張可可 陳建新 張芬

摘要 目的：根據(jù)小兒咽扁顆粒的臨床適應(yīng)證，研究小兒咽扁顆粒對于急性咽炎的治療作用，證明其療效，并初步分析其作用環(huán)節(jié)。方法：采用咽部氨水噴霧的方法，誘發(fā)大鼠急性咽炎（Acute Pharyngitis），觀察小兒咽扁顆粒對急性咽炎大鼠免疫功能、血清炎性反應(yīng)因子的影響以及對咽部黏膜的保護(hù)作用。結(jié)果：連續(xù)給藥7 d后，模型組與正常組比較，大鼠表觀指標(biāo)評分比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;小兒咽扁顆粒低劑量組可顯著性降低表觀指標(biāo)評分。連續(xù)給藥7 d后，病理學(xué)指標(biāo)結(jié)果顯示小兒咽扁顆粒低、中、高劑量組可不同程度改善咽部炎性反應(yīng)情況。血清炎性因子檢測結(jié)果顯示，小兒咽扁顆粒不同劑量組可不同程度降低血清炎性因子TNF-α濃度（P<0.05;P<0.01）。結(jié)論：小兒咽扁顆粒對急性咽炎大鼠有增強(qiáng)免疫功能、降低血清炎性反應(yīng)因子的作用，對咽部黏膜有一定保護(hù)作用。

關(guān)鍵詞 小兒咽扁顆粒;急性咽炎;氨水噴霧;抗炎;藥理;大鼠;免疫

Abstract Objective：To study the therapeutic effects of Xiaoer Yanbian Granules on acute pharyngitis according to its clinical indications.Methods：Acute pharyngitis in rats was induced by pharyngeal ammonia spray to observe the effects of Xiaoer Yanbian Granules on the immune function and serum inflammatory factors，and the protective effect in pharynx mucosa.Results：After 7 days of continuous administration，there was a significant difference in the apparent index score between the model group and the normal group（P<0.05）.The low dose of Xiaoer Yanbian Granules significantly reduced the apparent index score.After 7 days of continuous administration，the pathological results showed that the low，medium and high doses of Xiaoer Yanbian Granules could improve the pharyngeal inflammation to different degrees.The results of serum inflammatory factor test showed that the concentration of serum inflammatory factor TNF-α was decreased to different degrees in different dosage groups of Xiaoer Yanbian Granules（P<0.05; P<0.01）.Conclusion：Xiaoer Yanbian Granules could improve immune function，reduce serum inflammatory factors of rats with acute pharyngitis and protect the pharynx mucosa to some extent.

Key Words Xiaoer Yanbian Granules; Acute pharyngitis; Ammonia spraying; Anti-inflammatory; Pharmacology; Rats; Immunity

中圖分類號：R285.5文獻(xiàn)標(biāo)識碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2019.05.020

急性咽炎（Acute Pharyngitis，AP）為咽部黏膜與黏膜下組織的急性炎性反應(yīng)，多累及咽部的淋巴組織。炎性反應(yīng)可以波及整個咽部，或者發(fā)生在局部。此病可以為原發(fā)性，也可以繼發(fā)于急性鼻竇炎或者急性扁桃體炎之后[1]。究其病因多為細(xì)菌和病毒感染、環(huán)境刺激所致。目前臨床主要采用抗生素治療、抗病毒藥物治療。中醫(yī)認(rèn)為，急性喉痹多以風(fēng)、熱、寒、疫相因?yàn)榛?，?nèi)有積熱，復(fù)感風(fēng)寒、風(fēng)熱相搏、壅滯咽喉而起。癥見咽喉一側(cè)或兩側(cè)紅腫疼痛，發(fā)音困難、吞咽不利，多伴有發(fā)熱惡寒、頭痛、咳嗽、脈浮數(shù)等[2]。

AP、扁桃體炎是兒科的常見病、多發(fā)病，由于小兒生理特點(diǎn)與成年人不同，兒童的肝腎功能、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)等均未發(fā)育完全，藥物在體內(nèi)吸收、分布、代謝與排泄的過程與成年人不完全相同[3]。西藥治療有一定不良反應(yīng)。而中醫(yī)運(yùn)用整體辨證的方法，不良反應(yīng)低，價格低廉[4]，更容易被患兒家長所接受。

