梁 剛 ，吳春紅 ，張 紅 ，張 丹 ，劉明華 △

（1.西南醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)院，四川 瀘州 646000； 2.西南醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，四川 瀘州 646000；3.成都大學(xué)，四川 成都 610106）

中藥全蝎味辛，性平，有息風(fēng)止痙、通絡(luò)止痛、攻毒散結(jié)等功效[1]?，F(xiàn)代藥理研究表明，全蝎不僅能抗炎、鎮(zhèn)痛[2]，還能抗癲癇[3]、抗凝、抗血栓[4]和抗腫瘤[5]等。全蝎應(yīng)用于臨床始見于《開寶本草》，距今已有千年歷史，用途十分廣泛，近年對(duì)其主要化學(xué)成分、藥理機(jī)制、配方組成等研究較多，但全蝎有一定毒性，而對(duì)全蝎最細(xì)粉的長期毒性研究極少。本研究中參照《中藥、天然藥物長期毒性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》（2005版）設(shè)計(jì)大鼠實(shí)驗(yàn)，觀察全蝎最細(xì)粉的長期毒性、劑量與毒性反應(yīng)的關(guān)系及靶器官是否受影響等，為臨床安全使用全蝎最細(xì)粉提供參考?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

動(dòng)物:SPF級(jí)SD大鼠88只，雌雄各半，體質(zhì)量120～140 g，由西南醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)XSCK（川）2013-17。實(shí)驗(yàn)前1周，SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物房內(nèi)適應(yīng)性飼養(yǎng)大鼠，在此期間記錄大鼠體質(zhì)量，觀察外觀體征和行為活動(dòng)變化。實(shí)驗(yàn)環(huán)境設(shè)施合格證號(hào)SCXK（川）2013-065，實(shí)驗(yàn)環(huán)境為SPF級(jí)。溫度為空調(diào)恒溫20～26℃，相對(duì)濕度為40% ～70%。

藥材:全蝎最細(xì)粉（瀘州百草堂中藥飲片有限公司，批號(hào)為140119，原產(chǎn)地河南），涼暗處干燥保存。

試藥:白蛋白（ALB）試劑盒（批號(hào)為 150915）、總蛋白（TP）試劑盒（批號(hào)為 150916）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）試劑盒（批號(hào)為 D1509023）、總膽紅素（TBil）試劑盒（批號(hào)為 D1507013）、肌酸激酶（CK）試劑盒（批號(hào)為D1501103）、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）試劑盒（批號(hào)為 D1507073）、三酰甘油（TG）試劑盒（批號(hào)為 150609）、堿性磷酸酶（ALP）試劑盒（批號(hào)為151008）、總膽固醇（TC）試劑盒（批號(hào)為 150416）、肌酐（CR）試劑盒（批號(hào)為 D1510033）、血糖（Glu）試劑盒（批號(hào)為 D1511053），均購自上海復(fù)星長征醫(yī)學(xué)科學(xué)有限公司；M-68FO染液（批號(hào)為 2015032102）、M-68FIV染液（批號(hào)為2015020201）、M-68FR 染液（批號(hào)為 2015060401）、稀釋液（批號(hào)為2015080404）、M-68LB溶血?jiǎng)ㄅ?hào)為2015091306）、M-68LD 溶血?jiǎng)ㄅ?hào)為 2015091406）、M-68 稀釋液（批號(hào)為 2015052004）、M-68LN（批號(hào)為2014102801）、M-68LH 溶血?jiǎng)ㄅ?hào)為 2015040104），均購自邁瑞＜南京＞生物技術(shù)有限公司。

1.2 方法

將88只SD大鼠隨機(jī)分為陰性對(duì)照組、低劑量組、中劑量組和高劑量組，各22只，雌雄各半。灌胃給藥，劑量分別為 0（予 0.9% 氯化鈉溶液），0.2，0.4，0.8 g ／（kg·d），相當(dāng)于臨床劑量 0 倍、10 倍、20 倍和 40 倍。給藥容積均為每100g體質(zhì)量1mL。每周給藥5d，每天1次，連續(xù)10周。每周稱體質(zhì)量1次，以此調(diào)整給藥劑量。大鼠在給藥期間自由飲食飲水，恢復(fù)期停止給藥，自由飲食、飲水，處死前12 h禁食不禁飲。經(jīng)股動(dòng)脈取血后處死大鼠，稱定相關(guān)組織器官質(zhì)量并進(jìn)行病理檢驗(yàn)。

1.3 觀測指標(biāo)

