潘雷雷，姜亞男，周文杰，姜平平，吳蘭榮，陳傲，朱虹，隋炯明，王晶珊，喬利仙

高油酸花生新品種宇花91的選育

潘雷雷1,2，姜亞男1，周文杰1，姜平平1,2，吳蘭榮3，陳傲4，朱虹1，隋炯明1，王晶珊1，喬利仙1

1 青島農(nóng)業(yè)大學(xué) 農(nóng)學(xué)院 山東省旱作農(nóng)業(yè)技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東 青島 266109 2 青島農(nóng)業(yè)大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院山東省高校植物生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東 青島 266109 3 青島市種子站，山東 青島 266071 4 湛江市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，廣東 湛江 524094

宇花91是青島農(nóng)業(yè)大學(xué)選育的高油酸花生新品種。以普通油酸含量品種魯花11號(hào)為母本，F(xiàn)435型高油酸花生品種開農(nóng)1715為父本配置雜交組合。利用PCR產(chǎn)物測序法篩選獲得F1代真雜種，對F2代單株提取葉片基因組DNA，利用PCR產(chǎn)物測序法篩選基因型純合的單株個(gè)體。對當(dāng)代收獲的單株籽粒利用近紅外法多粒模型測定油酸、亞油酸含量，篩選油酸含量在80%以上且油酸亞油酸比值在10.0以上的單株種植成株行，隨后利用系譜法進(jìn)行選擇育種。宇花91莢果為普通型小果，網(wǎng)紋較細(xì)、較明顯，百果重148.06 g，百仁重63.31 g，果皮薄，出米率75.15%。籽仁長橢圓形，種皮粉紅色、無裂紋，內(nèi)種皮白色。籽仁蛋白質(zhì)含量26.57%，脂肪含量52.72%，油酸含量80.40%，亞油酸含量2.50%，棕櫚酸含量5.57%，油酸亞油酸比值32.16。苗期生長旺盛，封壟早，結(jié)果集中，中抗葉斑病和青枯病。2017年參加山東省夏播多點(diǎn)試驗(yàn)，平均莢果產(chǎn)量215.79 kg/667 m2，比對照花育20號(hào)增產(chǎn)15.27%；平均籽仁產(chǎn)量157.33 kg/667 m2，比對照花育20號(hào)增產(chǎn)21.64%。2018年通過國家花生品種登記，登記號(hào)：GPD花生 (2018) 370210，適于在山東花生產(chǎn)區(qū)種植。

花生，高油酸，宇花91，F(xiàn)435，標(biāo)記輔助選擇

花生是重要的食用植物油和蛋白質(zhì)來源，普通花生籽仁主要含有8種脂肪酸，油酸含量一般為40%–50%，亞油酸含量30%–40%，棕櫚酸含量10%–12%[1-2]，這3種脂肪酸約占到總脂肪酸含量的92%[3]。

高油酸花生則是指油酸含量在70%以上，亞油酸含量低于7.7%，油酸亞油酸比值大于等于10[4-6]，同時(shí)棕櫚酸含量可降至5%–7%。油酸含量高低是評(píng)價(jià)植物油品質(zhì)的重要指標(biāo)，油酸含量越高，抗氧化能力越強(qiáng)，不易變質(zhì)而利于儲(chǔ)存，可延長貨架壽命[1-2,4]。同時(shí)高油酸可以有選擇性地降低對人體健康有害的低密度膽固醇 (Low-density lipoprotein，LDL)，同時(shí)不破壞對人體有利的高密度膽固醇 (High-density lipoprotein，HDL)，從而減緩動(dòng)脈粥樣硬化，有效預(yù)防冠心病等心腦血管疾病的發(fā)生，具有非常重要的保健功能與價(jià)值[1-2,4]。高油酸花生已成為國際社會(huì)花生生產(chǎn)國的主要育種目標(biāo)[7-8]，我國的高油酸花生育種起步較晚，目前總體數(shù)量有限，而且產(chǎn)量潛力和綜合抗性水平有待進(jìn)一步提升[9]。因此盡快選育高油酸花生新品種已經(jīng)成為目前我國花生品質(zhì)改良育種的重要目標(biāo)。

