蔡曉芳，張曉林，周建頻，張東玲，劉賢德

(1 集美大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部東海海水健康養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，福建 廈門(mén)361021 2 集美大學(xué)航海學(xué)院，福建 廈門(mén)361021)

大黃魚(yú)(Larimichthyscrocea)應(yīng)激性極強(qiáng)，在運(yùn)輸過(guò)程中具有較高死亡率，市場(chǎng)上銷(xiāo)售的大黃魚(yú)以冰鮮居多[1]，尤其是離產(chǎn)地較遠(yuǎn)地區(qū)少有鮮活的大黃魚(yú)銷(xiāo)售，因此，大黃魚(yú)的活體運(yùn)輸越來(lái)越引起人們的重視。目前，在魚(yú)類(lèi)活體運(yùn)輸中常使用麻醉劑如MS-222[2-4]、丁香酚[5-7]等，以降低魚(yú)體的呼吸和新陳代謝水平，減少運(yùn)輸過(guò)程中魚(yú)體受到的各種人為損傷，提高存活率[8-9]，但化學(xué)麻醉劑會(huì)造成一定的食品安全問(wèn)題[10]。低溫?；钸\(yùn)輸技術(shù)因具有無(wú)毒害、成本低、存活率高等優(yōu)點(diǎn)，正逐漸成為水產(chǎn)品活體運(yùn)輸?shù)闹饕厔?shì)[11-12]，研究開(kāi)發(fā)安全、高效、經(jīng)濟(jì)的大黃魚(yú)冰溫保活技術(shù)具有很大的發(fā)展?jié)摿鸵欢ǖ慕?jīng)濟(jì)效益。

魚(yú)類(lèi)等變溫動(dòng)物都有一個(gè)能夠區(qū)分生死的溫度，稱為臨界溫度，水產(chǎn)品體內(nèi)組織水分開(kāi)始凍結(jié)的溫度稱為凍結(jié)點(diǎn)[13]，從凍結(jié)點(diǎn)到臨界溫度的范圍稱為生態(tài)冰溫[14]。在生態(tài)冰溫范圍內(nèi)，通過(guò)適當(dāng)?shù)慕禍厥刽~(yú)體進(jìn)入半休眠或完全休眠狀態(tài)，以緩解運(yùn)輸過(guò)程中產(chǎn)生的應(yīng)激反應(yīng)，最終達(dá)到高效活體運(yùn)輸?shù)哪康摹１狙芯恳责B(yǎng)殖大黃魚(yú)為對(duì)象，初步探究影響生態(tài)冰溫保活技術(shù)的因素，找出最優(yōu)條件，以期延長(zhǎng)其保活時(shí)間，進(jìn)而提高其運(yùn)輸存活率。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗(yàn)用魚(yú)為養(yǎng)殖大黃魚(yú)，來(lái)自福建省寧德市蕉城區(qū)三都澳海區(qū)。要求規(guī)格均一、體表無(wú)傷、生長(zhǎng)狀況良好，體質(zhì)量(246.72 ± 13.37)g，體長(zhǎng)(21.27 ± 2.12)cm，從養(yǎng)殖海區(qū)運(yùn)至集美大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院養(yǎng)殖場(chǎng)進(jìn)行暫養(yǎng)，其間正常投喂人工飼料并定期清除糞便及殘飼。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 大黃魚(yú)生態(tài)冰溫的確定

