廣東省陽江市婦幼保健院（529500）馮王富 馮梅華 佘意貴

肺炎支原體肺炎（mycoplasma pneumonia）是臨床上較為常見的一種非典型肺炎，其病原體為肺炎支原體，好發(fā)于兒童和青少年，癥狀以頑固性咳嗽為主要特征，其病理表現(xiàn)以間質(zhì)性肺炎為主[1]。由于支原體肺炎的癥狀和體征與普通細(xì)菌性肺炎相似，因而常導(dǎo)致誤診，造成抗生素的使用不當(dāng)甚至濫用，使患者癥狀反復(fù)遷延不愈，甚至誘發(fā)哮喘等并發(fā)癥[1]。因此近年來對(duì)支原體肺炎的病原學(xué)檢測(cè)研究逐漸增多，其中酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）、被動(dòng)凝集法和膠體金法等血清學(xué)抗體檢測(cè)應(yīng)用較多，而后兩者因具有快速簡(jiǎn)便易操作的優(yōu)點(diǎn)因而應(yīng)用廣泛[2]。本研究對(duì)比了應(yīng)用膠體金法與被動(dòng)凝集法在肺炎支原體檢測(cè)中的優(yōu)劣差異，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料方法

1.1 一般材料 選取我院2015年3月～2017年10月就診的肺炎患者220例，其中男122例，女98例，年齡5～12歲，平均(8.38士2.77)歲；病程6～18d，平均(12.68士5.39)d，體重指數(shù)（BMI）平均（19.11±2.06）kg/m2，所有患者入院后經(jīng)支原體（MP）快速液體培養(yǎng)后證實(shí)其中屬于肺炎支原體肺炎患者110例，非支原體肺炎患者110例。本研究得到醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)；患者及其家屬簽署知情同意。

1.2 檢測(cè)方法 所有患者采集空腹靜脈血以備檢測(cè)。膠體金法：采用肺炎支原體抗體檢測(cè)試劑盒（膠體金法）（上海古朵生物科技有限公司，24人份/盒）。檢測(cè)方法：①滴入二滴試劑Ⅰ于反應(yīng)板中央孔中，待完全滲入；②滴入100μl血清于反應(yīng)板孔中，待完全滲入；③滴加三滴試劑Ⅱ于反應(yīng)板孔中，待完全滲入；滲入三滴試劑Ⅰ于反應(yīng)板孔中，待完全滲入。結(jié)果：反應(yīng)板孔中C端出現(xiàn)紅色圓斑，T端出現(xiàn)紅色圓斑，為肺炎支原體抗體陽性；反應(yīng)板孔中C端出現(xiàn)紅色圓斑，T端不出現(xiàn)紅色圓斑為肺炎支原體抗體陰性。反應(yīng)板孔中C端不出現(xiàn)紅色圓斑，或C端、T端均不出現(xiàn)紅色圓斑，則試劑盒失效[3]。

附表1 兩種檢測(cè)方法靈敏度比較[例(%)]

附表2 兩種檢測(cè)方法特異度比較[例(%)]

被動(dòng)凝集法：采用肺炎支原體抗體診斷試劑盒（賽樂迪亞-麥可II，富士瑞必歐株式會(huì)社，25人份/盒），操作方法嚴(yán)格按說明書進(jìn)行，結(jié)果判定：顆粒呈紐扣狀聚集，呈現(xiàn)出外周邊緣均勻且平滑的圓形為陰性；粒子形成小環(huán)狀，呈現(xiàn)出外周邊緣均勻且平滑的圓形為（±）；粒子環(huán)明顯增大，其外周邊緣不均勻且雜亂地凝集在周圍，為（+）；凝集粒子在底部整體上呈膜狀延展為（++）[3]。

1.3 療效評(píng)價(jià) 記錄肺炎支原體肺炎患者在兩種檢測(cè)方法下陽性和陰性例數(shù)，則靈敏度=陽性數(shù)/總數(shù)×100%；記錄非肺炎支原體肺炎患者在兩種檢測(cè)方法下陽性和陰性數(shù)，則靈敏度=陰性數(shù)/總數(shù)×100%。采用約登指數(shù)評(píng)價(jià)診斷準(zhǔn)確率，約登指數(shù)=靈敏度+特異度-1[4]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 擬采用SPSS17.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料采用[例(%)]表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩種檢測(cè)方法靈敏度比較 在110例支原體肺炎患者中，膠體金法檢測(cè)的靈敏度為75.55%，被動(dòng)凝集法檢測(cè)的靈敏度為91.82%，膠體金法檢測(cè)靈敏度顯著低于被動(dòng)凝集法，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=11.73，P＜0.01)。見附表1。