一般觀測:給藥后每周稱定大鼠體質(zhì)量，每天觀察其飲食飲水、行為活動(dòng)、體表黏膜和皮毛、大小便情況和精神狀態(tài)等行為活動(dòng)和生理指標(biāo)。

血液學(xué)指標(biāo)和血生化指標(biāo):分別在給藥4周、10周及停藥4周后檢測。血液學(xué)指標(biāo):白細(xì)胞計(jì)數(shù)（WBC）、中性粒細(xì)胞百分比（NEUT%）、淋巴細(xì)胞絕對(duì)值（LYMPH）、單核細(xì)胞百分比（MONO%）、淋巴細(xì)胞百分比（LYMPH%）、紅細(xì)胞數(shù)（RBC）、血紅蛋白量（HGB）、紅細(xì)胞比容（HCT）、平均紅細(xì)胞體積（MCV）、平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度（MCHC）、平均紅細(xì)胞血紅蛋白量（MCH）、紅細(xì)胞分布寬度（SD）、血小板計(jì)數(shù)（PLT）、血小板平均體積（MPV）、血小板壓積（PCT）、血小板分布寬度（PDW）。血生化指標(biāo):TP，ALB，ALT，AST，TBil，TG，TC，CK，CR，尿素氮（BUN）、Glu、鈉（Na）、鉀（K）、氯（Cl）。

系統(tǒng)尸體解剖和組織病理學(xué)檢查:停藥4周后將大鼠麻醉，稱質(zhì)量，解剖，經(jīng)股動(dòng)脈取血，對(duì)大腦、甲狀腺、心臟、肺臟、胸腺、肝臟、脾臟、腎臟、腎上腺、卵巢、子宮、睪丸、附睪等臟器進(jìn)行稱質(zhì)量，并計(jì)算臟器系數(shù)（臟器系數(shù)=臟器質(zhì)量／體質(zhì)量×100%），最后進(jìn)行組織病理學(xué)檢查，觀察臟器病理變化。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析。計(jì)量資料以表示，行t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 動(dòng)物死亡情況

給藥后第25，51日，高劑量組大鼠死亡2只；給藥后第43，59日，中劑量組大鼠死亡2只；給藥后第58日，低劑量組大鼠死亡1只。經(jīng)尸檢，大鼠的大腦、心、肺、肝、脾、腎等臟器均未見明顯異常。

2.2 一般生理指標(biāo)比較

與陰性對(duì)照組比較，各給藥組雄鼠體質(zhì)量增長緩慢，雌鼠增長相對(duì)更明顯，詳見圖1。

圖1 給藥10周及停藥恢復(fù)4周大鼠體質(zhì)量變化曲線圖

2.3 血液學(xué)和血生化指標(biāo)檢查

血液學(xué)指標(biāo):灌胃給藥10周后，陰性對(duì)照組與低劑量組的 WBC，NEUT% ，MONO% ，RBC，HGB，HCT，MCV，MCH，MCHC，SD，PLT，PCT，MPV，PDW 等血液學(xué)指標(biāo)無顯著差異（P＞0.05）。但高劑量組的LYMPH%顯著低于陰性對(duì)照組（P＜0.05）。詳見表 1。

血生化指標(biāo):灌胃給藥第4周，與陰性對(duì)照組比較，高劑量組的AST較高（P＜0.05），各組其他指標(biāo)比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；灌胃給藥第10周，高劑量組的AST和低劑量組的BUN均顯著高于陰性對(duì)照組（P＜0.05）；停藥恢復(fù)期，高劑量組 AST和ALT均顯著高于陰性對(duì)照組（P＜0.05）；Na，TG，TP，CK，Glu 雖有顯著差異，但并未反映臟器毒性，其他指標(biāo)如ALB，TBil，TC，CR，K，Cl與對(duì)照組比較無顯著差異（P＞0.05）。詳見表2。

表1 4組大鼠血液學(xué)LYMPH%檢查結(jié)果比較（±s，%）

表1 4組大鼠血液學(xué)LYMPH%檢查結(jié)果比較（±s，%）

注:與陰性對(duì)照組比較，*P＜0.05。表3同。

給藥時(shí)間4周10周停藥恢復(fù)82.48 ±3.4683.69 ± 4.1465.62 ±26.6286.38 ± 5.0374.48 ± 8.21*74.96 ±5.7986.75 ± 3.4777.97 ± 5.5264.70 ± 27.9482.50 ± 1.3778.30 ± 1.6063.18 ± 25.44陰性對(duì)照組 高劑量組 中劑量組 低劑量組