目前，在花生中廣泛應(yīng)用的高油酸突變材料為F435型突變體[10]，包含ahFAD2A的ORF-448 bp G/A替換和ahFAD2B的ORF-441_442的“A”插入，結(jié)果導(dǎo)致FAD2酶部分或全部失活，阻礙了油酸向亞油酸的轉(zhuǎn)化過程而產(chǎn)生了高油酸性狀[10-11]。徐平麗等[12]將RNAi干擾載體轉(zhuǎn)入花生，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因植株種子中FAD2基因轉(zhuǎn)錄水平下調(diào)，花生籽粒油酸含量顯著提高，亞油酸含量顯著下降。劉華等[13]研究發(fā)現(xiàn)在高油酸花生突變體種子中FAD2B的表達(dá)量顯著低于FAD2A，推測花生中FAD2B表達(dá)量降低利于提高油酸含量。開農(nóng)1715為河南省開封市農(nóng)林科學(xué)研究院選育的F435型高油酸花生品種，同時(shí)含有AhFAD2a、AhFAD2b基因位點(diǎn)，油酸含量75.60%，亞油酸含量7.55%，油酸亞油酸O/L比值為10.88[14]。魯花11號(hào)為山東省主要栽培的大花生品種，油酸含量55%，油酸亞油酸O/L比值大于2.0[15]。本研究以魯花11號(hào)為母本，開農(nóng)1715為父本配置雜交組合，利用PCR產(chǎn)物測序法檢測篩選F1代真雜種及F2代基因型純合的單株個(gè)體。隨后利用系譜法進(jìn)行選育，并利用近紅外掃描分析法及氣相色譜法測定油酸含量篩選表型，最終選育到小果型高油酸花生新品種宇花91。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 植物材料

普通花生品種魯花11號(hào)，油酸含量55%，由青島農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院花生研究中心保存。高油酸花生品種開農(nóng)1715，油酸含量75.60%，由河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院經(jīng)濟(jì)作物研究所黃冰艷博士提供。

1.1.2 PCR擴(kuò)增引物

使用引物對F0.7/R3同時(shí)對FAD2A/2a和FAD2B/2b位點(diǎn)進(jìn)行擴(kuò)增[16]，擴(kuò)增產(chǎn)物測序后可通過讀測序峰圖得知在這兩個(gè)位點(diǎn)的堿基序列，進(jìn)而判斷基因型，用于對兩個(gè)雜交親本的基因型檢測。使用引物bF19/1056R對FAD2B/2b位點(diǎn)進(jìn)行PCR擴(kuò)增[17]，對雜交后代B位點(diǎn)進(jìn)行鑒定和選擇。引物序列及相應(yīng)擴(kuò)增產(chǎn)物大小列于表1。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 親本基因型鑒定

由于FAD2A/2a位點(diǎn)中“A”和“a”普遍存在于非高油酸含量的栽培種花生中，而且有時(shí)以雜合狀態(tài)存在，故在雜交之前需要首先鑒定親本的基因型。采用SDS法提取親本魯花11號(hào)及開農(nóng)1715基因組DNA，利用F0.7/R3 引物對進(jìn)行擴(kuò)增[16]。反應(yīng)體系及擴(kuò)增條件參照于明洋的方法[1]。總反應(yīng)體積25 μL，包括DNA模板20 ng，10×PCR緩沖液2.5 μL，dNTPs (10 mmol/L) 2 μL，正反向引物(10 μmol/L)各1 μL，DNA polymerase (5 U/L) 0.5 μL。擴(kuò)增程序?yàn)椋?4 ℃ 5 min；94 ℃ 30 s，61 ℃ 40 s，72 ℃ 50 s，33個(gè)循環(huán)；72 ℃ 10 min。擴(kuò)增產(chǎn)物送生工生物工程 (上海) 股份有限公司進(jìn)行測序檢測變異位點(diǎn)的堿基序列，確定親本基因型。