2.2 兩種檢測(cè)方法特異度比較 在110例非支原體肺炎患者中，膠體金法檢測(cè)的特異度為70.9%，被動(dòng)凝集法檢測(cè)的靈敏度為83.64%，膠體金法檢測(cè)特異度顯著低于被動(dòng)凝集法，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=5.07.73，P=0.02)。見附表2。

2.3 兩種檢測(cè)方法約登指數(shù)比較依據(jù)上述兩表，膠體金法的靈敏度為74.55%，特異度為70.91%，則其約登指數(shù)為0.45；被動(dòng)凝集法的靈敏度為91.82%，特異度為83.64%，則其約登指數(shù)為0.75，被動(dòng)凝集法的約登指數(shù)高于膠體金法。

3 討論

肺炎支原體（MP）是支原體肺炎的主要病原體，也是呼吸道感染的常見病原體，MP感染與細(xì)菌病毒等因素感染引起的肺炎癥狀體征，在肺部影像學(xué)表現(xiàn)上都極為相似，難以鑒別診斷。因此實(shí)驗(yàn)室病原體檢測(cè)在支原體感染中極為重要。WHO推薦MP的分離培養(yǎng)為診斷的金標(biāo)準(zhǔn)[5]，但是實(shí)際應(yīng)用中該方法培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)，靈敏度較低，培養(yǎng)條件要求高，因而難以實(shí)踐運(yùn)用。研究表明抗MP-IgM是人體受支原體感染后的特異性抗體，因而通過實(shí)驗(yàn)室血清學(xué)檢測(cè)抗MP-IgM對(duì)于診斷MP感染具有重要意義，除了傳統(tǒng)的冷凝集試驗(yàn)方法外，近年來隨著對(duì)MP抗體的檢測(cè)方法研究的深入，諸如補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)、被動(dòng)顆粒凝集法、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)以及膠體金法等檢測(cè)方法逐漸運(yùn)用于臨床，效果良好。

膠體金法即金標(biāo)免疫斑點(diǎn)法（Dot Immungo Gold Method, DM）是應(yīng)用于各種病原體抗體檢測(cè)的一種新型的免疫標(biāo)記技術(shù)。膠體金是由氯金酸在還原劑的作用下聚合成一定大小的金顆粒，并由于靜電作用成為穩(wěn)定的膠體狀態(tài)，該膠體在弱堿環(huán)境下帶負(fù)電荷，可與蛋白質(zhì)分子正電荷基團(tuán)牢固結(jié)合，且不影響蛋白質(zhì)的生物特性；因而蛋白質(zhì)抗體即可被帶有顏色的膠體金顆粒標(biāo)記出來[6]。被動(dòng)凝集法的原理是將表面吸附有MP抗原的明膠顆粒替代由動(dòng)物紅細(xì)胞制成的致敏人工明膠顆粒，再與血清中存在的MP抗體在適宜的電解質(zhì)溶液條件發(fā)生特異性的凝集反應(yīng)，從而標(biāo)記處相應(yīng)的抗體[6]。

本研究表明：膠體金法檢測(cè)的靈敏度和特異度均顯著低于被動(dòng)凝集法；膠體金法檢測(cè)的約登指數(shù)也低于被動(dòng)凝集法，說明被動(dòng)凝集法較膠體金法具有更高的診斷準(zhǔn)確度。分析原因認(rèn)為：膠體金雖然在特定環(huán)境下可以結(jié)合抗體蛋白，但是難以保證對(duì)特定蛋白結(jié)合的特異性，因此其靈敏度和特異度均較低，且當(dāng)IgM含量較少時(shí)，檢測(cè)結(jié)果會(huì)出現(xiàn)假陰性。被動(dòng)凝集法采用診斷試劑盒直接檢測(cè)，操作簡(jiǎn)便迅速，結(jié)果判讀容易；其用帶有MP抗原的明膠顆粒替代動(dòng)物紅細(xì)胞所制的人工明膠顆粒，因而可以消除動(dòng)物紅細(xì)胞載體引起的非特異性凝集反應(yīng)，因此其特異性高，靈敏度也增高，此外血清MP抗體的滴度與患者病情呈正相關(guān)，因此更有助于提高診斷的準(zhǔn)確性。可見被動(dòng)凝集法檢測(cè)肺炎支原體感染，更為準(zhǔn)確可靠，這也與黎翠翠、李藹文等人的研究一致[7]。

綜上所述，被動(dòng)凝集法檢測(cè)患者血清支原體抗體的靈敏度和特異度都顯著高于膠體金法，其約登指數(shù)也高于膠體金法，具有較高的診斷準(zhǔn)確度，值得推廣應(yīng)用。