楊藝歡

(廣東省惠州市質(zhì)量計(jì)量監(jiān)督檢測(cè)所 輕化室，廣東 惠州 516000)

皮革因富含蛋白質(zhì)，是微生物生長(zhǎng)的天然培養(yǎng)基。因此，皮革的防腐防霉工藝一直深受重視。目前最常用的方法是添加防腐防霉劑，如甲醛、酰胺類(lèi)、季銨鹽類(lèi)和雜環(huán)類(lèi)化合物等[1]。吡啶硫銅鋅(ZPT)作為一種高效的廣譜殺菌劑應(yīng)用廣泛，因其高效、低毒、使用安全等性質(zhì)被廣泛應(yīng)用于各行各業(yè)中[2]。但近年來(lái)有研究表明，長(zhǎng)期接觸ZPT易誘發(fā)人體過(guò)敏性、接觸性皮炎，對(duì)人體健康及生態(tài)環(huán)境造成一定壓力。國(guó)內(nèi)外關(guān)于吡硫鎓鋅的檢測(cè)方法主要是關(guān)于化妝品中的去屑成分，在國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局組織完成的《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》(2015年版)中規(guī)定淋洗類(lèi)產(chǎn)品中限量要求為1.5%。目前，國(guó)內(nèi)外都沒(méi)有針對(duì)皮革及皮革制品中ZPT含量檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)，因此有必要建立一種針對(duì)性強(qiáng)、靈敏度高、回收率高、快速的檢測(cè)方法。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 測(cè)定原理

在酸性條件下，樣品經(jīng)正己烷脫脂后，用甲醇超聲提取，經(jīng)高效液相色譜儀分離，二極管陣列檢測(cè)器檢測(cè)，根據(jù)保留時(shí)間和光譜圖定性，峰面積定量，以標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算ZPT含量。

1.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器

高效液相色譜 (美國(guó)安捷倫公司)；超聲波清洗機(jī)(昆山市超聲儀器有限公司)；電子天平(奧豪斯儀器(上海)有限公司)；IQ7000純水機(jī)(美國(guó)Milli-Q公司)。

1.3 試劑

吡啶硫銅鋅標(biāo)準(zhǔn)品(純度>99.0%，德國(guó)Dr.Ehrenstorfer GmbH公司)；甲醇(色譜純，上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司)；乙腈(色譜純，上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司)；實(shí)驗(yàn)用水為二級(jí)蒸餾超純水。

標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：準(zhǔn)確稱(chēng)取0.03000g標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)于50mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，即配成濃度為600μg/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.4 色譜條件

色譜柱：ZORBAX SB-C18(4.8mm×250 mm,5μm)；

流動(dòng)相：甲醇，加入0.05mmol/L的EDTA，用磷酸調(diào)節(jié)至pH值至4.0～4.5之間；

檢測(cè)器：二極管陣列檢測(cè)器；

波長(zhǎng)：340nm；

流速：1.0mL/min；

柱溫：30℃；

進(jìn)樣量：10μL。

1.5 樣品前處理

脫脂：將皮革或皮革制品剪成小于5mm×5mm的碎片后，準(zhǔn)確稱(chēng)取1.000g，加入20mL正己烷，于40℃超聲波中提取30min，倒掉正己烷，重復(fù)上述步驟一次，脫脂后敞口放置過(guò)夜，揮干正己烷。

萃?。和崛∑髦袦?zhǔn)確加入10.0mL甲醇，旋緊蓋子，在40℃超聲波中提取30min，冷卻至室溫，經(jīng)0.22μm濾膜過(guò)濾，試液供測(cè)定用。

2 結(jié)果與分析

2.1 樣品處理的優(yōu)化

皮革及皮革制品的主要組成包括蛋白質(zhì)、纖維、無(wú)機(jī)鹽、油脂等，結(jié)構(gòu)緊密，不溶于水，這些基質(zhì)的存在不但會(huì)干擾ZPT的提取，而且容易污染儀器。因此，在目標(biāo)物提取時(shí)需先進(jìn)行純化。甲醇和乙腈能使少量蛋白質(zhì)沉淀，但由于乙腈的極性小于甲醇，在反相中洗脫能力要強(qiáng)于甲醇，因ZPT本身的出峰時(shí)間較早，因此用甲醇作溶劑更合適。通過(guò)超聲提取目標(biāo)物后，經(jīng)0.22μm濾膜過(guò)濾后上機(jī)測(cè)定。該方法操作簡(jiǎn)單，回收率高，靈敏度高，滿(mǎn)足定性和定量要求。

