熊庭婷 羅新華 邵和軍

(貴州省人民醫(yī)院感染科，貴州 貴陽(yáng) 550002)

丙型肝炎病毒(HCV)感染后慢性化率為55%～85%，慢性丙型肝炎是肝硬化、肝癌的常見(jiàn)病因之一，每年因HCV感染導(dǎo)致的死亡病例約35萬(wàn)。HCV 基因易變異，目前可至少分為6個(gè)基因型及多個(gè)亞型[1]。既往的研究證實(shí)，HCV不同基因型的流行率與感染途徑密切相關(guān)，HCV基因型為干擾素的治療應(yīng)答的獨(dú)立預(yù)測(cè)因素，而近年來(lái)直接抗病毒藥物(DAA)也被證實(shí)其抗丙肝病毒療效也具有一定程度的基因型特異性[2]。因此了解HCV基因亞型的地區(qū)分布特點(diǎn)對(duì)疾病的防治具有重要的臨床意義。我們對(duì)近年來(lái)于貴州省人民醫(yī)院就診的丙肝患者感染的HCV 進(jìn)行了基因分型和比較分析，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集2015年11月至2018年6月期間，于貴州省人民醫(yī)院感染性疾病科門診或病房住院確診為慢性丙型肝炎的患者，共有359例。其中，男187例，女172例，平均年齡(42.05±11.32)歲。診斷標(biāo)準(zhǔn)符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝病學(xué)分會(huì)和感染病學(xué)分會(huì)《丙型肝炎防治指南(2015年更新版)》。

1.2方法 患者血樣采用德國(guó)Qiagen公司提供的核酸(RNA)提取試劑盒(QIAamp Viral RNA Mini Kit)提取純化的HCV RNA，再使用定量PCR法，采用泰普生物科學(xué)(中國(guó))有限公司提供的丙型肝炎病毒基因分型檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針?lè)?進(jìn)行檢測(cè)。將病例血清與裂解液預(yù)混，震蕩并孵育。加入異丙醇后，轉(zhuǎn)移至 DNA/RNA Column中。洗滌兩次后洗脫，制成RNA提取產(chǎn)物。分別取各亞型HCV RT-PCR反應(yīng)液和酶系，混勻，各管分別按40 μL /管分裝到PCR反應(yīng)管中。再往各亞型HCV RT-PCR反應(yīng)液中分別加入25 μL礦物油、HCV RNA的提取產(chǎn)物10 μL?；靹?，放入熒光PCR儀，按試劑盒提供的程序條件進(jìn)行擴(kuò)增。對(duì)照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行結(jié)果判讀。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SSPS 22.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1HCV基因型結(jié)果檢測(cè) 結(jié)果顯示，共發(fā)現(xiàn)7種HCV基因亞型，其中1a型2例(0.56%)，1b型139例(38.72%)，2a型17例(4.74%)，3a型60例(16.71%)，3b型69例(19.22%)，6a型66例(18.38%)，6n型1例(1.67%)。

2.2不同性別組患者HCV基因型的分布 359例患者基因型在男女性患者中的分布見(jiàn)表1，男性和女性患者HCV基因型分布比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.906，P=0.556)。

表1 不同性別組患者HCV基因型的分布[n(%)]

2.3不同年齡組患者HCV基因型的分布 HCV基因型在不同年齡段患者中的分布見(jiàn)表2，不同年齡段患者中HCV各基因型分布比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=13.590，P=0.126<0.05)。在20歲以下年齡組中，僅檢出2名1b型感染者，20～39歲年齡組中，HCV感染主要型別為依次1b(27.3%)、3b(26.7%)、6a(23.3%)、3a(18.7%)型，隨年齡段的增長(zhǎng)，1b型感染者比例逐漸升高，而3a、3b、6a型感染者比例逐漸下降。

表2 不同年齡組患者中HCV基因型的分布[n(%)]

3 討 論

HCV基因型分布模式與患者感染途徑及地理區(qū)域相關(guān)[3]，近年來(lái)的研究顯示，隨著時(shí)間推移，各地區(qū)HCV基因型分布模式也有所變化。統(tǒng)計(jì)研究提示中國(guó)大陸地區(qū)在大約2000年前后出現(xiàn)較明顯的HCV基因分布型的改變，中國(guó)大陸地區(qū)HCV基因型既往以1型、2型病毒株分布為主，鮮有3型及6型病毒株出現(xiàn)，而在大約2000年之后出現(xiàn)2型病毒株流行率逐漸下降，同時(shí)3型及6型病毒株流行率逐漸升高。

本研究結(jié)果顯示，貴州部分地區(qū)2015～2018年359例HCV患者基因型分布情況為：1a型0.56%，1b型38.72%，2a型4.74%，3a型16.71%，3b型19.22%，6a型18.38%，6n型1.67%，與楊興林等[4]報(bào)道的貴州地區(qū)2011年～2013年198例HCV患者基因型分布數(shù)據(jù)情況類似(1a型4%，1b型35.9%，2a型4.6%，3a型14.7%，3b型23.7%，6a型18.7%，6 d型0.5%)，提示近年來(lái)HCV 1b、3a、3b和6a型仍然是貴州地區(qū)HCV感染的主要基因型，4種基因型占HCV總感染人群的93%。但相比丁靜娟等報(bào)道的[5]貴州地區(qū)1996～1998年98例HCV患者基因型分布(1型74.5%，3a型1%，3b型4.1%，6a型10.2%)已有較大的變化，基因1型感染率明顯下降，基因3型和6型感染率大幅升高。

HCV基因型的分布在我國(guó)具有區(qū)域差異，東北地區(qū)、北方地區(qū)、中原地區(qū)以1型及2型分布為主，而南方邊境省份，近年以3、6型分布較為突出[6-7]。本次研究提示，近年貴州地區(qū)丙肝基因型分布中主要類型1b型(38.7%)，尤其在40歲以上HCV患者中1b型為主要感染基因型，3型和6型的感染率僅次于1b型(分別為35.9%、20.1 %)。我國(guó)自1993年開(kāi)始對(duì)獻(xiàn)血者進(jìn)行HCV-Ab嚴(yán)格篩查，使得通過(guò)血液途徑傳播HCV的可能性大大減少，或許可以解釋1b型在本研究中40歲以下年輕患者中比例明顯降低的原因。國(guó)內(nèi)研究提示接壤東南亞地區(qū)的云南地區(qū)HCV感染者中基因3型和6型病毒株分布較為突出，并隨靜脈吸毒人群在周邊地區(qū)傳播[7]，而文獻(xiàn)[4]中提示貴州地區(qū)通過(guò)吸毒途徑感染HCV患者中基因3型和6型病毒株分布也比較突出，本次研究提示貴州地區(qū)21～39歲HCV患者中的主要感染型為3型及6型，這種表現(xiàn)可能與年輕患者中靜脈吸毒人群比例增多相關(guān)，有待進(jìn)一步流行病學(xué)調(diào)查。

HCV基因分型對(duì)于丙型肝炎疾病轉(zhuǎn)歸和療效預(yù)測(cè)均具有重要意義，本研究提示目前貴州地區(qū)至少存在7種基因亞型丙肝病毒感染，包括1a型、1b型、2a型、3a型、3b型、6a型、6n型，其中6n型為貴州地區(qū)首次報(bào)道，提示貴州地區(qū)HCV感染毒株存在多樣性，但由于樣本來(lái)源的地域性差異及檢測(cè)方法的局限性，尚不能排除貴州地區(qū)還存在其他基因型及混合基因型感染的可能，有待進(jìn)一步擴(kuò)大樣本來(lái)源進(jìn)行研究。