將5條大黃魚(yú)放入盛有干凈海水的塑料箱中，用制冰機(jī)自制的碎冰塊(外包裹密封袋)作為降溫源，按照張長(zhǎng)峰等[15]的降溫速率進(jìn)行緩慢降溫處理(表1)，觀察并記錄大黃魚(yú)在不同溫度下的呼吸頻率和活動(dòng)狀況，以其開(kāi)始出現(xiàn)呼吸極不規(guī)律、甚至觀察不到鰓呼吸但魚(yú)尚未死亡時(shí)的溫度作為大黃魚(yú)的臨界溫度[16]。另取5條大黃魚(yú)通過(guò)擊打腦部致死后，將智能溫度記錄儀的測(cè)溫插頭插入魚(yú)體背部肌肉下約深1 cm處，固定后將魚(yú)體放置于-20 ℃的恒溫箱內(nèi)，記錄儀顯示器置于恒溫箱外部，每隔5 min記錄一次溫度，繪制肌肉凍結(jié)曲線圖。當(dāng)從曲線上觀察到溫度降低至0 ℃以下后，出現(xiàn)溫度變化緩慢甚至停止的情況，此時(shí)的溫度即為凍結(jié)點(diǎn)[17]。由上述臨界溫度和凍結(jié)點(diǎn)測(cè)定結(jié)果及生態(tài)冰溫的定義確定生態(tài)冰溫范圍。

表1 不同的升降溫區(qū)間與速率

1.2.2 大黃魚(yú)休眠狀態(tài)及?；顣r(shí)間的確定

通過(guò)逐漸降溫使大黃魚(yú)表現(xiàn)為呼吸極不規(guī)律、呼吸微弱、偶爾咧鰓，此時(shí)大黃魚(yú)即處于休眠狀態(tài)。將處于休眠狀態(tài)的大黃魚(yú)放入充氧的塑料袋，置于恒溫恒濕箱內(nèi)進(jìn)行保活試驗(yàn)，當(dāng)其中有大黃魚(yú)表現(xiàn)為無(wú)呼吸跡象、不再偶爾咧鰓，且對(duì)外界刺激無(wú)反應(yīng)時(shí)，將其從塑料密封袋中取出放入水箱中復(fù)水(同組5條魚(yú)逐一復(fù)水)，水箱中海水溫度與保活試驗(yàn)的溫度相同，然后按表1中的速率對(duì)其進(jìn)行緩慢的升溫處理，觀察大黃魚(yú)存活狀況，若同組的5條大黃魚(yú)全部存活，則將這5條魚(yú)進(jìn)行復(fù)水處理前的平均保存時(shí)間定義為本組?；顣r(shí)間。

1.2.3 魚(yú)水質(zhì)量比對(duì)大黃魚(yú)冰溫?；顣r(shí)間的影響

將處于低溫休眠狀態(tài)的大黃魚(yú)放入塑料密封袋中，設(shè)置密封袋內(nèi)的魚(yú)水質(zhì)量比分別為4∶1、2∶1、1∶1、1∶2、1∶4和1∶6，充氧密封后置于7 ℃的恒溫恒濕箱內(nèi)進(jìn)行有水?；钤囼?yàn)。每個(gè)魚(yú)水質(zhì)量比5條魚(yú)，重復(fù)3次，?；罱Y(jié)束后以?；顣r(shí)間為指標(biāo)，確定最優(yōu)魚(yú)水質(zhì)量比。

1.2.4 暫養(yǎng)時(shí)間對(duì)大黃魚(yú)冰溫?；顣r(shí)間的影響

在保活試驗(yàn)開(kāi)始之前，先將大黃魚(yú)分別停食暫養(yǎng)0、24、48和72 h，然后將處于低溫休眠狀態(tài)的大黃魚(yú)放入塑料密封袋中，設(shè)置密封袋內(nèi)的魚(yú)水質(zhì)量比為1∶2，充氧密封后置于7 ℃的恒溫恒濕箱內(nèi)進(jìn)行有水?；钤囼?yàn)。每個(gè)暫養(yǎng)時(shí)間用5條魚(yú)試驗(yàn)，重復(fù)3次，?；罱Y(jié)束后以保活時(shí)間為指標(biāo)，確定最優(yōu)暫養(yǎng)時(shí)間。

1.2.5 大黃魚(yú)?；顣r(shí)間的正交試驗(yàn)

