陳玉芬 韓敏 張秀俊 蘇海飛 張肖

[摘要] 目的 探討血清miR-155聯(lián)合人附睪蛋白4（HE4）、糖類抗原199（CA199）診斷子宮內(nèi)膜癌（EC）的價(jià)值。方法 選取2016年6月～2018年6月河北省邯鄲市第一醫(yī)院腫瘤科收治的68例EC患者為EC組，60例子宮內(nèi)膜增生患者為內(nèi)膜增生組，60名健康體檢健康者為對(duì)照組。檢測(cè)并比較三組血清miR-155、HE4、CA199水平，分析其對(duì)EC患者診斷價(jià)值。 結(jié)果 EC組、內(nèi)膜增生組患者血清miR-155、HE4、CA199水平均高于對(duì)照組（P < 0.05），且EC組高于內(nèi)膜增生組（P < 0.05）;EC病理分級(jí)G3、G2級(jí)患者血清miR-155、HE4、CA199水平均高于G1級(jí)患者（P < 0.05），G3級(jí)患者高于G2級(jí)患者（P < 0.05）;EC FIGO分期Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期患者血清miR-155、HE4、CA199水平均高于Ⅰ期患者（P < 0.05），Ⅲ期、Ⅳ期患者高于Ⅱ期患者（P < 0.05），Ⅳ期患者高于Ⅲ期患者（P < 0.05）;繪制ROC曲線顯示，三者聯(lián)合檢測(cè)的AUC、敏感性、特異性均高于單獨(dú)檢測(cè)。 結(jié)論 EC患者血清miR-155、HE4、CA199均高表達(dá)，且隨患者病理分級(jí)、FIGO分期升高而升高，三者聯(lián)合診斷敏感性、特異性高，對(duì)EC患者早期診斷具有較高臨床價(jià)值。

[關(guān)鍵詞] 子宮內(nèi)膜癌;miR-155;人附睪蛋白4;糖類抗原199;診斷價(jià)值

[中圖分類號(hào)] R737.33? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A? ? ? ? ? [文章編號(hào)] 1673-7210（2019）07（b）-0100-04

Diagnostic values of serum MiR-155 combined with HE4 and CA199 in endometrial cancer

CHEN Yufen1? ?HAN Min1? ?ZHANG Xiujun1? ?SU Haifei2? ?ZHANG Xiao1

1.Department of Obstetrics and Gynecology， Handan First Hospital， Hebei Province， Handan? ?056002， China; 2.Department of Obstetrics and Gynecology， the People′s Hospital of Guantao County， Hebei Province， Guantao? ?057750， China

[Abstract] Objective To investigate the diagnostic values of serum miR-155 combined with human epididymal protein 4 （HE4） and carbohydrate antigen 199 （CA199） in endometrial cancer （EC）. Methods Thirty-right patients with EC admitted to Oncology Department of Handan First Hospital in Hebei Province from June 2016 to June 2018 were selected as the EC group， 60 cases of endometrial hyperplasia patients were selected as the endometrial hyperplasia group， 60 healthy persons were taken as control group， the levels of serum microRNA-155， HE4 and CA199 were detected and compared among the three groups， and their diagnostic value for EC patients was analyzed. Results The levels of serum miR-155， HE4， and CA199 in EC group and endometrial hyperplasia group were higher than those in control group （P < 0.05）， and those in EC group were higher than those in endometrial hyperplasia group （P < 0.05）; the levels of serum miR-155， HE4， and CA199 in EC patients with pathological grades G3 and G2 were higher than those in patients with grade G1 （P < 0.05）， while those in patients with grade G3 were higher than those in patients with grade G2 （P < 0.05）; the levels of serum miR-155， HE4， and CA199 in EC patients with stage Ⅱ， Ⅲ， and Ⅳ of FIGO were higher than those in patients with stage Ⅲ （P < 0.05）， those in patients with stage Ⅲ and Ⅳ were higher than those in patients with stage Ⅱ （P < 0.05）， and those in patients with stage Ⅳ were higher than those in patients with stage Ⅲ （P < 0.05）. The ROC curve showed that the AUC， sensitivity and specificity of the combined detection were higher than those of the single detection. Conclusion Serum miR-155， HE4， and CA199 are highly expressed in EC patients， and with the increases of pathological grade and FIGO stage， the sensitivity and specificity of the combined diagnosis are high， which has high clinical value for early diagnosis of EC patients.

