徐泰 張思明 李璐 朱文標(biāo) 范苑林

[摘要]目的 分析DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱα（TopoⅡα）在乳腺癌患者中的表達(dá)情況及臨床意義。方法 選擇2017年6月～2018年8月本院收治的144名乳腺癌患者，患者均經(jīng)病理確診為乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌，術(shù)前均未行放化療治療，入院后接受手術(shù)治療，通過(guò)免疫組化方法檢測(cè)術(shù)后標(biāo)本的TopoⅡα蛋白表達(dá)，觀察TopoⅡα的陽(yáng)性表達(dá)與乳腺癌臨床特征的相關(guān)性。結(jié)果 病理分級(jí)Ⅲ級(jí)乳腺癌患者的TopoⅡα蛋白陽(yáng)性比例高于病理分級(jí)Ⅰ～Ⅱ級(jí)的乳腺癌患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;Ki-67陽(yáng)性乳腺癌患者的TopoⅡα蛋白陽(yáng)性比例高于Ki-67陰性的乳腺癌患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;Spearman秩相關(guān)分析顯示，乳腺癌病理分級(jí)與Ki-67與TopoⅡα表達(dá)成顯著正相關(guān)（P<0.05）。結(jié)論 TopoⅡα與腫瘤病理分級(jí)及增值狀態(tài)相關(guān)。

[關(guān)鍵詞]乳腺癌;DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱα;免疫組化學(xué);Ki-67

[中圖分類號(hào)] R737.9? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A? ? ? ? ? [文章編號(hào)] 1674-4721（2019）6（c）-0028-03

[Abstract] Objective To analyze the expression of DNA topoisomerase Ⅱ alpha （TopoⅡα） in breast cancer patients and its clinical significance. Methods A total of 144 breast cancer patients admitted to our hospital from June 2017 to August 2018 were selected. All patients were pathologically diagnosed as invasive ductal carcinoma of the breast. No preoperative radiotherapy or chemotherapy was given. After admission， they received surgical treatment. The expression of TopoⅡα protein was detected by immunohistochemical method. The correlation between the positive expression of TopoⅡα and the clinical characteristics of breast cancer was observed. Results The positive rate of TopoⅡα protein in breast cancer patients with pathological grade Ⅲ was higher than that with pathological grade Ⅰ-Ⅱ （P<0.05）. The positive rate of TopoⅡα protein in breast cancer patients with Ki-67 positive was higher than that with Ki-67 negative （P<0.05）. Spearman rank correlation analysis showed that there was a significant positive correlation between pathological grading， Ki-67 and TopoⅡα expression in breast cancer tissues （P<0.05）. Conclusion The expression of TopoⅡα protein is significantly correlated with the pathological grading.

[Key words] Breast cancer; DNA topoisomerase Ⅱα; Immunohistochemistry; Ki-67

DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱα（DNA topoisomcrasen Ⅱα，TopoⅡα）是DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ的同工酶，通過(guò)改變DNA的α值而影響其拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)。引起拓?fù)洚悩?gòu)反應(yīng)的酶，其分子量為170 kD，基因定位于17q21～22，以ATP供能發(fā)揮催化活性，在DNA復(fù)制、轉(zhuǎn)錄過(guò)程中起著重要作用[1]。乳腺癌是常見(jiàn)病，在婦女惡性腫瘤中發(fā)病率居于首位，是女性健康的第一殺手[2]。近年來(lái)，隨著研究的不斷深入，乳腺癌在治療上倡導(dǎo)以手術(shù)為主，結(jié)合化療、放療、內(nèi)分泌等個(gè)體化治療方案，獲得了令人滿意的效果。然而乳腺癌的療效仍舊存在極大的差異，這是因?yàn)槿橄侔┑陌l(fā)生是多因素、多步驟的復(fù)雜過(guò)程。尋找預(yù)測(cè)乳腺癌治療的生物學(xué)指標(biāo)是當(dāng)下的研究熱點(diǎn)，其中雌激素受體（estrogen receptor，ER）、孕激素受體（progesterone receptor，PR）、增殖細(xì)胞相關(guān)的核抗原（Ki-67）、人類表皮生長(zhǎng)因子受體2（CerB-2）已被證實(shí)與乳腺癌的治療與預(yù)后息息相關(guān)，根據(jù)表達(dá)情況可分為L(zhǎng)uminal A、Luminal B樣型、Luminal B-like型、Her-2陽(yáng)性型、基底樣型四種分子分型[3]。有研究發(fā)現(xiàn)TopoⅡα基因是一個(gè)與惡性腫瘤預(yù)后有密切關(guān)系的基因，其在多種腫瘤中均有改變且以表達(dá)增高為主[4]。本研究通過(guò)免疫組化學(xué)的方式檢測(cè)TopoⅡα在乳腺癌中的表達(dá)，探討其在乳腺癌中的臨床特征關(guān)系以及臨床意義。

