亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        針刺對膝骨性關(guān)節(jié)炎大鼠NGF、SP的影響?

        2019-10-09 02:41:08繆輝宇曲崇正黃宏興
        中國中醫(yī)急癥 2019年9期
        關(guān)鍵詞:模組滑膜造模

        繆輝宇 曲崇正 黃宏興

        (廣州中醫(yī)藥大學第三附屬醫(yī)院,廣東 廣州 510407)

        針刺療法在治療膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎(KOA),尤其是在鎮(zhèn)痛方面的確切療效已被臨床實踐所驗證。以往的研究較多局限于針刺療法對關(guān)節(jié)軟骨的病變及炎性因子的刺激上,但對針刺鎮(zhèn)痛的臨床研究并不多見。因此,本實驗通過建立KOA動物模型,以大鼠膝關(guān)節(jié)滑膜為研究對象,引入神經(jīng)生長因子(NGF)和P物質(zhì)(SP),采用免疫組化技術(shù)研究針刺對NGF、SP的影響,為針刺治療KOA的鎮(zhèn)痛機制提供實驗依據(jù)。

        1 材料與方法

        1.1 實驗動物 成年SD大鼠75只,體質(zhì)量220~280 g,雌性40只,雄性35只,來源于廣州中醫(yī)藥大學動物實驗中心。所有大鼠均飼養(yǎng)于恒溫恒濕的清潔環(huán)境中,環(huán)境溫度為(25±1)℃,濕度70%,每天12 h光照/12 h黑暗,所選大鼠在實驗室喂養(yǎng)并適應飼養(yǎng)1周,實驗期間動物的處理符合《關(guān)于善待實驗動物的指導性意見》的規(guī)定。

        1.2 試藥與儀器 1)試藥:木瓜蛋白酶(廣西南寧杰沃利生物制品有限公司生產(chǎn)),配制成0.1 mL 4%木瓜蛋白酶生理鹽水。即用型兔抗人NGF及SP、SABC試劑盒、DAB顯色試劑盒(武漢博士德生物工程公司生產(chǎn))。西樂葆(輝瑞制藥有限公司生產(chǎn),國藥準字J20140072,0.2 g)。戊巴比妥鈉(成都華夏公司生產(chǎn),批號922L0314,50 mg)。2)儀器:撳針(北京中研太和醫(yī)療器械有限公司生產(chǎn);長度為5 mm、直徑為0.28 mm,蘇食藥監(jiān)械生產(chǎn)許20010168號)。

        1.3 分組與造模 采用隨機數(shù)字表將大鼠分為5組,各15只,其中4組進行木瓜蛋白酶造模,另1組不做任何干預作為對照的正常組,造模方法為:將大鼠用戊巴比妥鈉(30 mg/kg)進行靜脈注射麻醉,對左側(cè)膝關(guān)節(jié)皮膚進行常規(guī)消毒,然后在麻醉起效后將0.1 mL 4%木瓜蛋白酶生理鹽水經(jīng)大鼠的髕上韌帶兩側(cè)注入至左膝關(guān)節(jié)腔內(nèi),每3日注射1次,連續(xù)注射3次完成造模。造模術(shù)后持續(xù)1周肌注青霉素5萬U/d以預防感染。造模大鼠分為造模組、西樂葆組、針刺穴位組、針刺非穴組。

        1.4 干預方法 動物常規(guī)飼養(yǎng),干預方法在木瓜蛋白酶末次注入后2周后進行。1)造模組和正常組:正常飼養(yǎng)不做其他處理。2)針刺穴位組:取穴參照華興邦等制定的《大鼠穴位圖譜的研制》[1]中大鼠穴位定位,取左側(cè)膝眼、血海、陽陵泉穴。操作方法:常規(guī)消毒局部皮膚,左手固定大鼠左膝部,右手用鑷子夾住針柄,針尖在穴位垂直穿刺,然后用膠帶固定針柄30 min,每日1次。所有大鼠在7 d后都被處死。處死后取下滑膜。3)針刺非穴組:選擇穴位組選擇的3個穴位旁開2 cm的非穴位進行針灸,其余操作均同穴位組。4)西樂葆組:按24 mg/kg溶于2 mL純凈水中灌胃,每日1次,連續(xù)7 d后處死全部大鼠。