本方法探討了脫脂對(duì)目標(biāo)物提取的影響。本實(shí)驗(yàn)對(duì)以下兩種情況進(jìn)行分析，分別是樣品先經(jīng)正己烷脫脂再用甲醇提取，與樣品直接用甲醇進(jìn)行提取。實(shí)驗(yàn)證明，前者比后者出峰雜質(zhì)要少，這說(shuō)明脫脂處理對(duì)目標(biāo)物質(zhì)的提純具有良好的效果。

本方法探討了流動(dòng)相的選擇對(duì)分析結(jié)果的影響。實(shí)驗(yàn)證明，當(dāng)流動(dòng)相的pH值為6.0～7.0時(shí)，ZPT出現(xiàn)異常峰-雙峰；當(dāng)調(diào)節(jié)流動(dòng)相的pH值為4.0～4.5時(shí)，峰形雖得到一定的改善，但仍有拖尾和雙峰現(xiàn)象。在流動(dòng)相中加入比例為0.05mmol/L的EDTA，且pH值調(diào)節(jié)為4.0～4.5時(shí)，色譜峰形尖銳、對(duì)稱(chēng)，柱效大大提高。這說(shuō)明在酸性條件下，在流動(dòng)相中加入一定比例的EDTA，目標(biāo)物分析效果良好。

2.2 線性范圍與檢出限

逐級(jí)稀釋配備標(biāo)準(zhǔn)溶液7個(gè)點(diǎn)，經(jīng)測(cè)定，標(biāo)準(zhǔn)溶液在(3～120)μg/mL范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r2=0.999。以不含ZPT的牛皮作為本底，當(dāng)添加濃度為1μg/mL時(shí)，信噪比S/N=67.7>3。結(jié)果表明，設(shè)定最低檢出限1μg/mL符合要求。

2.3 精密度實(shí)驗(yàn)

對(duì)一個(gè)樣品重復(fù)測(cè)定7次，通過(guò)峰面積計(jì)算平均值、標(biāo)準(zhǔn)偏差和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)。本實(shí)驗(yàn)測(cè)定的RSD<5%，實(shí)驗(yàn)證明該方法的流動(dòng)相及色譜條件的選擇對(duì)目標(biāo)物的測(cè)定具有良好的分析效果。精密度數(shù)據(jù)如表1所示。

表1 精密度測(cè)試測(cè)定結(jié)果Table1 The precision data

2.4 回收率試驗(yàn)

表2 加標(biāo)回收率試驗(yàn)結(jié)果Table 2 The recovery data

選取不含ZPT的牛皮作為本底，添加3個(gè)水平的加標(biāo)回收試驗(yàn)，每個(gè)水平進(jìn)行2次平行測(cè)定，測(cè)定數(shù)據(jù)見(jiàn)表2。試驗(yàn)結(jié)果表明，回收率均大于85%，表明本實(shí)驗(yàn)的前處理方法能對(duì)目標(biāo)物起到很好的提純作用。

2.5 實(shí)際樣品檢測(cè)

隨機(jī)抽取20份皮革或皮革制品，按照本研究建立的方法進(jìn)行檢測(cè)ZPT含量。其中1份樣品檢出少量ZPT，其余19份樣品未檢出。經(jīng)分析，陽(yáng)性樣品的光譜圖匹配度為977，色譜圖和光譜圖如圖1所示。

圖1 陽(yáng)性樣品色譜圖與光譜圖Fig.3 Chromatogram and spectra of positive sample

3 結(jié)論

本試驗(yàn)建立了外標(biāo)法定量，高效液相色譜法測(cè)定皮革及皮革制品中防霉劑吡啶硫銅鋅含量。樣品用正己烷脫脂，用甲醇作為提取后，經(jīng)HPLC-DAD檢測(cè)。該方法的檢出限為1μg/mL，定量下限為3 μg/mL，線性范圍(3～120) μg/mL，相關(guān)系數(shù)為r2=0.999。該方法前處理簡(jiǎn)單方便，靈敏度高，回收率較高，分析時(shí)間短，適合大批量樣品的快速檢測(cè)。