小兒咽扁顆粒為華潤三九（黃石）產(chǎn)品，由金銀花、射干、金果欖、桔梗、玄參、麥冬、人工牛黃、冰片組成，具有清熱利咽，解毒止痛的功效[5]。方中金銀花甘寒入肺，瀉火解毒。其有效成分為綠原酸和黃酮類[6-7]。射干瀉火解毒，散血消瘀，火降則血散腫消，而痰結(jié)自解，消心脾老血，行太陰厥陰之積痰。既能宣散風(fēng)熱，又能涼血解毒，為治療喉痹咽痛之要藥[8]。其主要有效成分為酚酸類、環(huán)烯醚萜類、黃酮類[9]。二藥合用，共為君藥[5]。金果欖性味苦寒，清熱解毒，滋陰降火，止渴生津，利咽，有止痛之功效，適用于各種兒科疾病、其道疾病、急慢性扁桃體炎。其主要有效成分為生物堿、二萜類、甾醇類[10-11]。玄參苦咸微寒，能壯水之主，以制陽光。益精明目，利咽喉，通二便。其主要有效成分為環(huán)烯醚萜、苯丙素、萜類、苯酚及苯乙醇苷、甾醇、黃酮、脂肪酸、糖類等[11-12]。麥冬甘微苦寒，清心潤肺，瀉熱除煩，消痰止咳，行水生津。主要有效成分為高異黃酮類[13]。桔梗宣通氣血，瀉火散熱，佐以載諸藥上浮。主要有效成分為桔?？傇碥蘸徒酃Ｔ碥誅[14]。四藥相配，宣肺滋陰共奏，共為臣藥[5]。牛黃瀉熱除煩鎮(zhèn)驚，除小兒百病。主要有效成分為膽紅素、膽汁酸[15]。冰片，主要由松節(jié)油、樟腦等為原料經(jīng)化學(xué)方法合成[16]，芳香走竄，通諸竅，散郁火。使諸藥補(bǔ)而不滋膩，二藥相合，共為佐使[5]。本方的組方思路立足于本病的宏觀病機(jī)和微觀病理因素，在清熱藥中配伍開竅藥，諸藥相配，相輔相成，清熱利咽，潤肺解毒止痛[5]。

鑒于小兒咽扁顆粒作為臨床兒科常用藥物，目前研究報道相對較少，尚缺少系統(tǒng)的學(xué)術(shù)研究作為支撐，所以本文對小兒咽扁顆粒進(jìn)行了抗AP藥理作用的系統(tǒng)研究。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物 Sprague-Dawley大鼠共70只，雌雄各半，體質(zhì)量180～220 g（合格證號11804700015201，許可證號SCXK（京）2016-0010）。

1.1.2 藥品 小兒咽扁顆粒（華潤三九（黃石）藥業(yè)有限公司，生產(chǎn)批號1803007Z），以無菌生理鹽水配制成混懸液。阿司匹林腸溶片（拜耳醫(yī)藥保健有限公司，生產(chǎn)批號BJ38903），研磨成粉末以純水制成混懸液。

1.1.3 試劑與儀器 用生理鹽水配制成25%氨水溶液。ELISA試劑盒TNF-α、IL-1β和IL-6試劑盒（欣博盛生物科技有限公司）。溶血劑，稀釋液，清洗液（江西特康科技有限公司，贛食藥監(jiān)械生產(chǎn)許20110014號）。

喉頭噴霧器（購于江蘇平安醫(yī)療器械有限公司），江西特康三群血細(xì)胞分析儀（江西特康科技有限公司，贛食藥監(jiān)械生產(chǎn)許20110014號），顯微鏡（Nikon Digital Sight DS-U3），酶標(biāo)儀（SUNRISE 16039400）。

1.2 方法

1.2.1 分組與模型制備

正常組和模型組，每組10只。依照參考文獻(xiàn)[17-18]的方法制備大鼠AP模型。用喉頭噴霧器25%的氨水向其咽部噴霧，2次/d，上、下午各1次，每次噴3下，連續(xù)噴3 d。

1.2.2 給藥方法

設(shè)正常組（生理鹽水10 mL/kg），模型組（生理鹽水10 mL/kg），陽性藥阿司匹林組（200 mg/kg），小兒咽扁顆粒高劑量組（12 g/kg），小兒咽扁顆粒中劑量組（6 g/kg）和小兒咽扁顆粒低劑量組（3 g/kg），每組10只。于實(shí)驗(yàn)第4天開始，灌胃給藥，1次/d，連續(xù)給藥7 d。

