婦血清IL-17水平仍顯著升高，且與重度子癇前期孕婦升高更加顯著。因此，本研究結(jié)果確認(rèn)了Th17在子癇前期其病情中的重要作用。這項(xiàng)血清學(xué)的研究也從側(cè)面確認(rèn)了既往研究[13]中采用流式細(xì)胞術(shù)評(píng)估外周血Th17細(xì)胞的比例在子癇前期孕婦中顯著升高，同時(shí)也與子癇前期孕婦中蛻膜組織中IL-17的mRNA水平表達(dá)升高相一致[14]。研究[15]顯示，在子癇前期中檢測到的IL-17循環(huán)水平增加可能參與了廣泛性血管內(nèi)炎癥反應(yīng)的病情進(jìn)展，表明IL-17具有作為潛在診斷子癇前期的血清學(xué)指標(biāo)。IL-17的升高可促進(jìn)其他細(xì)胞因子升高，包括多種趨化因子，炎癥效應(yīng)因子和細(xì)胞因子的表達(dá)抗，導(dǎo)致共同形成促炎的狀態(tài)[16]。而既往的研究顯示，子癇前期的孕婦血液中多種促炎癥相關(guān)的細(xì)胞因子升高，因此，IL-17的升高可能參與了子癇前期孕婦中的炎癥進(jìn)程和反應(yīng)[17]。

本研究中，子癇前期孕婦的TGF-β水平顯著高于健康的孕婦和非孕健康女性，該結(jié)果與既往研究相一致，同時(shí)，子癇前期孕婦血清TGF-β水平與血壓呈正相關(guān)[18]。Th17細(xì)胞的誘導(dǎo)和分化需要TGF-β因子的刺激，這可能是子癇前期患者血清中TGF-β水平升高與IL-17血清水平呈正相關(guān)的具體機(jī)制和原因。而本研究顯示雖然子癇組的血清IL-21顯著升高，但其與病情嚴(yán)重程度沒有明顯的相關(guān)性，雖然在某些疾病中IL-21 亦能誘導(dǎo)在CD4+T 細(xì)胞中的產(chǎn)生IL-17[19]，但本研究結(jié)果顯示IL-21并未在子癇前期中對(duì)Th17細(xì)胞發(fā)揮顯著的調(diào)控作用。而雖然子癇前期組和健康孕婦組的IL-23血清水平均顯著低于健康女性，既往研究[20]顯示IL-23血清水平的下降可能是在懷孕由于Th2細(xì)胞的主導(dǎo)發(fā)揮功能進(jìn)行的反應(yīng)，并未參與子癇前期孕婦病情的發(fā)生和進(jìn)展。

綜上所述，Th17參與免疫應(yīng)答的機(jī)制在子癇前期的孕婦發(fā)病和病情進(jìn)展中具有重要作用，血清IL-17和TGF-β呈顯著的正相關(guān)，表明TGF-β升高可能是介導(dǎo)Th17活化參與子癇前期孕婦的炎癥反應(yīng)的重要原因。