1.2.2 雜交及F1、F2分子標(biāo)記輔助選擇

2013年5月播種父母本材料于花生雜交池，以魯花11號(hào)為母本、開農(nóng)1715為父本雜交；9月收獲F1雜交種，切取遠(yuǎn)胚端小片子葉 (約10 mg) 提取基因組DNA[18]，利用bF19/1056R引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增[17]。反應(yīng)總體積20 μL，含模板DNA 2 μL，10×PCR緩沖液2 μL、dNTPs (各4 pmol)、引物(各50 ng)、酶1 U。PCR循環(huán)參數(shù)為：94 ℃ 1.5 min，30個(gè)循環(huán)(94 ℃ 30 s，56 ℃ 30 s，72 ℃ 60 s)，72 ℃ 5 min。擴(kuò)增產(chǎn)物送生工生物工程 (上海) 股份有限公司進(jìn)行測序，選擇基因型為Bb的F1真雜種；2013年冬季播種F1于海南省三亞市繁殖，得到F2，2014年3月收獲后，按同樣方法進(jìn)行測序驗(yàn)證基因型，篩選基因型為bb的F2籽粒。

表1 用于擴(kuò)增FAD2A/2B及FAD2B/2b位點(diǎn)的引物及其序列

1.2.3 F3代表型選擇

2014年5月將篩選獲得的基因型為bb的F2籽粒播種于青島農(nóng)業(yè)大學(xué)試驗(yàn)農(nóng)場，單株收獲得到F3。利用BRUKER Matrlx-1近紅外光譜儀掃描測定光譜[19]，并用多?；旌夏Ｐ头治龃_定每一單株油酸含量、亞油酸含量，計(jì)算油酸/亞油酸比值。篩選油酸含量在80%以上且油酸/亞油酸比值大于10的單株。

1.2.4 系譜法選育

2014年冬季海南種植F3，選擇優(yōu)良單株收獲得到F4；2015年青島種植F4，除繼續(xù)選擇優(yōu)良單株外，對農(nóng)藝性狀表現(xiàn)較好的株行淘汰不良單株及差異較大單株后混收成F5株系；2015年海南冬季繁殖加代獲得F6；2016年青島進(jìn)行DUS測試及產(chǎn)量鑒定，篩選到1個(gè)高產(chǎn)株系，命名為宇花91。

1.2.5 DUS測試及產(chǎn)量比較

2017年委托農(nóng)業(yè)部植物新品種測試 (濟(jì)南)分中心進(jìn)行DUS測試，并送山東省花生新品種登記試驗(yàn)組進(jìn)行多點(diǎn)比較試驗(yàn)。當(dāng)年收獲后送農(nóng)業(yè)部油料及制品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測試中心 (武漢) 進(jìn)行脂肪酸含量的精確測定。

2 結(jié)果與分析

2.1 親本基因型鑒定

FAD2A/2a以及FAD2B/2b基因序列見表2。對親本魯花11號(hào)及開農(nóng)1715測序結(jié)果表明，魯花11號(hào)在FAD2B/2b位點(diǎn)未檢測到插入的AA位點(diǎn)，為FAD2B/2B純合型BB；在FAD2A/2a位點(diǎn)檢測到純合的AA突變位點(diǎn)[16]，為FAD2a/2a純合型aa (圖1A)。開農(nóng)1715在FAD2B/2b位點(diǎn)檢測到純合的插入位點(diǎn)AA，在FAD2A/2a位點(diǎn)檢測到純合的AA突變位點(diǎn) (圖1B)，其基因型為純合aabb位點(diǎn)。

2.2 雜交種F1代及自交F2代基因型檢測

由于兩個(gè)雜交親本在FAD2A/2a位點(diǎn)均為純合，故只需對FAD2B/2b位點(diǎn)進(jìn)行檢測鑒定。以雜交種F1基因組DNA為模板，利用bF19/1056R 引物對進(jìn)行PCR擴(kuò)增[17]。假雜種基因型與母本魯花11號(hào)相同，F(xiàn)AD2B/2b位點(diǎn)顯性純合BB；真雜種基因型為Bb，測序峰圖顯示結(jié)果如圖2所示。自交F2代應(yīng)分離出BB，Bb以及bb基因型。

圖1 雜交親本魯花11號(hào)和開農(nóng)1715在FAD2位點(diǎn)的測序結(jié)果

表2 FAD2A/2a以及FAD2B/2b基因序列

Note: Mutant base was displayed in underline.

