徐 濱 柳慶坤 任小榮 齊永秀 李 莉 李 珂

1.藥學(xué)院，山東第一醫(yī)科大學(xué)(山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院)，山東 泰安 271016； 2.泰安市食品藥品檢驗(yàn)檢測中心，山東 泰安 271000

中藥中微量元素的研究發(fā)展迅速[1]，已有研究表明,中藥的藥效可能與其微量元素的種類和含量、存在狀態(tài)以及配位化合物有一定的關(guān)系[2]。天然牛黃為一種常用名貴中藥，具有鎮(zhèn)靜抗驚、清心開竅，息風(fēng)解熱、消炎解毒等作用，臨床療效顯著。對其研究多集中于天然牛黃與各種替代品(如:人工培植牛黃、人工合成牛黃、牛額齒根等)的比較上。由于天然牛黃的藥源十分緊缺，而社會上對牛黃的需求量大，長期以來藥學(xué)工作者都在努力尋找天然牛黃的替代品。山東第一醫(yī)科大學(xué)相關(guān)科研人員研制了一種新的牛黃替代品酶促牛黃[3-6]。酶促牛黃中所含無機(jī)元素以及與天然牛黃的無機(jī)元素對比分析研究尚無報道，本實(shí)驗(yàn)擬對酶促牛黃和天然牛黃進(jìn)行鉻和鉛元素對比分析研究。

本實(shí)驗(yàn)采用石墨爐原子吸收分光光度法建立了牛黃中鉻和鉛的含量測定方法，分離效率高，專屬性強(qiáng)，靈敏度高，能夠?yàn)槊复倥｜S的研發(fā)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 儀器與試劑

1.1 儀器

Sartorious BT 25S型1/100000電子分析天平(北京賽多利斯儀器有限公司)，KQ-500DE型超聲波清洗器(昆山超聲儀器有限公司)，AP-01P VACUUM PUMP(天津Autoscience公司)，溶劑過濾器(天津Autoscience公司)，Z2000原子吸收分光光度計，遠(yuǎn)紅外快速恒溫干燥箱，空氣壓縮機(jī)，元素Cr、Pb空心陰極燈及玻璃儀器。

1.2 材料和試劑

天然牛黃(山東省藥材公司)，酶促牛黃(山東第一醫(yī)科大學(xué)自制)，硝酸(優(yōu)級純)，元素Cr、Pb的標(biāo)準(zhǔn)儲備液(濃度均為500 μg·mL-1)。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 對照品溶液的配制

2.1.1鉻對照品溶液的配制

分別吸取鉻標(biāo)準(zhǔn)儲備液置于10 mL容量瓶中，加1%硝酸稀釋至刻度，配制成系列濃度為1.00、5.00、10.00、30.00、50.00 μg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2.1.2鉛對照品溶液的配制

分別吸取鉛標(biāo)準(zhǔn)儲備液置于10 mL容量瓶中，加1%硝酸稀釋至刻度，配制成系列濃度為10.00、50.00、120.00、180.00、 300.00 μg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2.2 供試品溶液的制備

2.2.1酶促牛黃供試品溶液

稱取酶促牛黃約1.0 g，精密稱定，置瓷坩堝內(nèi)于馬弗爐中420 ℃烘干、炭化、灰化、灼燒5 h，用1%硝酸溶液溶解殘渣，定容于50 mL容量瓶即得酶促牛黃供試品溶液。

2.2.2天然牛黃供試品溶液

稱取天然牛黃約1.0 g，精密稱定，置瓷坩堝內(nèi)于馬弗爐中420 ℃烘干、炭化、灰化、灼燒5 h，用1%硝酸溶液溶解殘渣，定容于50 mL容量瓶即得天然牛黃供試品溶液。

2.3 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.3.1石墨爐原子吸收分光光度法測定的儀器條件見表1。

表1 石墨爐原子吸收分光光度法測定的儀器條件

2.3.2繪制鉻標(biāo)準(zhǔn)曲線

吸取“2.1.1”項(xiàng)下系列標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，配制成系列濃度為1.00、5.00、10.00、30.00、50.00 μg·L-1的鉻對照品溶液。進(jìn)樣測定，得鉻的回歸方程為y=0.008 9x+0.028 1(r=0.999 0)，表明Cr在1.00～50.00 μg·L-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3.3繪制鉛標(biāo)準(zhǔn)曲線