根據(jù)上述生態(tài)冰溫、魚(yú)水質(zhì)量比、暫養(yǎng)時(shí)間3個(gè)因素的探索結(jié)果，設(shè)計(jì)以溫度、魚(yú)水質(zhì)量比和暫養(yǎng)時(shí)間的3因素3水平正交試驗(yàn)，以保活時(shí)間為指標(biāo)，進(jìn)一步優(yōu)化大黃魚(yú)的生態(tài)冰溫保活工藝。正交試驗(yàn)方案各因素水平見(jiàn)表2。通過(guò)試驗(yàn)得知，溫度在2 ℃以上時(shí)大黃魚(yú)保活效果較好，出于節(jié)省成本考慮(降溫會(huì)消耗能量)，本試驗(yàn)將溫度范圍(2 ℃ ～10 ℃)設(shè)置略高于大黃魚(yú)的生態(tài)冰溫(-2 ℃～7 ℃)。

表2 正交試驗(yàn)因素水平表L9(34)

1.3 數(shù)據(jù)處理

2 結(jié)果與分析

2. 1 大黃魚(yú)的生態(tài)冰溫

大黃魚(yú)的臨界溫度是其經(jīng)過(guò)緩慢降溫處理時(shí)能夠區(qū)別生死的一個(gè)溫度點(diǎn)，大黃魚(yú)在不同溫度下的呼吸頻率和活動(dòng)狀況見(jiàn)表3。由表3可知，當(dāng)溫度緩慢降至10 ℃時(shí)，魚(yú)體會(huì)沉在水底，呼吸很微弱，基本不游動(dòng)，但對(duì)外界刺激反應(yīng)劇烈；溫度降至8 ℃時(shí)，魚(yú)表現(xiàn)為呼吸無(wú)規(guī)律，并出現(xiàn)側(cè)翻現(xiàn)象，且對(duì)外界的刺激反應(yīng)遲鈍；當(dāng)溫度降至7℃時(shí)，魚(yú)表現(xiàn)出掙扎、咧鰓，劇烈扭動(dòng)身體，呼吸極不規(guī)律，并對(duì)外界刺激無(wú)反應(yīng)，表明此時(shí)的溫度已達(dá)到或接近大黃魚(yú)的臨界溫度。由此可知，大黃魚(yú)的臨界溫度在7 ℃左右。通過(guò)分析大黃魚(yú)背部肌肉溫度隨時(shí)間的變化關(guān)系及凍結(jié)點(diǎn)曲線(圖1)，可以看出大黃魚(yú)的肌肉凍結(jié)點(diǎn)大約在-2 ℃，溫度繼續(xù)降低將會(huì)導(dǎo)致魚(yú)肉結(jié)冰，從而引起大黃魚(yú)死亡。由此可以認(rèn)為，大黃魚(yú)在保活過(guò)程中的最低保存溫度為-2 ℃。根據(jù)生態(tài)冰溫的定義，可以得出大黃魚(yú)的生態(tài)冰溫為-2 ℃～7 ℃，此溫度范圍可作為大黃魚(yú)的保活溫度。

表3 大黃魚(yú)在不同溫度下的呼吸頻率和活動(dòng)狀況

圖1 大黃魚(yú)凍結(jié)點(diǎn)曲線圖

2.2 魚(yú)水質(zhì)量比對(duì)大黃魚(yú)冰溫保活時(shí)間的影響

不同的魚(yú)水質(zhì)量比對(duì)大黃魚(yú)冰溫?；顣r(shí)間的影響結(jié)果如圖2所示。

圖2 魚(yú)水質(zhì)量比對(duì)大黃魚(yú)保活時(shí)間的影響

由圖可知，魚(yú)水質(zhì)量比對(duì)大黃魚(yú)?；顣r(shí)間的影響較大，隨著水量的增多，大黃魚(yú)的保活時(shí)間不斷延長(zhǎng)，但當(dāng)增加至一定量(魚(yú)水質(zhì)量比為1∶2)時(shí)，再增加水量對(duì)于?；顣r(shí)間并無(wú)顯著影響。這是因?yàn)樵诿芊猸h(huán)境中加水，有利于大黃魚(yú)通過(guò)鰓部的呼吸獲取氧氣，從而延長(zhǎng)?；顣r(shí)間[18-19]，然而，在密封環(huán)境中加水過(guò)多會(huì)使得充入的氧相對(duì)含量降低，造成大黃魚(yú)可利用的氧氣減少[20]。因此在大黃魚(yú)的?；钸^(guò)程中，應(yīng)該為其提供一定量的水，其中以魚(yú)水質(zhì)量比在1∶2及以下為宜。