2.3 F3代單株表型選擇

由于PCR擴(kuò)增存在一定比例的假陽性，所以并不能保證F2代個(gè)體的基因型檢測準(zhǔn)確無誤。因此對F2代單株所收獲的F3代單株籽粒進(jìn)行了近紅外掃描，測定了油酸、亞油酸含量，并篩選出油酸含量在80%以上的單株。如表3所示，來源于F2代單株Q3-F2-1、Q3-F2-2、Q3-F2-3、Q3-F2-4、Q3-F2-6、Q3-F2-8的后代F3代單株，油酸含量均在75%以上，油酸/亞油酸比值均在7.0以上。說明F2代單株基因型檢測均正確無誤，如果F2代單株基因型檢測有誤，則F3代會(huì)出現(xiàn)明顯的分離，不同單株之間的油酸含量應(yīng)該會(huì)表現(xiàn)高油酸含量與低油酸含量的明顯分離。

圖2 F1真雜種測序結(jié)果

表3 F3代單株油酸、亞油酸含量的近紅外分析結(jié)果

Note: in order to save space, the acid in this table has been omitted.

2.4 初選獲得宇花91

宇花91最初來源于F4代篩選獲得一個(gè)小果單株，在F5代株行基本穩(wěn)定無明顯分離，即混收成株系 (圖3)。2016年青島鑒定及2017年農(nóng)業(yè)部植物新品種測試 (濟(jì)南) 分中心DUS測試結(jié)果表明該材料具有新品種所具有的特異性、一致性和穩(wěn)定性 (測試編號(hào)JN17HS0005A，測試標(biāo)準(zhǔn)NY/T 2237-2012花生)。經(jīng)農(nóng)業(yè)部油料及制品質(zhì)量監(jiān)督檢測測試中心 (武漢) 檢測(表4)，油酸含量80.40%，亞油酸含量2.50%，油酸/亞油酸比值32.16。完全符合國際上高油酸花生標(biāo)準(zhǔn) (油酸≥75%以上，油酸/亞油酸為比值≥10.00)[4]。棕櫚酸含量5.57%，遠(yuǎn)低于普通花生品種中棕櫚酸含量約為9%–10%的范圍。

2.5 宇花91品種特點(diǎn)

宇花91莢果為普通型小果，網(wǎng)紋較細(xì)、較明顯 (圖3)，百果重148.06 g，百仁重63.31 g，果皮薄，出米率75.15%。籽仁長橢圓形，種皮粉紅色、無裂紋，內(nèi)種皮白色。籽仁蛋白質(zhì)含量26.57%，脂肪含量52.72%，油酸含量80.40%，亞油酸含量2.50%，棕櫚酸含量5.57%，油酸亞油酸比值32.16。苗期生長旺盛，封壟早，結(jié)果集中，中抗葉斑病和青枯病。2017年參加山東省夏播多點(diǎn)試驗(yàn)，平均莢果產(chǎn)量215.79 kg/667 m2，比對照花育20號(hào)增產(chǎn)15.12%；平均籽仁產(chǎn)量157.33 kg/667 m2，比對照花育20號(hào)增產(chǎn)21.66 % (表5)。2018年通過國家花生品種登記，登記號(hào)為GPD花生 (2018) 370210，適于在山東花生產(chǎn)區(qū)種植。2018在平度繁種試驗(yàn)田實(shí)收358.85 kg/667 m2。

3 討論

高油酸花生因其具有較強(qiáng)的抗氧化性，以及對心腦血管疾病的延緩和預(yù)防作用而備受關(guān)注和青睞，成為目前國內(nèi)外花生育種的重要目標(biāo)和方向[20]。我國高油酸花生雖然起步較晚，但是發(fā)展較快，目前已登記品種約80多個(gè)，大部分為F435型位點(diǎn)突變。目前針對F435型開發(fā)的分子標(biāo)記檢測方法有基于特異引物擴(kuò)增的AS-PCR法[21-22]、基于酶切片段差異的CAPS檢測法[23]、基于RT-PCR技術(shù)的Man探針法[24]、基于PCR擴(kuò)增產(chǎn)物測序法[2,25]以及基于高通量分析的競爭特異性等位基因PCR (KASP) 檢測法[26]。如此多樣而有效的分子標(biāo)記輔助選擇為高油酸育種的快速選育提供了有效的方法和技術(shù)，尤其KASP技術(shù)因其具有低成本和高通量的優(yōu)勢特點(diǎn)，適于在育種上廣泛使用?；诮t外技術(shù)的表型分析實(shí)現(xiàn)了在育種過程中快速高效的無損傷選擇，氣相色譜分析法為高油酸材料的精確鑒定提供了保證。

