王詩琪 王占娣

摘要 ?[目的]評(píng)價(jià)石斛提取物測(cè)定斜紋夜蛾幼蟲行為的調(diào)節(jié)作用。[方法]采用熱回流法，根據(jù)溶劑的極性由小到大依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、無水乙醇、蒸餾水對(duì)石斛進(jìn)行提取，利用Y形嗅覺儀測(cè)定石斛提取液對(duì)斜紋夜蛾4～5齡幼蟲的引誘效果。[結(jié)果]石斛的石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、無水乙醇、蒸餾水提取液中均存在有對(duì)斜紋夜蛾幼蟲具有明顯引誘效果的活性成分。[結(jié)論]石斛提取物可用于斜紋夜蛾綠色防控產(chǎn)品的開發(fā)。

關(guān)鍵詞石斛;斜紋夜蛾;植物源;引誘

中圖分類號(hào)：S433.4文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：2095-3305（2019）03-010-02

DOI： 10.19383/j.cnki.nyzhyj.2019.03.005

斜紋夜蛾[Spodoptera litura（Fa？鄄bricius）]屬鱗翅目夜蛾科遷飛性害蟲，其寄主范圍廣，主要取食十字花科植物，可嚴(yán)重危害植物，導(dǎo)致蔬菜的產(chǎn)量和品質(zhì)下降。目前斜紋夜蛾的防治方法主要為農(nóng)業(yè)防治、化學(xué)防治、物理防治等。其中，農(nóng)業(yè)防治主要措施為人工鏟除雜草和人工捕蟲，這些方式需要耗費(fèi)大量的人力和財(cái)力[1];化學(xué)防治易在農(nóng)作物上殘留大量的農(nóng)藥，使昆蟲產(chǎn)生抗性，污染環(huán)境[2];物理防治的效果不理想[3]。采用昆蟲性信息素進(jìn)行害蟲監(jiān)測(cè)和無公害防治具有活性高、特異性強(qiáng)、無毒、無污染、不殺傷天敵、使用簡便、成本低廉等優(yōu)點(diǎn)[4]，但存在合成成本高、誘集雄蟲量不足的問題[5]。從天然產(chǎn)物中尋找替代性信息素的物質(zhì)，成為斜紋夜蛾綠色防治研究的熱點(diǎn)。目前研究發(fā)現(xiàn)，蓖麻、番茄、白菜和薄荷[6]等植物對(duì)斜紋夜蛾均具有一定的誘集作用。這些植物都是斜紋夜蛾的寄主，由此可知，寄主植物中存在有防治斜紋夜蛾的活性物質(zhì)。

鐵皮石斛（Dendrobium officinale）屬蘭科，表皮呈鐵綠色，是多年生附生草本植物，二級(jí)保護(hù)植物。鐵皮石斛是珍貴中藥石斛品種，藥食同源的滋陰補(bǔ)品。近年來，鐵皮石斛在云南種植面積逐漸增加，斜紋夜蛾也逐漸成為危害石斛的主要害蟲[7]。現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)石斛在醫(yī)藥行業(yè)應(yīng)用較廣泛，其提取物對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、黏質(zhì)沙雷氏菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌、小腸結(jié)腸炎耶爾森菌及沙門菌具有明顯的抑制效果[8-10]，但其在農(nóng)業(yè)害蟲防治方面的研究較少。因此，筆者選取石斛作為供試材料，采用5種溶劑提取其活性成分，評(píng)價(jià)提取液對(duì)斜紋夜蛾4～5齡幼蟲行為的調(diào)節(jié)作用，為斜紋夜蛾綠色防控產(chǎn)品的開發(fā)奠定理論基礎(chǔ)。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

1.1.1供試?yán)ハx斜紋夜蛾飼養(yǎng)條件為溫度（27±1）℃，相對(duì)濕度為60%～70%，光周期為L∶D=12∶12（光12 h∶暗12 h）。供試?yán)ハx為4～5齡斜紋夜蛾幼蟲。

1.1.2溶劑與儀器供試溶劑有石油醚、無水乙醇、乙酸乙酯、二氯甲烷、蒸餾水。供試儀器有大氣采樣儀、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、索氏提取器、Y形嗅覺儀。