[Key words] Endometrial carcinoma; MiR-155; Human epididymis protein 4; Carbohydrate antigen 199; Diagnostic value

子宮內(nèi)膜癌（endometrial carcinoma，EC）是女性生殖系統(tǒng)常見惡性腫瘤之一，其發(fā)病率占全球婦科惡性腫瘤第二位，并呈逐年升高趨勢(shì)，嚴(yán)重影響女性生命健康和生活質(zhì)量[1]。EC晚期患者5年生存期僅為30%～40%，隨著手術(shù)治療技術(shù)的不斷改進(jìn)，患者生存時(shí)間相對(duì)提高，但術(shù)后復(fù)發(fā)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移仍較高。因此，尋找EC早期診斷指標(biāo)對(duì)提高患者生存率極其重要[2-3]。人附睪蛋白4（human epididymis gene product 4，HE4）在正常人血清中低表達(dá)，而在EC患者血清中高表達(dá)，糖類抗原199（carbohydrate antigen199，CA199）常作為消化道腫瘤鑒別診斷指標(biāo)，有研究報(bào)道，CA199在EC患者血清中表達(dá)水平高于健康女性，HE4和CA199可作為EC早期診斷檢測(cè)指標(biāo)[4-5]。微小RNA（microRNA，miRNA）參與多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展，有研究報(bào)道m(xù)iR-155在EC患者組織和血清中均高表達(dá)，但關(guān)于血清miR-155、HE4、CA199聯(lián)合檢測(cè)對(duì)EC患者診斷價(jià)值的研究報(bào)道較少[6]。因此，本研究旨在探討血清miR-155聯(lián)合HE4、CA199對(duì)EC患者的診斷價(jià)值，報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年6月～2018年6月河北省邯鄲市第一醫(yī)院腫瘤科收治的68例EC患者為EC組，60例子宮內(nèi)膜增生患者為內(nèi)膜增生組，60例健康體檢健康者為對(duì)照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：①患者均經(jīng)組織病理學(xué)確診;②均為初次確診患者;③受試者對(duì)本研究知情并簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①入組前有放化療及免疫治療史;②入組前6個(gè)月內(nèi)有性激素使用史;③合并嚴(yán)重心、肝、腎等功能衰竭;④伴發(fā)嚴(yán)重感染及嚴(yán)重并發(fā)癥;⑤合并其他部位惡性腫瘤。EC組患者年齡42～65歲，平均（50.34±4.62）歲;病理分級(jí)：G1級(jí)17例，G2級(jí)42例，G3級(jí)9例;FIGO分期：Ⅰ期15例，Ⅱ期28例，Ⅲ期18例，Ⅳ期7例。內(nèi)膜增生組年齡35～58歲，平均（48.85±4.73）歲;子宮內(nèi)膜不典型增生21例，子宮內(nèi)膜單純性增生39例。對(duì)照組年齡32～63歲，平均（49.58±6.12）歲。三組受試者年齡等一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05），具有可比性。

1.2 試劑與儀器

TRI Reagent BD RNA試劑、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、qRT-PCR試劑盒均購(gòu)自美國(guó)Gene Copoeia公司（生產(chǎn)批號(hào)：1611249、1608164、1512271）;HE4酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）試劑盒購(gòu)自英國(guó)Abcam公司（生產(chǎn)批號(hào)：0509283）;CA199試劑盒購(gòu)自美國(guó)雅培公司（生產(chǎn)批號(hào)：69217）;全自動(dòng)酶標(biāo)儀購(gòu)自美國(guó)賽默飛世爾公司;全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光分析儀購(gòu)自德國(guó)羅氏公司;普通PCR儀德國(guó)Eppendorf公司;熒光定量PCR儀、紫外凝膠成像分析系統(tǒng)均購(gòu)自美國(guó)Bio-Rad公司;PCR引物由生工生物工程（上海）股份有限公司合成。