表4 高油酸花生品種宇花91不同脂肪酸含量檢測結(jié)果

Note: the detection limit of fatty acid is 0.050%, and the detection result of fatty acid is relative content.

表5 宇花91夏播產(chǎn)量比較結(jié)果 (2017)

圖3 宇花91單株、莢果及籽仁照片

F435型花生高油酸性狀受FAD2A/2a和FAD2B/2b兩對基因控制。第一對基因FAD2A用“A”表示，在ORF-448 bp 處存在堿基“G”，“G”突變?yōu)椤癆”后，變成為等位基因FAD2a形式，用“a” 表示。第二對基因FAD2B用“B”表示，在ORF-441_442處插入堿基“A”后，突變?yōu)榈任换騀AD2b形式，用“b”表示。A/a位于栽培花生的A染色體組，B/b位于栽培花生的B染色體組，A/a 與B/b具有較高的同源性。對高油酸有貢獻(xiàn)的為隱性基因“a”和“b”，而且“b”的貢獻(xiàn)率遠(yuǎn)大于“a”[12-13]。在普通油酸含量的栽培種花生中自然存在FAD2A和FAD2a等位基因[27]。有的材料以純合狀態(tài)存在 (AA或aa)，有的材料以雜合狀態(tài)存在 (Aa)。而ahFAD2B/2b在普通油酸含量的栽培種花生中只存在FAD2B (BB)，而不存在FAD2b (bb)。FAD2A/2a位點(diǎn)純合的普通油酸花生 (AABB和aaBB) 與高油酸突變體雜交 (aabb)，F(xiàn)2代會(huì)分別出現(xiàn)15∶1和3∶1的分離比例。如果 FAD2A/2a以雜合狀態(tài)存在，由于在長期的種植過程中該位點(diǎn)未經(jīng)選擇純化，在該品種群體中會(huì)出現(xiàn)AA、aa和Aa 3種基因型。因此在選擇雜交親本之前需要純化親本，篩選出基因型為aa的個(gè)體，提高雜交后代材料中高油酸個(gè)體出現(xiàn)的頻率，提高選擇效果。因此在選擇雜交親本時(shí)，應(yīng)盡可能地優(yōu)先選擇aa基因型的材料，以提高雜交后代的選擇效率。目前國內(nèi)普通花生主要推廣品種的油酸含量普遍在55%以下，魯花11號(hào)油酸含量達(dá)到55%，且油酸亞油酸比值大于2.0。經(jīng)PCR產(chǎn)物測序鑒定在FAD2A/2a位點(diǎn)為突變純合體aa，所以在雜交選育過程中只需要選擇FAD2b一個(gè)位點(diǎn)即可，大大提高了選擇幾率和選擇效果。

高油酸花生除了F435突變型外，還存在M2-225和C458兩種化學(xué)誘變產(chǎn)生的突變體，分別是在FAD2B基因起始密碼子后997 bp和665 bp處存在205 bp微型反向重復(fù)轉(zhuǎn)座元件 (Miniature inverted-repeat transposable element，MITE)[28]。Kolikonda等使用引物對bF19/R1進(jìn)行擴(kuò)增測序?qū)υ摬迦胪蛔冞M(jìn)行鑒定[29]。張新友等開發(fā)了針對C458型FAD2B MITE突變的功能標(biāo)記，并對兩個(gè)雜交組合“遠(yuǎn)雜9102 × wt09-0023”和“阜花12號(hào) × wt09-0023”后代個(gè)體進(jìn)行基因型檢測和表型鑒定，結(jié)果表明BB、Bb、bb 3種不同基因型油酸含量呈逐漸升高的趨勢[30]。另外還有GA-T2636M、FR596型等不同突變類型[4]。為了盡可能保持高油酸花生的遺傳多樣性，在育種過程中要注意選擇不同突變類型來源的親本作雜交親本，避免遺傳單一性對高油酸花生造成的不利影響，最大程度地保持我國高油酸花生的競爭能力。