表2 4組大鼠血液生化學(xué)指標(biāo)比較（±s）

表2 4組大鼠血液生化學(xué)指標(biāo)比較（±s）

注:與陰性對(duì)照組比較，△P＜0.05，▲P＜0.01。

指標(biāo)AST（U ／L）ALT（U ／L）BUN（mmol／L）Na（mmol／L）TG（mmol／L）TP（g／L）CK（U ／L）Glu（mmol／L）給藥時(shí)間4周10周停藥恢復(fù)4周10周停藥恢復(fù)4周10周停藥恢復(fù)4周10周停藥恢復(fù)4周10周停藥恢復(fù)4周10周停藥恢復(fù)4周10周停藥恢復(fù)4周10周停藥恢復(fù)陰性對(duì)照組124.67±12.42107.33±24.01136.00±30.1642.50±8.1947.13±4.6449.14±8.677.50±1.725.96±0.986.98±0.90140.25±0.96138.88±1.13141.86±0.900.91±0.260.76±0.470.66±0.2352.25±3.8656.25±2.8258.71±3.15991.25±307.221 008.75±231.54958.71±248.047.73±1.398.86±1.208.17±1.31高劑量組158.00±26.04△160.50±33.85△167.00±31.44△38.33±4.9341.67±5.1359.80±3.90△5.48±0.767.29±2.55△7.67±1.49139.17±1.17141.20±1.92▲141.20±0.840.61±0.340.60±0.301.13±0.18△51.17±3.1661.60±5.64△62.20±8.64825.50±117.89563.33±278.64▲493.80±140.63△11.08±10.757.20±1.20▲8.38±0.97中劑量組138.40±22.06120.17±15.17125.75±32.0239.60±6.5045.83±7.7846.75±10.375.56±0.766.50±0.616.88±0.94137.80±1.64△140.33±1.51141.75±0.960.51±0.190.77±0.210.83±0.2953.00±3.0860.67±3.20△61.75±3.77901.80±176.56639.50±159.80▲782.00±234.349.43±1.098.13±1.117.10±1.38低劑量組135.83±14.62124.80±27.29115.40±21.8246.33±12.9640.60±6.8845.20±5.456.48±0.656.39±1.216.48±0.74138.83±1.72140.00±0.89141.40±0.890.63±0.280.76±0.240.75±0.6053.67±3.6158.33±3.4457.6±3.78952.00±265.15624.4±152.07▲754.40±259.398.34±1.128.26±0.597.51±0.54

2.4 臟器濕質(zhì)量及臟器系數(shù)

全蝎最細(xì)粉中、低劑量組恢復(fù)期大腦濕質(zhì)量明顯大于陰性對(duì)照組（P＜0.05），其余各給藥組各期臟器如心、肺、肝、胸腺、脾、腎、腎上腺、卵巢、子宮、睪丸、附睪等的濕質(zhì)量與陰性對(duì)照組相當(dāng)（P＞0.05）。低劑量組恢復(fù)期腎臟臟器系數(shù)明顯低于陰性對(duì)照組（P＜0.05），其余各給藥組各期臟器如大腦、心、肺、胸腺、肝、脾、腎上腺、卵巢、子宮、睪丸、附睪等臟器系數(shù)指標(biāo)與陰性對(duì)照組相當(dāng)（P＞0.05）。詳見表 3。

表3 給藥10周及恢復(fù)4周大鼠大腦濕質(zhì)量及腎系數(shù)比較（±s）

表3 給藥10周及恢復(fù)4周大鼠大腦濕質(zhì)量及腎系數(shù)比較（±s）

指標(biāo)腎系數(shù)大腦濕質(zhì)量時(shí)間4周10周停藥恢復(fù)4周10周停藥恢復(fù)陰性對(duì)照組0.60 ±0.0780.66 ±0.0680.67 ±0.0620.71 ±0.1901.42 ±0.0921.07 ±0.400高劑量組0.51 ±0.2500.70 ±0.0700.77±0.051*1.07 ±0.2701.44 ±0.0891.39 ±0.087*中劑量組0.35 ±0.0320.71 ±0.0590.72 ±0.4300.76 ±0.1101.34 ±0.2001.42 ±0.046*低劑量組0.35 ±0.0320.73 ±0.0870.72 ±0.0500.95 ±0.2401.39 ±0.2001.36 ±0.160