1.2.3 檢測指標(biāo)與方法

1）表觀指標(biāo)：分別于連續(xù)造模第3天和連續(xù)給藥第7天肉眼觀察各組大鼠咽部情況，進(jìn)行表觀指標(biāo)評分，并按下述評判標(biāo)準(zhǔn)記錄，具體評分標(biāo)準(zhǔn)見表1：積分3，頻繁搔抓口部，飲水，并出現(xiàn)咽部充血、腫脹，鼓膜呈鮮紅色;積分2，咽部腫脹，部分充血;積分1，咽部腫脹，無充血;積分0，無上述情況。

2）病理學(xué)指標(biāo)檢測：咽黏膜下的結(jié)締組織是否正常、黏膜下腺的炎細(xì)胞浸潤是咽炎模型成功與否的重要標(biāo)志。模型制備成功后，光鏡觀察可見咽黏膜下結(jié)締組織增生情況、黏膜下有無大量炎細(xì)胞浸潤。通過AP模型觀察比較致病動物表觀指標(biāo)、血常規(guī)（白細(xì)胞分類）及咽部局部炎性反應(yīng)病理組織學(xué)情況，對藥物的作用效果進(jìn)行評價。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 指標(biāo)評分結(jié)果以中位數(shù)表示，其余結(jié)果以（±s）表示，表觀指標(biāo)評分采用非參數(shù)秩和檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計分析，其余指標(biāo)多組比較采用單因素方差分析進(jìn)行結(jié)果統(tǒng)計。

2 結(jié)果

2.1 小兒咽扁顆粒對大鼠表觀指標(biāo)評分改善作用

25%氨水連續(xù)造模3 d后，模型組與正常組比較，表觀指標(biāo)評分比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義;連續(xù)給藥7 d后，模型組與正常組比較，表觀指標(biāo)評分比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義;小兒咽扁顆粒低劑量組可顯著性降低表觀指標(biāo)評分。

2.2 小兒咽扁顆粒對體質(zhì)量的影響

連續(xù)給藥7 d后，模型組與正常組比較，大鼠體質(zhì)量顯著下降;陽性藥阿司匹林組和小兒咽扁顆粒低、中、高劑量組大鼠體質(zhì)量增加程度均高于模型組，但無統(tǒng)計學(xué)意義。

2.3 小兒咽扁顆粒對大鼠咽部病理改善作用

取材時觀察大鼠咽部病變，咽黏膜充血腫脹，血管擴(kuò)張及漿液滲出情況。取會厭軟骨附近咽部黏膜及其下組織進(jìn)行切片，HE染色，觀察組織病變形態(tài)如下。如圖4所示正常組上皮下結(jié)締組織無炎細(xì)胞浸潤，模型組咽黏膜下結(jié)締組織出現(xiàn)增生，細(xì)胞排列略為致密，提示有結(jié)締組織增生;模型組細(xì)胞間質(zhì)出現(xiàn)空泡化表現(xiàn)，提示存在組織水腫;并且在細(xì)胞間質(zhì)之間存在不同程度的炎細(xì)胞浸潤。如圖5所示，正常組腺體間細(xì)胞間質(zhì)增生不明顯，且無炎細(xì)胞浸潤，而模型組腺體之間細(xì)胞間質(zhì)明顯增生，且出現(xiàn)大量炎細(xì)胞浸潤;陽性藥阿司匹林組、小兒咽扁低劑量組、小兒咽扁中劑量組、小兒咽扁高劑量組結(jié)締組織增生有所改善，且無明顯炎細(xì)胞浸潤，且組織水腫不明顯。如圖6所示，正常組在肌層肌纖維排列致密緊湊規(guī)則，模型組肌層肌纖維排列疏松紊亂，且出現(xiàn)皺縮，細(xì)胞間隙增寬，提示有水腫的發(fā)生。陽性藥阿司匹林組、小兒咽扁低劑量組、小兒咽扁中劑量組、小兒咽扁高劑量組水腫程度和細(xì)胞增生程度均不明顯。