吸取“2.1.2”項(xiàng)下系列標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，配制成系列濃度為10.00、50.00、120.00、180.00、300.00 μg·L-1的鉛對照品溶液。進(jìn)樣測定，得鉛的回歸方程為y=0.002 0x+0.008 9(r=0.999 1)，表明Pb在10.00～300.00 μg·L-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1精密度試驗(yàn)

分別取Cr、Pb對照品溶液重復(fù)進(jìn)樣6次，結(jié)果Cr、Pb吸光度的RSD分別為2.12%、2.17%，表明本法的精密度良好。

2.4.2穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一酶促牛黃供試品溶液，于室溫分別放置0、1、2、3、6、12、24 h后進(jìn)樣測定，測得Cr、Pb吸光度的RSD分別為2.61%、2.32%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.4.3重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批酶促牛黃樣品，按照“2.2.1”方法制備6份供試品溶液，進(jìn)樣測定，結(jié)果測得Cr、Pb的RSD分別為2.53%、2.34%，表明本法的重復(fù)性良好。

2.4.4回收率試驗(yàn)

分別取適量酶促牛黃樣品6份，精密稱定，分別加入Cr、Pb的標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，測定其回收率。結(jié)果見表2，回收率均在規(guī)定范圍之內(nèi)，表明本法的準(zhǔn)確度良好。

表2 加標(biāo)回收率測定結(jié)果(n=6)

2.5 樣品含量測定

按“2.2”項(xiàng)下方法分別制備酶促牛黃和天然牛黃供試品溶液，進(jìn)樣、測定，按“2.3.2”和“2.3.3”項(xiàng)下標(biāo)準(zhǔn)曲線計算兩種牛黃中Cr、Pb的含量，結(jié)果見表3。

表3 樣品含量測定結(jié)果(n=3，mg)

3 討 論

3.1 樣品前處理方法的選擇

常用的樣品前處理方法包括干法灰化和濕法消解兩種。干法灰化具有以下優(yōu)點(diǎn)：干法灰化使用程序升溫的爐子，將樣品放于灰化器皿中，灰化可自動完成；酸用量少，適用于樣品中微量元素含量測定；殘渣中有機(jī)成分極少，適用于多種含量測定方法如AAS、ASV、ICP-MS等[7-9]。濕法消解法是化學(xué)方法消解,用的是強(qiáng)氧化劑氧化樣品,消解比較完全,有機(jī)物完全分解,形成無機(jī)鹽,消化液無色澄清透明。但是,在消化過程中形成大量酸霧，產(chǎn)生氣溶膠,易使被測的元素丟失,結(jié)果偏低[10]。不同的前處理方法存在著各自的優(yōu)缺點(diǎn)，選用何種處理方法，取決于被測元素的性質(zhì)。本實(shí)驗(yàn)采用程序升溫干法灰化法對樣品進(jìn)行處理，一方面可減少這些試劑造成的干擾；另一方面，程序升溫灰化法可以準(zhǔn)確控制烘干溫度、炭化溫度和灰化溫度，減少樣品中鉛的損失，保證測量的準(zhǔn)確性[7]，還可以減少分析人員受到各種酸液的危害，減少對環(huán)境的污染。

3.2 灰化溫度的選擇

高溫灰化有機(jī)物時,如果溫度過高(超過550 ℃)會造成某些重金屬元素(如鎘、鉛、鋅、錫等)的逸散損失,溫度過低又會導(dǎo)致灰化不完全[7],一般選擇的灰化溫度為400～550℃,本實(shí)驗(yàn)中采用的灰化溫度為420 ℃?；一璧臅r間也因樣品的性質(zhì)而定,灰化時間過短,無法使樣品灰化完全而造成損失,灰化時間太長,則會影響樣品處理的效率。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)在420 ℃溫度下灰化5 h即能使樣品完全灰化。因此采用干法灰化處理天然牛黃和酶促牛黃所選擇的灰化溫度為420 ℃,灰化時間5 h。

3.3 試劑的選擇

測定無機(jī)元素，尤其采用石墨爐原子吸收分光光度法，普通試劑本底高，采用優(yōu)級純硝酸試劑。