1資料與方法

1.1一般資料

選取2017年6月～2018年8月本院經(jīng)粗針穿刺病理確診為乳腺癌的144例患者，術(shù)前均接受放化療治療，均為女性，年齡28～76歲，中位年齡48歲，平均（50.4±13.5）歲;病理TNM分期：Ⅰ期3例，Ⅱ期106例，Ⅲ期35例;分子分型Luminal A樣型38例，Luminal B樣型45例，Luminal B-like型19例，Her-2陽(yáng)性型21例，基底樣型21例[5]。本研究經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)同意。

1.2 TopoⅡα蛋白表達(dá)水平和基因擴(kuò)增分析

鼠抗人TopoⅡα單克隆抗體（1∶100，MAB-0799，福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司）、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的山羊抗鼠IgG標(biāo)記二抗及DAB顯色試劑盒來(lái)自Polymer雙染檢測(cè)試劑盒（DS-0005，中杉金橋公司）;所有標(biāo)本經(jīng)10%中性甲醛浸泡固定，常規(guī)石蠟包埋、切片4 μm厚、脫蠟水化，常規(guī)3% H2O2室溫孵育10 min;微波抗原修復(fù)2 min，分別加入一抗室溫孵育90 min，加入二抗室溫孵育10 min，PBS沖洗，DBA顯色，最后以蘇木素復(fù)染、脫水、透明、封片。用PBS代替一抗作陰性對(duì)照組，試劑盒陽(yáng)性片作為陽(yáng)性對(duì)照組。

1.3免疫組化結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)

TopoⅡα陽(yáng)性表達(dá)見(jiàn)于細(xì)胞核，核內(nèi)有黃色或者棕黃色顆粒為陽(yáng)性，由兩位以上病理醫(yī)生對(duì)免疫組化結(jié)果進(jìn)行評(píng)定，陽(yáng)性細(xì)胞<5%定為（-），5%～<10%定為（+-），10%～<50%定為（+），50%～75%定為（++），>75%定為（+++）;其中（-）～（+-）判定為陰性患者，（+）～（+++）判定為陽(yáng)性患者。ER、PR、Ki-67、CerB-2、人體抑癌基因（p53）免疫組化結(jié)果均來(lái)自本院病理報(bào)告。

1.4觀察指標(biāo)

觀察TopoⅡα在乳腺癌中的表達(dá)情況，分析TopoⅡα與患者年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤病理組織學(xué)分級(jí)、ER、PR、HER-2、Ki-67的相關(guān)性。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料以率表示，采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Spearman秩相關(guān)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1 TopoⅡα陽(yáng)性表達(dá)與乳腺癌病理特征的關(guān)系

病理分級(jí)Ⅲ級(jí)乳腺癌患者的TopoⅡα蛋白陽(yáng)性比例高于病理分級(jí)Ⅰ～Ⅱ級(jí)的乳腺癌患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;Ki-67陽(yáng)性乳腺癌患者的TopoⅡα蛋白陽(yáng)性比例高于Ki-67陰性的乳腺癌患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。不同年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期、ER、PR、HER-2蛋白表達(dá)患者的TopoⅡα蛋白表達(dá)水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）（表1）。