1.3 檢測(cè)方法

①miR-155檢測(cè)：采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qRT-PCR）檢測(cè)受試者血清miR-155水平，miR-155上游引物序列：5′-GCGAAAGCATTTGCCAAGAA-3′，下游引物序列：5′-CATCACAGACCTGTTATTGC-3′，內(nèi)參基因U6上游引物序列：5′-AGCGGGAAATCGTGCGTGACA-3′，下游引物序列：5′-GTGGACTTGGGAGAGGACTGG-3′，取待測(cè)血清提取總RNA，嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作，測(cè)定濃度和純度，符合要求方可進(jìn)行cDNA合成。冰盒上配制cDNA合成反應(yīng)體系，反應(yīng)體系：5×ReactionBuffer 4 μL、特異性引物1 μL、10 mmol/L dNTP Mix 2 μL、Ribolock RNase Inhibitor 1 μL、RevertAid M-MuLV RT 1 μL、總RNA 5 μL、無RNA酶水6 μL;反應(yīng)條件：25℃ 5 min、42℃ 40 min、75℃ 5 min，進(jìn)行cDNA合成，于-20℃保存?zhèn)溆?。qRT-PCR檢測(cè)，以U6為內(nèi)參基因，合成cDNA為模板，配制反應(yīng)體系，反應(yīng)體系：Maxima SYBR Green qPCR 10 μL、上游引物1 μL、下游引物0.4 μL、cDNA模板1 μL、ddH2O 7.6 μL，設(shè)置3個(gè)重復(fù)，反應(yīng)條件：95℃ 30 s、95℃ 3 s、60℃ 30 s，40個(gè)循環(huán)，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，采用2-△△Ct方法計(jì)算 miR-155相對(duì)表達(dá)量。②HE4檢測(cè)：采用ELISA檢測(cè)血清HE4水平，設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、待檢樣品孔及空白孔，操作步驟嚴(yán)格參照試劑盒說明書執(zhí)行，采用酶標(biāo)儀在450 nm處檢測(cè)吸光度值，計(jì)算HE4濃度。③CA199檢測(cè)：電化學(xué)免疫發(fā)光法檢測(cè)血清CA199水平，嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作，所有檢測(cè)步驟由同一人操作。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，多組間比較采用方差分析，兩組間比較采用LSD-t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。采用受試者工作特征曲線（ROC曲線）預(yù)測(cè)血清miR-155、HE4、CA199對(duì)EC診斷價(jià)值。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組血清miR-155、HE4、CA199水平比較

EC組、內(nèi)膜增生組患者血清miR-155、HE4、CA199水平均高于對(duì)照組，且EC組高于內(nèi)膜增生組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。見表1。

2.2 不同病理分級(jí)EC患者血清miR-155、HE4、CA199水平比較

EC病理分級(jí)G2、G3級(jí)患者血清miR-155、HE4、CA199水平均高于G1級(jí)患者，G3級(jí)患者高于G2級(jí)患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。見表2。

2.3 不同F(xiàn)IGO分期EC患者血清miR-155、HE4、CA199水平比較

EC FIGO分期Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期患者血清miR-155、HE4、CA199水平均高于Ⅰ期患者（P < 0.05），Ⅲ期、Ⅳ期患者高于Ⅱ期患者（P < 0.05），Ⅳ期患者高于Ⅲ期患者（P < 0.05）。見表3。

2.4 血清miR-155、HE4與CA199聯(lián)合診斷EC價(jià)值

分別以EC患者血清miR-155、HE4與CA199表達(dá)水平繪制ROC曲線顯示，聯(lián)合檢測(cè)的AUC、敏感性、特異性及約登指數(shù)均高于單獨(dú)檢測(cè)。見表4、圖1。

3 討論

EC高發(fā)于50～60歲女性，特別是絕經(jīng)后女性，成為與卵巢癌、宮頸癌并列的女性生殖道三大惡性腫瘤之一[7-8]。EC的發(fā)病原因較多，可能與體質(zhì)、雌激素水平、遺傳等因素相關(guān)，其發(fā)病機(jī)制尚不明確[9]。腫瘤標(biāo)志物是一種化學(xué)物質(zhì)，往往在正常組織中不表達(dá)或低表達(dá)，但在腫瘤組織中常常高表達(dá)，常作為腫瘤的輔助診斷指標(biāo)，對(duì)腫瘤早期診斷及預(yù)后具有重要作用。