2.5 病理組織學(xué)檢查結(jié)果

給藥第4周，各劑量組未發(fā)現(xiàn)明顯組織學(xué)病便變化。給藥第10周:1）各給藥組均發(fā)生了肺病變，高劑量組輕度炎癥2例，中劑量組輕度炎癥1例，輕度纖維化1例；低劑量組輕度炎癥1例；2）肝臟病變，高、中、低劑量組輕度水腫各2例，高、中劑量組肝中度纖維化各1例，高劑量組肝細(xì)胞壞死1例；3）腎病變，高劑量組輕度纖維化1例；4）睪丸病變，高劑量組睪丸凝固性壞死1例?；謴?fù)期:1）肺部病變，高劑量組輕度炎癥1例，重度纖維化1例，中劑量組輕度炎癥1例，輕度纖維化1例；2）腎病變，輕度纖維化1例。詳見圖2。

3 討論

我國全蝎入藥歷史悠久，由于臨床用途較多，研究也較深入，包含了全蝎來源與鑒別、組方配伍[6]、炮制與加工方法[7]、指紋圖譜與質(zhì)量控制[8]、成分及其含量[9]、結(jié)構(gòu)、作用及機(jī)制[10]、提取工藝及提取物[11]、現(xiàn)代藥理[12]和毒理[13]等諸多領(lǐng)域。目前，臨床服用全蝎引發(fā)中毒的事件時(shí)有發(fā)生，大量服用可能引發(fā)呼吸困難、發(fā)紺、昏迷等癥狀，患者可死于呼吸麻痹[14]。且同一種藥物的不同劑型對(duì)人體產(chǎn)生的療效和毒副反應(yīng)不盡相同。

最細(xì)粉是指能100%通過6號(hào)篩，且95%以上能通過7號(hào)篩的粉末[15]。中藥最細(xì)粉與傳統(tǒng)飲片相比具有以下優(yōu)點(diǎn):減少用藥劑量，節(jié)約藥材；避免有效成分損失和浪費(fèi)；能增加有效成分的生物活性，提高治療效果[16]；便于儲(chǔ)存、攜帶和服用；能有效避免濕度、溫度等外界環(huán)境對(duì)藥效的影響，保證質(zhì)量[17]。但也有其弊端:有一些中藥不適宜制成最細(xì)粉；最細(xì)粉的微小顆粒會(huì)黏附胃腸黏膜，可能影響胃腸功能；中藥細(xì)胞壁被破壞，細(xì)胞內(nèi)活性成分的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)可能會(huì)發(fā)生改變，可能導(dǎo)致一系列毒副作用。因此，對(duì)中藥微粉化后進(jìn)行安全性評(píng)價(jià)研究很有必要，如長期毒性試驗(yàn)、急性毒性試驗(yàn)、人群毒副反應(yīng)流行病學(xué)研究等[18]。

長期毒性試驗(yàn)的作用主要體現(xiàn)以下幾個(gè)方面[19]:發(fā)現(xiàn)藥物在急性毒性試驗(yàn)中未發(fā)現(xiàn)的毒性作用，為重新評(píng)估藥物毒副反應(yīng)提供依據(jù)；明確中毒反應(yīng)的性質(zhì)和程度；明確受到慢性和亞慢性毒影響的靶器官、毒性劑量-反應(yīng)（效應(yīng)）關(guān)系及毒性損害的可逆性；探討可能的毒副作用機(jī)制；明確不同動(dòng)物種類對(duì)藥物長期毒效應(yīng)的差異。本研究中所采用的長期毒性試驗(yàn)結(jié)果顯示，全蝎最細(xì)粉對(duì)SD大鼠體質(zhì)量變化影響不大，而有個(gè)別劑量組AST，ALT，BUN高于陰性對(duì)照組，同時(shí)病檢發(fā)現(xiàn)肺輕度炎性、肺纖維化病變、肝細(xì)胞輕度水腫、腎輕度纖維化，據(jù)此可初步得出結(jié)論，全蝎最細(xì)粉主要毒性靶器官為肺、肝和腎，對(duì)大腦和睪丸的毒性需進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，對(duì)其他靶器官幾乎無毒性作用；給藥周期越長，劑量越大，越容易引起毒性反應(yīng)。

圖2 給藥10周及停藥恢復(fù)4周病理組織學(xué)檢查結(jié)果（HE，×200）

但要注意，藥物的“治”與“毒”是相對(duì)的，不可因噎廢食。許多藥物的毒性作用潛藏于治療作用中，而毒副作用開啟了治療作用的大門。中藥也是如此，毒性中藥是中藥的重要組成部分，我國現(xiàn)行藥典共收載有毒中藥83種，其中“大毒”10種，如斑蝥、川烏、馬錢子等；“有毒”42種，如全蝎、蜈蚣、附子等；“小毒”31種，如土鱉蟲、水蛭、九里香等[20]。本研究的方法和數(shù)據(jù)可為其他有毒中藥最細(xì)粉的毒性研究、安全性評(píng)價(jià)提供參考。