2.4 小兒咽扁顆粒對AP大鼠血清炎性因子影響

2.4.1 小兒咽扁顆粒對血清中TNF-α的影響

2.4.2 小兒咽扁顆粒對血清中IL-1β的影響

2.4.3 小兒咽扁顆粒對血清中IL-6的影響

3 討論

實(shí)驗(yàn)采用氨水咽部噴霧的方法制作的AP的模型，其原理是采用化學(xué)因素刺激咽部黏膜，生物學(xué)特征與臨床AP有一定的相似性。

25%氨水連續(xù)造模3 d后，模型組與正常組比較，表觀指標(biāo)評分比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義;連續(xù)給藥7 d后，模型組與正常組比較，表觀指標(biāo)評分比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義;小兒咽扁顆粒低劑量組可顯著性降低表觀指標(biāo)評分。這說明小兒咽扁顆?？梢燥@著降低表觀指標(biāo)評分。

連續(xù)給藥7 d后，模型組與正常組比較，大鼠體質(zhì)量顯著下降;陽性藥阿司匹林組和小兒咽扁顆粒低、中、高劑量組大鼠體質(zhì)量增加程度均高于模型組。

病理學(xué)指標(biāo)結(jié)果顯示，陽性藥阿司匹林組與小兒咽扁顆粒低、中、高劑量組可不同程度改善咽部病理情況。模型組的上皮下、肌層、腺體層均有不同程度的炎細(xì)胞浸潤，組織間隙排列疏松、紊亂、有不同程度的增寬，表明組織水腫的發(fā)生。各給藥組炎細(xì)胞浸潤程度有所降低，組織排列緊密規(guī)則，水腫發(fā)生程度不明顯。這表明小兒咽扁顆粒對組織炎細(xì)胞浸潤和組織水腫有一定作用。

通過檢測血清中的炎性反應(yīng)標(biāo)記物TNF-α、IL-6、IL-1β來判斷評價小兒咽扁顆粒的抗炎作用。腫瘤壞死因子-α（TNF-α），是主要由活化的巨噬細(xì)胞分泌的參與全身炎性反應(yīng)并構(gòu)成急性期反應(yīng)的細(xì)胞因子[19]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，模型組與正常組比較，血清中TNF-α水平顯著上升（P<0.05），說明造模后組織內(nèi)的炎性反應(yīng)發(fā)生。小兒咽扁顆粒低中高劑量組與模型組比較，TNF-α水平顯著下降（P<0.05），說明小兒咽扁顆粒對炎性反應(yīng)有一定的作用。白細(xì)胞介素-1β（IL-1β），是一種由巨噬細(xì)胞分泌的前體蛋白經(jīng)半胱天冬酶1（CASP1/ICE）蛋白水解而成的一種細(xì)胞因子，具有致熱和介導(dǎo)炎性反應(yīng)的作用，可造成人體組織破壞、水腫形成等多種病理損傷過程[20]。通過實(shí)驗(yàn)測定IL-1β的含量，來判斷炎性反應(yīng)的嚴(yán)重程度。模型組與正常組比較，IL-1β水平顯著上升（P<0.01），說明模型組炎性反應(yīng)的發(fā)生，提示造模成功。小兒咽扁中劑量藥組與模型組比較，IL-1β呈現(xiàn)明顯下降（P<0.05），說明小兒咽扁顆粒對咽部急性炎性反應(yīng)有一定的作用。白細(xì)胞介素-6（IL-6），是一種由IL6基因編碼的細(xì)胞趨化因子，主要由巨噬細(xì)胞分泌，可穿過血腦屏障作用于下丘腦，改變體溫調(diào)定點(diǎn)，引起機(jī)體發(fā)熱[20]。另外，IL-6作為一種促炎因子，可以刺激急性期蛋白質(zhì)合成，以及骨髓內(nèi)中性粒細(xì)胞的產(chǎn)生。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)模型組與正常組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）;小兒咽扁低劑量組組與模型組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。說明小兒咽扁中劑量對AP有一定的作用。

綜上所述，小兒咽扁顆粒對AP大鼠從癥狀改善、抗炎及咽部病理狀態(tài)改善等方面均顯示具有較好的治療作用。由于實(shí)驗(yàn)采用的模型是化學(xué)刺激的模型，為了更進(jìn)一步接近臨床病理過程，今后會采用細(xì)菌、真菌對實(shí)驗(yàn)動物進(jìn)行造模[21]，繼續(xù)觀察小兒咽扁顆粒的治療作用。

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（2018-10-09收稿 責(zé)任編輯：徐穎）