2.3 暫養(yǎng)時(shí)間對(duì)大黃魚(yú)冰溫?；顣r(shí)間的影響

如圖3所示，停食暫養(yǎng)能夠提高大黃魚(yú)的冰溫?；顣r(shí)間，這是因?yàn)橥Ｊ硶吼B(yǎng)后大黃魚(yú)將之前攝取的食物基本排空，進(jìn)行保活時(shí)會(huì)使糞便排泄量減少，進(jìn)而減緩對(duì)水環(huán)境的污染速度和程度[21-23]，且對(duì)外界刺激的敏感度下降，因此，適當(dāng)暫養(yǎng)可延長(zhǎng)大黃魚(yú)的?；顣r(shí)間。Berka[24]提出，鮮活魚(yú)類(lèi)在運(yùn)輸前經(jīng)過(guò)一段時(shí)間的停食暫養(yǎng)處理會(huì)比沒(méi)有經(jīng)過(guò)暫養(yǎng)處理的保活時(shí)間增大一倍。這與對(duì)黃顙魚(yú)(Pseudobagrusfulvidraco)[16]和石斑魚(yú)[25](Epinephelusspp)的?；罴夹g(shù)研究結(jié)果相似，對(duì)大黃魚(yú)的?；钛芯恳沧C實(shí)了這一結(jié)論。但當(dāng)腸道內(nèi)的食物全部消化排泄掉之后，再增加其暫養(yǎng)時(shí)間則不能顯著延長(zhǎng)?；顣r(shí)間，因此，當(dāng)大黃魚(yú)停食暫養(yǎng)時(shí)間達(dá)到48 h以上時(shí)，其保活時(shí)間沒(méi)有顯著延長(zhǎng)。

圖3 暫養(yǎng)時(shí)間對(duì)大黃魚(yú)?；顣r(shí)間的影響

2.4 大黃魚(yú)生態(tài)冰溫?；顣r(shí)間的正交試驗(yàn)

在充氧條件下大黃魚(yú)正交優(yōu)化試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表4和表5。由表可知，溫度(A)、魚(yú)水質(zhì)量比(B)和暫養(yǎng)時(shí)間(C)這3種因素對(duì)大黃魚(yú)的保活時(shí)間均有顯著影響(P<0.05)，各因素對(duì)保活時(shí)間的影響強(qiáng)弱順序?yàn)椋篈>B>C，即溫度最為重要，其最優(yōu)生態(tài)冰溫?；畹臈l件是A2B3C2，即?；顪囟葹? ℃～7 ℃、魚(yú)水質(zhì)量比為1∶4，暫養(yǎng)時(shí)間為48 h，在此條件下?；顣r(shí)長(zhǎng)為19.88 h。

表4 正交試驗(yàn)結(jié)果

表5 正交試驗(yàn)的方差分析結(jié)果

3 結(jié)論

本研究表明，大黃魚(yú)的生態(tài)冰溫為-2 ℃～7 ℃，魚(yú)水質(zhì)量比、暫養(yǎng)時(shí)間對(duì)大黃魚(yú)?；顣r(shí)間均有顯著影響(P<0.05)；在溫度為5 ℃～7 ℃、魚(yú)水質(zhì)量比為1∶4、暫養(yǎng)時(shí)間為48 h的條件下進(jìn)行?；?，?；顣r(shí)間可超過(guò)19 h。