miR-155屬于miRNA，其表達(dá)水平升高可促進(jìn)細(xì)胞異常增殖、腫瘤細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移。有研究報(bào)道m(xù)iR-155在肝癌細(xì)胞中過表達(dá)，轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞72 h后可促進(jìn)肝癌細(xì)胞增殖，同時(shí)增強(qiáng)癌細(xì)胞浸潤(rùn)能力[10-11]。Han等[12]研究發(fā)現(xiàn)miR-155在乳腺癌患者血清中高表達(dá)，具有較高診斷敏感性和特異性，可作為乳腺癌早期診斷潛在生物標(biāo)志物。本研究結(jié)果顯示，miR-155在EC、子宮內(nèi)膜增生患者血清中均高表達(dá)，EC患者高于子宮內(nèi)膜增生患者，與上述研究結(jié)果基本相似，提示miR-155可能參與EC癌變過程。HE4最早在人附睪中克隆獲得，有研究發(fā)現(xiàn)HE4可作為EC單一腫瘤標(biāo)志物，并在EC不同腫瘤分期中有明顯表達(dá)差異[13]。CA199是一種糖類抗原，在女性生殖道腫瘤與消化道腫瘤中高表達(dá)，但靈敏性和特異性較差，常和其他腫瘤標(biāo)志物進(jìn)行聯(lián)合檢測(cè)[14-15]。本研究結(jié)果顯示，HE4、CA199在EC、子宮內(nèi)膜增生患者血清中高表達(dá)，且EC患者高于子宮內(nèi)膜增生患者，與既往的研究[15-16]結(jié)果基本相似，提示血清HE4、CA199可用于EC的診斷。進(jìn)一步分析在EC病理分級(jí)和EC FIGO分期表達(dá)顯示，血清miR-155、HE4、CA199水平隨EC的病理分級(jí)和FIGO分期升高而增加，與Zhang等[17]和張智等[18]研究結(jié)果基本相似，提示血清miR-155、HE4、CA199表達(dá)水平與EC的病理分級(jí)和FIGO分期相關(guān)，可作為EC患者疾病嚴(yán)重程度的評(píng)估指標(biāo)。準(zhǔn)確評(píng)估EC患者疾病嚴(yán)重程度有利于選擇治療效果較佳的治療方案，而以往病情嚴(yán)重程度的評(píng)估主要以有創(chuàng)檢查為依據(jù)，給患者病情動(dòng)態(tài)觀察及隨訪帶來諸多不便，因此，可選擇采用血清miR-155、HE4、CA199水平檢測(cè)評(píng)估EC病情嚴(yán)重程，且方法簡(jiǎn)便、快捷[19]。最后，本研究通過ROC曲線分析顯示，三者聯(lián)合檢測(cè)的AUC、敏感性、特異性均高于單獨(dú)檢測(cè)，與劉曉良等[20]和Choi等[21]研究結(jié)果相似，提示血清miR-155、HE4、CA199聯(lián)合診斷EC的靈敏度和特異性高，可提高EC患者診斷效率。

綜上所述，本研究通過對(duì)EC患者血清miR-155、HE4、CA199水平檢測(cè)顯示，EC患者血清miR-155、HE4、CA199表達(dá)水平升高，并與患者病理分級(jí)、FIGO分期相關(guān)，三者聯(lián)合診斷敏感性、特異性高，對(duì)EC患者早期診斷及預(yù)后隨訪有較高的臨床價(jià)值。

[參考文獻(xiàn)]

[1]? Talhouk A，Hoang LN，Mcconechy MK，et al. Molecular classification of endometrial carcinoma on diagnostic specimens is highly concordant with final hysterectomy：earlier prognostic information to guide treatment [J]. Gynecol Oncol，2016，143（1）：46-53.

[2]? Gibson WJ，Hoivik EA，Halle MK，et al. The genomic landscape and evolution of endometrial carcinoma progression and abdominopelvic metastasis [J]. Nat Genet，2016，48（8）：848-855.

[3]? 陳丹丹，吳湖炳，王全師，等.18F-FDGPET/CT顯像在子宮內(nèi)膜癌術(shù)后復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移中的價(jià)值[J].中華核醫(yī)學(xué)與分子影像雜志，2016，36（1）：39-43.

[4]? 羅樹玲，鄭春艷，曹錦慧.血清CA125和HE4檢測(cè)在子宮內(nèi)膜癌中的臨床意義[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2016，20（9）：1490-1492.