2.2乳腺癌病理分級(jí)及Ki-67表達(dá)情況與TopoⅡα的相關(guān)性分析

Spearman秩相關(guān)分析顯示，乳腺癌病理分級(jí)及Ki-67與TopoⅡα表達(dá)成顯著正相關(guān)（P<0.05）（表2）。

2.3 TopoⅡα在乳腺癌組織中的表達(dá)情況

TopoⅡα陽(yáng)性的細(xì)胞呈現(xiàn)淺黃、棕黃的細(xì)小顆粒。

3討論

1987年Villman等[6]首先在嚙齒動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)發(fā)現(xiàn)TopoⅡ具有α和β兩種同工酶，其中TopoⅡα與CerbB-2基因鄰近，此區(qū)在發(fā)生乳腺腫瘤時(shí)頻繁出現(xiàn)突變，Vici等[7]的研究發(fā)現(xiàn)1600例CerB-2陰性乳腺癌患者中未發(fā)現(xiàn)TopoⅡα基因擴(kuò)增者，這一發(fā)現(xiàn)提示TopoⅡα與CerbB-2基因存在密切聯(lián)系。O′Malley等[8]的研究發(fā)現(xiàn)TopoⅡα蛋白表達(dá)與TopoⅡα基因或HER-2基因無(wú)直接關(guān)聯(lián)，但后期分析中發(fā)現(xiàn)，TopoⅡα蛋白表達(dá)的患者可以在蒽環(huán)類藥物獲得更好的療效。雖然本研究結(jié)果顯示，TopoⅡα蛋白表達(dá)與HER-2表達(dá)狀態(tài)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），但TopoⅡα蛋白表達(dá)仍可作為預(yù)測(cè)蒽環(huán)類化療療效的生物指標(biāo)。

既往研究顯示，TopoⅡα蛋白表達(dá)與腫瘤的增值活性相關(guān)[9]。何奇等[10]發(fā)現(xiàn)TopoⅡα在乳腺病組織、導(dǎo)管上皮不典型增生組織、導(dǎo)管內(nèi)癌組織及浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌組織中的陽(yáng)性率分別為25.0%、28.0%、53.1%和53.6%，在乳腺上皮增生發(fā)展為癌的過(guò)程中，TopoⅡα表達(dá)水平逐漸增高。本研究結(jié)果顯示，TopoⅡα蛋白表達(dá)水平與腫瘤組織學(xué)分級(jí)存在正相關(guān)趨勢(shì)（P<0.05），提示TopoⅡα可能與腫瘤分化程度相關(guān)，在一定程度上反映乳腺癌的增值活性。

Ki-67是一種與細(xì)胞增殖特異性相關(guān)的核抗原，已被證實(shí)與多種惡性腫瘤的發(fā)展、轉(zhuǎn)移、預(yù)后有關(guān)[11-12]。相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道Ki-67及TopoⅡα的表達(dá)具有相關(guān)性[13]，孫旸等[14]發(fā)現(xiàn)在子宮肉瘤中，Ki-67與TopoⅡα存在線性相關(guān);黃炳臣等[15]的研究顯示Ki-67與TopoⅡα在大腸腺癌中成正相關(guān)性，可作為腫瘤細(xì)胞增值的特異性標(biāo)志物。本研究結(jié)果顯示，乳腺癌患者中TopoⅡα蛋白表達(dá)水平越高，Ki-67表達(dá)水平也相應(yīng)增高，兩者存在相關(guān)性（P<0.05）。

綜上所述，在乳腺癌患者中，TopoⅡα的蛋白表達(dá)水平與乳腺癌的惡性程度存在密切關(guān)系，同時(shí)也是預(yù)測(cè)蒽環(huán)藥物化療的敏感指標(biāo)，而且針對(duì)TopoⅡα免疫組化檢測(cè)更為經(jīng)濟(jì)，易廣泛應(yīng)用于臨床，但能否作為評(píng)價(jià)患者預(yù)后的預(yù)測(cè)因子仍需進(jìn)一步行生存預(yù)后相關(guān)分析。本研究雖然發(fā)現(xiàn)了TopoⅡα與腫瘤增值分化相關(guān)，但也存在缺陷，未能闡明其是否與預(yù)后相關(guān)以及其與腫瘤增值分化的作用機(jī)制。今后將進(jìn)一步擴(kuò)大樣本進(jìn)行驗(yàn)證，并探討其與患者預(yù)后的相關(guān)性。

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（收稿日期：2019-05-14? 本文編輯：祁海文）