蔡曉芳，張曉林，周建頻，張東玲，劉賢德

(1 集美大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部東海海水健康養(yǎng)殖重點實驗室，福建 廈門361021 2 集美大學(xué)航海學(xué)院，福建 廈門361021)

大黃魚(Larimichthyscrocea)應(yīng)激性極強，在運輸過程中具有較高死亡率，市場上銷售的大黃魚以冰鮮居多[1]，尤其是離產(chǎn)地較遠地區(qū)少有鮮活的大黃魚銷售，因此，大黃魚的活體運輸越來越引起人們的重視。目前，在魚類活體運輸中常使用麻醉劑如MS-222[2-4]、丁香酚[5-7]等，以降低魚體的呼吸和新陳代謝水平，減少運輸過程中魚體受到的各種人為損傷，提高存活率[8-9]，但化學(xué)麻醉劑會造成一定的食品安全問題[10]。低溫?；钸\輸技術(shù)因具有無毒害、成本低、存活率高等優(yōu)點，正逐漸成為水產(chǎn)品活體運輸?shù)闹饕厔輀11-12]，研究開發(fā)安全、高效、經(jīng)濟的大黃魚冰溫保活技術(shù)具有很大的發(fā)展?jié)摿鸵欢ǖ慕?jīng)濟效益。

魚類等變溫動物都有一個能夠區(qū)分生死的溫度，稱為臨界溫度，水產(chǎn)品體內(nèi)組織水分開始凍結(jié)的溫度稱為凍結(jié)點[13]，從凍結(jié)點到臨界溫度的范圍稱為生態(tài)冰溫[14]。在生態(tài)冰溫范圍內(nèi)，通過適當(dāng)?shù)慕禍厥刽~體進入半休眠或完全休眠狀態(tài)，以緩解運輸過程中產(chǎn)生的應(yīng)激反應(yīng)，最終達到高效活體運輸?shù)哪康?。本研究以養(yǎng)殖大黃魚為對象，初步探究影響生態(tài)冰溫保活技術(shù)的因素，找出最優(yōu)條件，以期延長其保活時間，進而提高其運輸存活率。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗用魚為養(yǎng)殖大黃魚，來自福建省寧德市蕉城區(qū)三都澳海區(qū)。要求規(guī)格均一、體表無傷、生長狀況良好，體質(zhì)量(246.72 ± 13.37)g，體長(21.27 ± 2.12)cm，從養(yǎng)殖海區(qū)運至集美大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院養(yǎng)殖場進行暫養(yǎng)，其間正常投喂人工飼料并定期清除糞便及殘飼。

1.2 試驗方法

1.2.1 大黃魚生態(tài)冰溫的確定

將5條大黃魚放入盛有干凈海水的塑料箱中，用制冰機自制的碎冰塊(外包裹密封袋)作為降溫源，按照張長峰等[15]的降溫速率進行緩慢降溫處理(表1)，觀察并記錄大黃魚在不同溫度下的呼吸頻率和活動狀況，以其開始出現(xiàn)呼吸極不規(guī)律、甚至觀察不到鰓呼吸但魚尚未死亡時的溫度作為大黃魚的臨界溫度[16]。另取5條大黃魚通過擊打腦部致死后，將智能溫度記錄儀的測溫插頭插入魚體背部肌肉下約深1 cm處，固定后將魚體放置于-20 ℃的恒溫箱內(nèi)，記錄儀顯示器置于恒溫箱外部，每隔5 min記錄一次溫度，繪制肌肉凍結(jié)曲線圖。當(dāng)從曲線上觀察到溫度降低至0 ℃以下后，出現(xiàn)溫度變化緩慢甚至停止的情況，此時的溫度即為凍結(jié)點[17]。由上述臨界溫度和凍結(jié)點測定結(jié)果及生態(tài)冰溫的定義確定生態(tài)冰溫范圍。

