張卓 楊巍巍 顧博文 趙映紅

摘 要：本研究采用高效液相色譜法（HPLC法）檢測(cè)了8種市售碳酸飲料中山梨酸的含量。結(jié)果表明：碳酸飲料中的山梨酸含量在0.134～0.249 g·kg-1范圍內(nèi)，線性關(guān)系（r2>0.999 9），平均回收率為100.41%～103.36%，RSD為1.08%。用該方法測(cè)定的飲料中的山梨酸，均未超過(guò)最大添加量。該方法精密度、重復(fù)性和準(zhǔn)確度均良好，可用于碳酸飲料中山梨酸含量的測(cè)定。

關(guān)鍵詞：山梨酸;飲料;高效液相色譜法

Abstract：The content of sorbic acid in 8 kinds of carbonated beverages was determined by high performance liquid chromatography （HPLC）. The results showed： the content of sorbic acid in carbonated beverages ranged from 0.134 to

0.249 g·kg-1. The linear relationship （r2>0.999 9）， and the recoveries were 100.41%～103.36%， with RSD was 1.08%.The sorbic acid determined by this method did not exceed the maximum addition. The method has good precision， repeatability and accuracy， which can be used for detection of content of sorbic acid in carbonated beverages.

Key words：Sorbic acid; Beverages; High performance liquid chromatography

中圖分類(lèi)號(hào)：O657.72;TS275.3

食品添加劑是為改善食品色、香、味等品質(zhì)，以及為滿足防腐和加工工藝的需要而加入食品中的人工合成或天然物質(zhì)[1]。目前我國(guó)食品添加劑有22個(gè)類(lèi)別，2 000多個(gè)品種，其中防腐劑和甜味劑在目前的食品加工過(guò)程中廣泛使用[2]。山梨酸有廣泛的抗菌活性，因此常作為防腐劑添加到食品中，以滿足保藏需要。山梨酸在一定范圍劑量?jī)?nèi)，對(duì)人體無(wú)害，但如果濫用，就會(huì)有一定的毒害作用。在GB 2760-2014《食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》中，對(duì)最大使用量有明確的規(guī)定，飲料類(lèi)食品中，山梨酸計(jì)最大使用量為0.5 g·kg-1。本研究利用高效液相色譜法對(duì)8種碳酸飲料中的山梨酸含量進(jìn)行測(cè)定。

1 材料與方法

島津LC-16高效液相色譜儀（紫外檢測(cè)器，自動(dòng)進(jìn)樣器，柱溫箱，色譜工作站）;超聲波清洗器（昆山市儀器公司）;天平（METTLER TOLEDO）;0.22 μm水系微孔濾膜。

甲醇（色譜純 Fisher Scientific）;乙二胺（色譜純macklin）;山梨酸標(biāo)準(zhǔn)品（Dr.Ehrenstorfer）;碳酸飲料樣品（元?dú)馍制裢咚蛊?，怡泉等，均?gòu)于超市）。

2 方法

2.1 流動(dòng)相與標(biāo)準(zhǔn)液的配制

2.1.1 乙酸銨溶液配制

準(zhǔn)確稱取3.11 g乙酸銨，加入適量水溶解，用水定容至2 000 mL，經(jīng)0.22 μm水系微孔濾膜抽濾。

2.1.2 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的配制

準(zhǔn)確稱取0.134 5 g山梨酸標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇溶解并定容至100 mL。其山梨酸含量為1 345 mg·L-1。

2.1.3 標(biāo)準(zhǔn)中間液

準(zhǔn)確吸取山梨酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液10.0 mL于50 mL容量瓶中，用水定容。其山梨酸含量為269 mg·L-1。

2.1.4 標(biāo)準(zhǔn)使用液

分別準(zhǔn)確吸取山梨酸標(biāo)準(zhǔn)中間液0、0.05、0.25、0.50、1.00 mL及2.50 mL，用水定容至10 mL。其山梨酸含量為0、1.345、6.725、13.45、26.9 mg·L-1及67.25 mg·L-1，作為標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。

2.2 樣品前處理

準(zhǔn)確稱取市售的8種碳酸飲料2 g，超聲20 min，至50 mL容量瓶中，定容至刻度，經(jīng)0.22 μm濾膜過(guò)濾，濾液待液相色譜測(cè)定。

2.3 色譜條件

色譜柱：C18柱（柱長(zhǎng)250 mm，內(nèi)徑4.6 mm，粒徑5 μm）;流動(dòng)相：甲醇-乙酸銨溶液（體積比為5∶95）;流速：1.0 mL·min-1;柱溫：30 ℃;檢測(cè)波長(zhǎng)：230 nm;進(jìn)樣體積：10 μL;用保留時(shí)間定性，外標(biāo)法定量。

3 結(jié)果與分析

3.1 系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)

在2.3的色譜條件下，用26.9 mg·L-1的山梨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣，記錄色譜圖，見(jiàn)圖1。如圖所示，理論塔板數(shù)大于5 000。

3.2 精密度實(shí)驗(yàn)

在2.3的色譜條件下，用26.9 mg·L-1的山梨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣，進(jìn)行精密度試驗(yàn)，進(jìn)行6次重復(fù)測(cè)定，記錄峰面積，計(jì)算RSD。見(jiàn)表1。

3.3 線性范圍與檢測(cè)限

在2.3的色譜條件下，對(duì)山梨酸標(biāo)準(zhǔn)使用液系列進(jìn)行測(cè)定。以標(biāo)準(zhǔn)品濃度x（mg·L-1）為橫坐標(biāo)，峰面積y為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，山梨酸在0～67.25 mg·L-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。以3倍信噪比、10倍信噪比計(jì)算檢出限、定量限，回歸方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限及定量限見(jiàn)表2，標(biāo)準(zhǔn)曲線見(jiàn)圖2。

3.4 加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)

稱取一定量的碳酸飲料3份，加入2.1.3制備的標(biāo)準(zhǔn)樣品中間液，將其稀釋成濃度為6.725、13.45、

26.9 mg·L-1的溶液在2.3的色譜條件下測(cè)定并計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表3。

3.5 樣品測(cè)定

取市售的8種碳酸飲料，按照2.2的方法和2.3的色譜條件進(jìn)行分析，得到8種樣品色譜圖，記錄峰面積，并計(jì)算樣品中山梨酸含量，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表4。

4 結(jié)論

通過(guò)實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，被檢測(cè)的8種市售碳酸飲料中的山梨酸含量均未超出國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)。該方法靈敏度高，操作簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確，有良好的線性范圍和穩(wěn)定性。

參考文獻(xiàn)：

[1]闞建全，龐 杰，劉 玲，等.食品化學(xué)[M].第3版.北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，2016.

[2]宗珊盈，李 超，張 娟，等.超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定食品中7中防腐劑和4種甜味劑[J].中國(guó)食品添加劑，2016（6）：195-199.