        1.5 標本采集及檢測 造模組和正常組在造模結(jié)束兩周后以空氣栓塞法處死造模組和正常組的大鼠,無菌條件下取大鼠左膝內(nèi)下方滑膜,0.9%氯化鈉注射液沖洗后用10%的甲醛溶液固定,常規(guī)石蠟包埋,備用。針刺穴位組、針刺非穴位組、西樂葆組均在干預7 d后處死大鼠并取大鼠膝關(guān)節(jié)滑膜。具體處死方法和取材同造模組及正常組。1)免疫組化染色:將石蠟包埋好的滑膜標本切片,厚約4 μm,分別進行NGF和SP免疫組化染色。常規(guī)脫蠟至水后,于0.3%H2O2的甲醇內(nèi)進行室溫孵育20 min,再在92℃~98℃的醫(yī)用微波下抗原修復10 min。一抗:正常山羊血清密封劑在室溫下孵育20 min,用適當稀釋的抗NGF或SP滴注(一部分切片滴NGF抗體,剩下一部分滴SP抗體),濕盒內(nèi)4℃恒溫過夜。二抗:PBS溶液沖洗3次,每次間隔5 min,生物素化二抗,滴加SABC試劑后37℃孵育20 min。DAB顯色液顯色,蘇木素復染,脫水,透明,封片。2)免疫組化觀察及等級標準:用顯微鏡觀察各組陽性細胞形態(tài)及分布,進行真彩色圖像分析(德國Koutron公司IBAS真彩色圖像分析儀)。根據(jù)陽性血管分布占比分為3級:<40%為-,40%~70%為+,>70%為++。每張病理切片選擇3個視野進行分析,分別記錄陽性表達的數(shù)量,陽性表達數(shù)取切片3個觀察視野的平均值。根據(jù)圖像分析系統(tǒng),算出陽性面積和陽性區(qū)域平均灰度值,折算成陽性單位值(PU),并按文獻[2]方法PU=[(區(qū)域陽性產(chǎn)物灰度值-區(qū)域灰度值)/(區(qū)域背景面積密度×最大灰度分級)]×100%。PU大小與反應強度成正比。

        1.6 統(tǒng)計學處理 應用SPSS 21.0統(tǒng)計軟件。計量資料以(±s),組間比較用t檢驗,計數(shù)資料用(%),組間比較用χ2檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

        2 結(jié) 果

        2.1 各組滑膜切片NGF表達 見圖1。NGF在血管周圍表達,為胞漿著色,棕黃色,呈半環(huán)形或環(huán)形,顆粒狀。陽性細胞染色>血管周長的40%即代表陽性結(jié)果。每張病理切片選擇3個視野進行分析,分別記錄陽性表達的數(shù)量,陽性表達數(shù)取切片3個觀察視野的平均值。正常組見少量NGF陽性細胞;造模組較正常組明顯增多;西樂葆組、針刺非穴組與針刺穴位組陽性細胞數(shù)較造模組降低;但西樂葆組、針刺非穴組降低幅度更大。

        圖1 滑膜切片NGF表達(免疫組化法,400倍)

        2.2 各組滑膜切片SP表達 見圖2。SP位于血管壁,呈棕黃色顆粒狀。陽性細胞染色>血管周長的40%即代表陽性結(jié)果。每張切片同樣選擇3個視野進行分析,陽性表達數(shù)取3個記錄的均值。正常組見少量SP陽性細胞;造模組較正常組明顯增多;西樂葆組、針刺非穴組與針刺穴位組陽性細胞數(shù)較造模組降低;但西樂葆組、針刺非穴組降低幅度更大。

        圖2 滑膜切片SP表達(免疫組化法,400倍)

        2.3 各組大鼠NGF陰性、陽性、強陽性表達情況 見表1。針刺穴位組NGF總陽性率為13.33%,明顯低于非針刺穴位組60.00%(P<0.01);而西樂葆組與針刺穴位組間比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