[5]? 李姣玲，耿秀平，伍素卿，等.經(jīng)陰道彩色多普勒超聲聯(lián)合血漿腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)在子宮內(nèi)膜癌診斷中的應(yīng)用[J].中華醫(yī)學(xué)超聲雜志：電子版，2015，12（11）：894-900.

[6]? 陳玉芬.子宮內(nèi)膜癌患者血清中miR-155的表達(dá)及其臨床意義研究[J].中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)刊，2015，16（1）：160-161.

[7]? Ding K，Yuan Y，Chong QY，et al. Autocrine prolactin stimulates endometrial carcinoma growth and metastasis and reduces sensitivity to chemotherapy [J]. Endocrinology，2017，158（6）：1595-1611.

[8]? 鄭楠，譚文華.eIF4E及其在婦科惡性腫瘤中的研究進(jìn)展[J].國(guó)際婦產(chǎn)科學(xué)雜志，2017，44（6）：667-670.

[9]? 沈蓉，吳曉玲，肖子文，等.P-gp和GST-π在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)及與雌激素受體、孕激素受體的相關(guān)性[J].廣東醫(yī)學(xué)，2016，37（18）：2764-2767.

[10]? 傅春江，毛廷森，曾泉，等.miR-155對(duì)人肝癌細(xì)胞系SK-HEP-1及MHCC-97H增殖與浸潤(rùn)能力的影響[J].生物技術(shù)通訊，2015，26（5）：600-604.

[11]? Lerner C，Wemmert S，Bochen F，et al. Characterization of miR-146a and miR-155 in blood，tissue and cell lines of head and neck squamous cell carcinoma patients and their impact on cell proliferation and migration [J]. J Cancer Res Clin，2016，142（4）：757-766.

[12]? Han JG，Jiang YD，Zhang CH，et al. A novel panel of serum miR-21/miR-155/miR-365 as a potential diagnostic biomarker for breast cancer [J]. Ann Surg Treat Res，2017， 92（2）：55-66.

[13]? 周哲，蔣欣，宋繼成，等.血清HE4、CP2檢測(cè)對(duì)子宮內(nèi)膜癌患者臨床病理分子、腫瘤組織中增殖分子表達(dá)的評(píng)估價(jià)值[J].海南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2016，22（13）：1410-1413.

[14]? 李雪鳳，閆雅妮，馮艷霞，等.經(jīng)腹部和經(jīng)陰道超聲檢查聯(lián)合CA125+CA199輔助診斷子宮內(nèi)膜癌的臨床價(jià)值[J].中國(guó)婦幼保健，2017，32（9）：2024-2027.

[15]? 唐霓，黃華儀，李惠清，等.不同年齡段成熟卵巢畸胎瘤患者CA125、CA199及腫瘤直徑的臨床研究[J].中國(guó)醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2017，14（15）：48-50.

[16]? Bian J，Sun XX，Li B，et al. Clinical significance of serum HE4，CA125，CA724 and CA19-9 in patients with endometrial cancer [J]. Technol Cancer Res T，2016，16（4）：435-439.

[17]? Zhang XL，Chen JH，Qin CK. MicroRNA-155 expression as a prognostic factor in patients with gallbladder carcinoma after surgical resection [J]. Int J Clin Exp Med，2015， 8（11）：21 241-21 246.

[18]? 張智，陳紅霞，徐曉霞.血清人附睪蛋白E4、CA125、CA199聯(lián)合診斷子宮內(nèi)膜癌的價(jià)值[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2016， 32（7）：1108-1111.

[19]? Dolly D，Mihai A，Rimel BJ，et al. A delay from diagnosis to treatment is associated with a decreased overall survival for patients with endometrial cancer [J]. Front Oncol，2016，6（248）：31-35.

[20]? 劉曉良，任健康.血清CA125與CA199聯(lián)合檢測(cè)在子宮內(nèi)膜癌輔助診斷中的價(jià)值[J].西南國(guó)防醫(yī)藥，2016， 26（9）：1011-1013.

[21]? Choi CH，Park YA，Choi JJ，et al. Angiotensin Ⅱ type Ⅰ receptor and miR-155 in endometrial cancers： synergistic antiproliferative effects of anti-miR-155 and losartan on endometrial cancer cells [J]. Gynecol Oncol，2015， 126（1）：124-131.