表1 不同的升降溫區(qū)間與速率

1.2.2 大黃魚休眠狀態(tài)及?；顣r間的確定

通過逐漸降溫使大黃魚表現(xiàn)為呼吸極不規(guī)律、呼吸微弱、偶爾咧鰓，此時大黃魚即處于休眠狀態(tài)。將處于休眠狀態(tài)的大黃魚放入充氧的塑料袋，置于恒溫恒濕箱內(nèi)進行?；钤囼灒?dāng)其中有大黃魚表現(xiàn)為無呼吸跡象、不再偶爾咧鰓，且對外界刺激無反應(yīng)時，將其從塑料密封袋中取出放入水箱中復(fù)水(同組5條魚逐一復(fù)水)，水箱中海水溫度與?；钤囼灥臏囟认嗤?，然后按表1中的速率對其進行緩慢的升溫處理，觀察大黃魚存活狀況，若同組的5條大黃魚全部存活，則將這5條魚進行復(fù)水處理前的平均保存時間定義為本組?；顣r間。

1.2.3 魚水質(zhì)量比對大黃魚冰溫?；顣r間的影響

將處于低溫休眠狀態(tài)的大黃魚放入塑料密封袋中，設(shè)置密封袋內(nèi)的魚水質(zhì)量比分別為4∶1、2∶1、1∶1、1∶2、1∶4和1∶6，充氧密封后置于7 ℃的恒溫恒濕箱內(nèi)進行有水保活試驗。每個魚水質(zhì)量比5條魚，重復(fù)3次，?；罱Y(jié)束后以?；顣r間為指標，確定最優(yōu)魚水質(zhì)量比。

1.2.4 暫養(yǎng)時間對大黃魚冰溫?；顣r間的影響

在?；钤囼為_始之前，先將大黃魚分別停食暫養(yǎng)0、24、48和72 h，然后將處于低溫休眠狀態(tài)的大黃魚放入塑料密封袋中，設(shè)置密封袋內(nèi)的魚水質(zhì)量比為1∶2，充氧密封后置于7 ℃的恒溫恒濕箱內(nèi)進行有水?；钤囼?。每個暫養(yǎng)時間用5條魚試驗，重復(fù)3次，?；罱Y(jié)束后以?；顣r間為指標，確定最優(yōu)暫養(yǎng)時間。

1.2.5 大黃魚?；顣r間的正交試驗

根據(jù)上述生態(tài)冰溫、魚水質(zhì)量比、暫養(yǎng)時間3個因素的探索結(jié)果，設(shè)計以溫度、魚水質(zhì)量比和暫養(yǎng)時間的3因素3水平正交試驗，以?；顣r間為指標，進一步優(yōu)化大黃魚的生態(tài)冰溫?；罟に?。正交試驗方案各因素水平見表2。通過試驗得知，溫度在2 ℃以上時大黃魚保活效果較好，出于節(jié)省成本考慮(降溫會消耗能量)，本試驗將溫度范圍(2 ℃ ～10 ℃)設(shè)置略高于大黃魚的生態(tài)冰溫(-2 ℃～7 ℃)。

表2 正交試驗因素水平表L9(34)

1.3 數(shù)據(jù)處理

2 結(jié)果與分析

2. 1 大黃魚的生態(tài)冰溫

大黃魚的臨界溫度是其經(jīng)過緩慢降溫處理時能夠區(qū)別生死的一個溫度點，大黃魚在不同溫度下的呼吸頻率和活動狀況見表3。由表3可知，當(dāng)溫度緩慢降至10 ℃時，魚體會沉在水底，呼吸很微弱，基本不游動，但對外界刺激反應(yīng)劇烈；溫度降至8 ℃時，魚表現(xiàn)為呼吸無規(guī)律，并出現(xiàn)側(cè)翻現(xiàn)象，且對外界的刺激反應(yīng)遲鈍；當(dāng)溫度降至7℃時，魚表現(xiàn)出掙扎、咧鰓，劇烈扭動身體，呼吸極不規(guī)律，并對外界刺激無反應(yīng)，表明此時的溫度已達到或接近大黃魚的臨界溫度。由此可知，大黃魚的臨界溫度在7 ℃左右。通過分析大黃魚背部肌肉溫度隨時間的變化關(guān)系及凍結(jié)點曲線(圖1)，可以看出大黃魚的肌肉凍結(jié)點大約在-2 ℃，溫度繼續(xù)降低將會導(dǎo)致魚肉結(jié)冰，從而引起大黃魚死亡。由此可以認為，大黃魚在?；钸^程中的最低保存溫度為-2 ℃。根據(jù)生態(tài)冰溫的定義，可以得出大黃魚的生態(tài)冰溫為-2 ℃～7 ℃，此溫度范圍可作為大黃魚的?；顪囟?。