        表1 各組大鼠NGF陰性、陽性、強陽性表達情況(n)

        2.4 各組大鼠SP陰性、陽性、強陽性表達情況 見表2。針刺穴位組SP總陽性率為6.67%,顯著低于針刺非穴組的SP總陽性率53.33%(P<0.01);但針刺穴位組與西樂葆組比較差異不顯著(P>0.05)。

        表2 各組大鼠SP陰性、陽性、強陽性表達情況(n)

        2.5 各組大鼠NGF、SP水平比較 見表3。較之造模組大鼠,針刺穴位組、西樂葆組大鼠的NGF、SP陽性表達率明顯降低(P<0.05或P<0.01);且針刺穴位組的NGF、SP陽性表達低于針刺非穴組(P<0.05);但針刺穴位組與西樂葆組比較NGF、SP陽性表達并無明顯差異(P>0.05)。

        表3 各組大鼠滑膜內(nèi)NGF、SP表達比較(Pu,±s)

        表3 各組大鼠滑膜內(nèi)NGF、SP表達比較(Pu,±s)

        組別正常組造模組西樂葆組針刺穴位組針刺非穴組n 1515151515 NGF-0.41±2.3127.39±20.771)2.17±2.861.81±2.742)11.23±10.21 SP-0.33±2.3729.29±13.16*2.61±2.18*1.75±1.99*△10.53±9.88

        3 討論

        骨關(guān)節(jié)炎屬中醫(yī)學“骨痹”范疇,多因人體正氣虧虛,風寒濕外邪侵襲,痹阻氣血,流注經(jīng)脈所致[3]。65歲以上老年人KOA發(fā)病率高達85%[4-5]?,F(xiàn)有西醫(yī)治療多以非甾體消炎藥緩解癥狀為主,但長期使用后胃腸道毒副作用明顯,常使患者不能耐受而終止治療。目前臨床上已越來越多地使用針刺來達到鎮(zhèn)痛的效果,且針刺副作用小,患者能夠長期治療。

        NGF是神經(jīng)營養(yǎng)因子中的一員,主要起著維持神經(jīng)元存活,調(diào)節(jié)周圍和中樞神經(jīng)元發(fā)育的作用,是人體中不可缺少的因子。有研究報道,神經(jīng)生長因子主要是根據(jù)低親和力p75神經(jīng)營養(yǎng)因子受體(p75ntr)和高親和力酪氨酸激酶A(trka)調(diào)控疼痛,在疼痛的發(fā)生和發(fā)展中起著生物學作用,參與疼痛發(fā)生、發(fā)展的各個環(huán)節(jié)[6]。本實驗發(fā)現(xiàn),NGF水平升高與疼痛呈正相關(guān)[7]。而針刺鎮(zhèn)痛與NGF相關(guān)研究鮮見發(fā)表,僅有熊鍵等發(fā)現(xiàn)電針可以通過抑制NGF的表達達到鎮(zhèn)痛的目的[8]。

        SP是調(diào)節(jié)機體免疫和內(nèi)分泌的重要因素,可被免疫系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)識別[9-10]。在機體不同系統(tǒng)具有不同的生理學效應,對針灸與P物質(zhì)的研究主要在鎮(zhèn)痛作用方面。徐小丹[11]研究顯示電針可抑制SP的釋放,從而產(chǎn)生明顯的鎮(zhèn)痛作用。郭奎奎等發(fā)現(xiàn)局部和遠道取穴在抑制SP釋放及鎮(zhèn)痛方面無顯著性差異[12]。劉苗苗等發(fā)現(xiàn)針刺聯(lián)合中藥離子可緩解腰椎間盤突出癥引起的疼痛[13]。

        針刺療法在治療KOA方面特別是鎮(zhèn)痛效果的確切療效已被臨床實踐所驗證。以往的研究較多局限于關(guān)節(jié)軟骨的病變及炎性因子的刺激上。本課題通過建立KOA大鼠模型,以大鼠膝關(guān)節(jié)滑膜為研究對象,引入NGF和SP細胞因子,采用免疫組化技術(shù)研究針刺對NGF、SP的影響,為針刺治療KOA的鎮(zhèn)痛機制提供了實驗依據(jù)。本研究結(jié)果顯示,針刺穴位組與西樂葆組NGF、SP含量均顯著低于造模組,且兩者對比無顯著性差異(P>0.05),兩組在緩解疼痛方面療效相當,但針灸更加安全可靠,在今后KOA患者的長期治療中更可取。