1.1.3供試植物石斛購于市場(chǎng)，室內(nèi)盆栽1月以上，剪掉地上部分，自然晾干，備用。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1提取液的制備采用熱回流法，利用索氏提取器，按照極性由小到大依次采用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、無水乙醇和蒸餾水提取石斛中的活性成分，藥液比為1∶10。提取液利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，減壓濃縮至10 ml，濃縮液作為母液，用相應(yīng)的試劑分別稀釋0倍（母液）、1倍、2倍、3倍、5倍，4℃冰箱保存，備用。

1.2.2風(fēng)洞試驗(yàn)利用Y形嗅覺儀，直徑為1.3 cm，臂長為10 cm。以不同稀釋倍數(shù)的溶液為處理組，相應(yīng)的提取溶劑為對(duì)照（CK），分別取20 μl，滴加到直徑為0.8 cm的圓形濾紙片中，自然揮干溶劑，分別放在Y形管的2個(gè)支臂內(nèi)。選取饑餓6 h以上的4～5齡的活躍幼蟲，放入Y形管的主管內(nèi)。設(shè)定風(fēng)速為5 cm/s，20 min后記錄2個(gè)支管里面幼蟲的數(shù)量，每個(gè)處理4次重復(fù)。

1.2.3數(shù)據(jù)處理 ? 試驗(yàn)數(shù)據(jù)用SAS 8.0軟件進(jìn)行分析，用x2分析空白組與對(duì)照組引誘效果，用Duncan的ANOVA比較不同處理間是否具有顯著差異，評(píng)價(jià)不同處理引誘效果。

反應(yīng)率（%）=處理組蟲量或CK組蟲量/20×100（1）

2結(jié)果與分析

以石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、無水乙醇、蒸餾水為試劑，提取石斛中的活性物質(zhì)，采用Y形嗅覺儀評(píng)價(jià)提取液對(duì)斜紋夜蛾4～5齡幼蟲行為的調(diào)節(jié)作用。結(jié)果顯示，以石油醚為提取試劑，提取液稀釋1倍和3倍時(shí)，處理組斜紋夜蛾幼蟲的數(shù)量明顯高于CK組，其中，提取液稀釋1倍時(shí)，處理組與CK組間存在極顯著性差異，表明石斛的石油醚提取液稀釋1倍和3倍對(duì)斜紋夜蛾幼蟲具有明顯的引誘效果（圖1A）。

采用二氯甲烷提取石斛，以其母液及其3倍稀釋液為處理時(shí)，斜紋夜蛾幼蟲數(shù)量與CK組存在顯著性差異，特別是滴加母液的處理組與CK組間存在極顯著性差異，其他測(cè)試濃度處理組與CK組間幼蟲數(shù)量差異不顯著（圖1B）。表明采用二氯甲烷提取石斛，其提取液母液及其3倍稀釋液對(duì)斜紋夜蛾幼蟲具有明顯的引誘效果，其中，母液對(duì)斜紋夜蛾的引誘效果最好。

以乙酸乙酯為提取試劑，其稀釋倍數(shù)在0～3倍范圍內(nèi)，斜紋夜蛾幼蟲的數(shù)量隨著稀釋倍數(shù)的增加而增加， 其稀釋倍數(shù)為1倍和3倍時(shí)，處理組斜紋夜蛾幼蟲的數(shù)量明顯高于CK組。表明乙酸乙酯提取液中存在對(duì)斜紋夜蛾有引誘效果的活性成分，其提取液稀釋3倍對(duì)斜紋夜蛾幼蟲的引誘效果最好（圖1C）。

隨著無水乙醇提取液稀釋倍數(shù)的增加，處理組斜紋夜蛾蟲口數(shù)量增加。提取液稀釋2倍和3倍時(shí)，處理組蟲口數(shù)量與CK組間存在極顯著性差異（圖1D）。表明石斛的無水乙醇提取液對(duì)斜紋夜蛾4～5齡幼蟲具有引誘效果。

以水為提取試劑，提取液稀釋0～3倍時(shí)，斜紋夜蛾幼蟲的數(shù)量隨著提液稀釋倍數(shù)的降低而增加。提取液稀釋0倍時(shí)，處理組蟲口數(shù)量明顯高于CK組（圖1E）。表明石斛的水提取液母液對(duì)斜紋夜蛾幼蟲具有明顯的引誘效果。