致謝：感謝瑪氏北京溫若愚博士、瑪氏北美Victor Nwosu博士、美國農(nóng)業(yè)部農(nóng)業(yè)研究中心Guo Baozhu教授在項(xiàng)目執(zhí)行過程中所提供的幫助，在此表示感謝。

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Breeding on a new peanut variety Yuhua91 with high oleic acid content

Leilei Pan1,2, Yanan Jiang1, Wenjie Zhou1, Pingping Jiang1,2, Lanrong Wu3, Ao Chen4, Hong Zhu1, Jiongming Sui1, Jingshan Wang1, and Lixian Qiao1

1 Dry-land Farming Technology Laboratory, College of Agronomy, Qingdao Agricultural University, Qingdao 266109, Shandong, China 2 Key Laboratory of Plant Biotechnology in Universities of Shandong Province, College of Life Sciences, Qingdao Agricultural University, Qingdao 266109, Shandong, China 3 Qingdao Seed Station, Qingdao 266071, Shandong, China 4 Zhanjiang Institute of Agricultural Sciences, Zhanjiang 524094, Guangdong, China

Yuhua91 is a new peanutvariety with high oleic acid content bred by Qingdao Agricultural University. The crossing was conducted with Luhua11 as female parent and with Kainong1715, an F435-type variety with high oleic acid content as male parent. The real F1hybrids were screened by sequencing on PCR amplification products, and those homozygotes with bb genotype in F2populations were screened by the same sequencing method as above. The content of oleic and linoleic acid was measured on the kernels harvested from F2single plants by near infrared ray method, and those kernels whose content of oleic was above 80%, oleic and linoleic acid ratio was above 10.0 were obtained and planted into a row, with pedigree method for subsequent selection breeding. Yuhua91 has some characters of small pod, light and obvious pod texture, 148.06 g per 100 pods, 63.31 g per 100 kernels, 75.15% shelling percentage, long elliptic seed kernel, pink seed coat, without crack, white endotesta. Its content of protein, oil, oleic acid, linoleic acid and palmitic acid was 26.57%, 52.72%, 80.40%, 2.50% and 5.57% respectively. Yuhua91 has other characters of strong seedlings, compact pod areas, and moderate resistance to leaf spot disease and bacterial wilt. Average pod yield is 215.79 kg per Mu, 15.27% higher than the control variety Huayu20. Average seed kernels yield is 157.33 kg per Mu, 21.64% higher than the control variety Huayu20. Yuhua 91 has been registered on department of agriculture in 2018, and the registration No. is GPD peanut (2018) 370210, fit for growing in Shandong Province.

peanut (L.), high oleic acid, Yuhua91, F435, marker assisted selection (MAS)

January 23, 2019;

March 20, 2019

Shandong Province Science and Technology Development Plan Project (No. 2018GNC111014), Key Laboratory of Biology and Genetic Improvement of Oil Crops, Ministry of Agriculture, Open Project Fund (No. KF2018008), the Mars-China High Oleic Acid Peanut Breeding Project.

Lixian Qiao. Tel: +86-32-86080447; Fax: +86-32-86080447; E-mail: lxqiao73@163.com

山東省重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃 (No. 2018GNC111014)，農(nóng)業(yè)部油料作物生物學(xué)與遺傳育種重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開放課題基金 (No. KF2018008)，“瑪氏-中國花生高油酸育種計(jì)劃”項(xiàng)目資助。

2019-03-28

http://kns.cnki.net/kcms/detail/11.1998.Q.20190327.1030.003.html

潘雷雷, 姜亞男, 周文杰, 等. 高油酸花生新品種宇花91的選育.生物工程學(xué)報(bào), 2019, 35(9): 1698–1706.

Pan LL, Jiang YN, Zhou WJ, et al. Breeding on a new peanut variety Yuhua91 with high oleic acid content. Chin J Biotech, 2019, 35(9): 1698–1706.

(本文責(zé)編 陳宏宇)