表3 大黃魚在不同溫度下的呼吸頻率和活動狀況

圖1 大黃魚凍結(jié)點曲線圖

2.2 魚水質(zhì)量比對大黃魚冰溫保活時間的影響

不同的魚水質(zhì)量比對大黃魚冰溫?；顣r間的影響結(jié)果如圖2所示。

圖2 魚水質(zhì)量比對大黃魚?；顣r間的影響

由圖可知，魚水質(zhì)量比對大黃魚?；顣r間的影響較大，隨著水量的增多，大黃魚的保活時間不斷延長，但當(dāng)增加至一定量(魚水質(zhì)量比為1∶2)時，再增加水量對于?；顣r間并無顯著影響。這是因為在密封環(huán)境中加水，有利于大黃魚通過鰓部的呼吸獲取氧氣，從而延長保活時間[18-19]，然而，在密封環(huán)境中加水過多會使得充入的氧相對含量降低，造成大黃魚可利用的氧氣減少[20]。因此在大黃魚的保活過程中，應(yīng)該為其提供一定量的水，其中以魚水質(zhì)量比在1∶2及以下為宜。

2.3 暫養(yǎng)時間對大黃魚冰溫?；顣r間的影響

如圖3所示，停食暫養(yǎng)能夠提高大黃魚的冰溫?；顣r間，這是因為停食暫養(yǎng)后大黃魚將之前攝取的食物基本排空，進行?；顣r會使糞便排泄量減少，進而減緩對水環(huán)境的污染速度和程度[21-23]，且對外界刺激的敏感度下降，因此，適當(dāng)暫養(yǎng)可延長大黃魚的?；顣r間。Berka[24]提出，鮮活魚類在運輸前經(jīng)過一段時間的停食暫養(yǎng)處理會比沒有經(jīng)過暫養(yǎng)處理的?；顣r間增大一倍。這與對黃顙魚(Pseudobagrusfulvidraco)[16]和石斑魚[25](Epinephelusspp)的保活技術(shù)研究結(jié)果相似，對大黃魚的?；钛芯恳沧C實了這一結(jié)論。但當(dāng)腸道內(nèi)的食物全部消化排泄掉之后，再增加其暫養(yǎng)時間則不能顯著延長?；顣r間，因此，當(dāng)大黃魚停食暫養(yǎng)時間達到48 h以上時，其?；顣r間沒有顯著延長。

圖3 暫養(yǎng)時間對大黃魚?；顣r間的影響

2.4 大黃魚生態(tài)冰溫保活時間的正交試驗

在充氧條件下大黃魚正交優(yōu)化試驗結(jié)果見表4和表5。由表可知，溫度(A)、魚水質(zhì)量比(B)和暫養(yǎng)時間(C)這3種因素對大黃魚的保活時間均有顯著影響(P<0.05)，各因素對?；顣r間的影響強弱順序為：A>B>C，即溫度最為重要，其最優(yōu)生態(tài)冰溫?；畹臈l件是A2B3C2，即?；顪囟葹? ℃～7 ℃、魚水質(zhì)量比為1∶4，暫養(yǎng)時間為48 h，在此條件下?；顣r長為19.88 h。

表4 正交試驗結(jié)果

表5 正交試驗的方差分析結(jié)果

3 結(jié)論

本研究表明，大黃魚的生態(tài)冰溫為-2 ℃～7 ℃，魚水質(zhì)量比、暫養(yǎng)時間對大黃魚?；顣r間均有顯著影響(P<0.05)；在溫度為5 ℃～7 ℃、魚水質(zhì)量比為1∶4、暫養(yǎng)時間為48 h的條件下進行保活，?；顣r間可超過19 h。