        目前臨床上治療KOA主要是口服西樂葆,由于老年人患KOA較多,且易合并心血管、胃腸道等其他疾病,但西樂葆臨床適用性有限。且既往有臨床研究表明,西樂葆治療老年KOA易引起惡心、脹氣、便秘等不良反應。而針灸療法可疏通經(jīng)絡、調(diào)和陰陽、扶正去邪,具有許多優(yōu)點:1)適應證廣,可用于多科疾?。?)操作方法簡便易行;3)醫(yī)療費用經(jīng)濟;4)副作用較小。陽陵泉、血海、膝眼是臨床上治療KOA常用穴位[14-15]。針刺上述穴位可降低疼痛中樞的敏感性,改善關(guān)節(jié)疼痛癥狀以及局部組織微循環(huán)和全身血液循環(huán),加速關(guān)節(jié)積液和血腫的吸收,緩解關(guān)節(jié)腫脹癥狀,增強機體對外界刺激的承受能力[16]。

        綜上所述,針刺能有效抑制KOA大鼠滑膜內(nèi)NGF、SP的表達,這可能是針刺治療KOA有效的機制之一,但由于本研究數(shù)據(jù)較小,其具體作用機制以及滑膜是否有修復作用,還有待進一步研究。

        猜你喜歡
        模組滑膜造模
        基于滑膜控制的船舶永磁同步推進電機直接轉(zhuǎn)矩控制研究
        高層建筑施工中的滑膜施工技術(shù)要點探討
        腎陽虛證動物模型建立方法及評定標準研究進展
        脾腎陽虛型骨質(zhì)疏松癥動物模型造模方法及模型評價
        濕熱證動物模型造模方法及評價研究
        光學薄膜技術(shù)及在背光模組中的應用研究
        電子制作(2019年12期)2019-07-16 08:45:20
        淺談石墨烯材料在LED路燈模組中的應用及該模組的設計
        電子制作(2018年8期)2018-06-26 06:43:10
        關(guān)于超薄LED背光模組設計探討
        電子測試(2017年11期)2017-12-15 08:57:38
        滑膜肉瘤的研究進展
        原發(fā)性肺滑膜肉瘤診斷與治療——附一例報告及文獻復習
        国产一级大片免费看| 亚洲av无码国产精品色| 宅男666在线永久免费观看| 久久亚洲精品ab无码播放| 国产一区二区三区国产精品| 日韩精品午夜视频在线| 青青草原综合久久大伊人精品| 六月婷婷久香在线视频| 在线精品无码一区二区三区| 日韩美女人妻一区二区三区| 天天干天天日夜夜操| 国产精品久久久久影院嫩草| 91最新免费观看在线| 白白色日韩免费在线观看| 欧美老妇交乱视频在线观看 | 国产在线无码一区二区三区| 综合久久久久6亚洲综合| 一本久道久久丁香狠狠躁| 免费无码av片在线观看播放| 国产日韩成人内射视频| 中文字幕一二区中文字幕| 蜜桃一区二区三区视频| 被黑人猛躁10次高潮视频| 天天狠天天透天干天天| 自拍情爱视频在线观看| 丰满少妇人妻久久久久久| 内射后入在线观看一区| 国产优质女主播在线观看| 在线精品首页中文字幕亚洲| 香港三级精品三级在线专区| 亚洲亚洲网站三级片在线| 国成成人av一区二区三区| 国产精品二区一区二区aⅴ污介绍 少妇伦子伦情品无吗 | 亚洲成人日韩| 少妇久久高潮不断免费视频| 麻豆文化传媒精品一区观看| 亚洲自偷自拍熟女另类| 国产亚洲精品国看不卡| 女同三级伦理在线观看| 40岁大乳的熟妇在线观看| 久久波多野结衣av|