邵成雷 孔倩倩

【摘要】目的：研究鐵棒錘生物堿類化學成分。方法：采用高分辨液質(zhì)聯(lián)用法明確鐵棒錘主要生物堿類化學成分。結(jié)果：確定了鐵棒錘18個酯型生物堿成分。結(jié)論：鐵棒錘中生物堿成分的明確為其科學應(yīng)用提供了依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】鐵棒錘，薄層色譜，液質(zhì)聯(lián)用

[中圖分類號]R284.1 [文獻標識碼]A [文章編號]2096-5249（2019）17-0063-02

鐵棒錘為鐵棒錘（Aconitum pendulum Busch）和伏毛鐵棒錘（Aconitum flavum Hand-Mazz）的干燥塊根和幼苗，收載于《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準（藏藥）》第一冊。資料記載，寧產(chǎn)鐵棒錘為道地藥材，主要為伏毛鐵棒錘。鐵棒錘資源豐富，分布廣泛，主要分布于四川、云南西北部，甘肅、西藏、陜西、青海、寧夏及內(nèi)蒙古南部，生于2000-3000 m的山頂、山坡、草地或林下。

1鐵棒錘總生物堿的制備

1.1材料試藥：鐵棒錘;石油醚（60-90%沸程）、乙醇、二氯甲烷、甲醇、正己烷、乙酸乙酯、氨水、甲醇、稀碘化鉍鉀、鹽酸均為分析純。

儀器：電子分析天平、KQ5200B超聲波清洗器、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。

1.2方法與結(jié)果

1.2.1總生物堿的制備總生物堿提取：取鐵棒錘藥材，加石油醚（60-90°C沸程）回流攪拌提取2次，第一次加石油醚8倍量（v/w），提取2h，第二次加石油醚6倍量（v/w1，提取1h。抽濾，藥渣，揮盡石油醚，加乙醇溫浸攪拌提取兩次，第一次加乙醇8倍量（v/w），溫度70%，提取2h，第二次加乙醇6倍量（v/w），溫度70%，提取1h，抽濾，乙醇液合并，低溫（40℃）減壓回收乙醇，得提取物A。加1%鹽酸10倍量，超聲溶解，用乙酸乙酯萃取2次，每次等倍量，合并乙酸乙酯液，低溫（35℃）減壓回收乙酸乙酯，備用。酸水液用氨水調(diào)PH%10，用乙酸乙酯萃取4次，每次等倍量，合并乙酸乙酯液，低溫（35℃）減壓回收乙酸乙酯，得鐵棒錘總堿提取物。

1.2.2生物堿成分的分離純化氧化鋁柱純化：取鐵棒錘總堿提取物，甲醇溶解，加中性氧化鋁（100-200目）3倍量，拌樣，過氧化鋁柱（拌樣硅膠：空白硅膠=10：1），用二氯甲烷-甲醇（70：30）洗脫，至流出液生物堿反應(yīng)陰性。合并所有洗脫液，濃縮，低溫干燥，得濃縮樣品。氧化鋁柱再用甲醇洗脫，合并甲醇液，濃縮，備用。TLC檢測結(jié)果表明，總堿提取物經(jīng)氧化鋁柱純化，二氯甲烷一甲醇（70：30）洗脫劑單一梯度可以將生物堿完全洗脫，雜質(zhì)吸附在氧化鋁柱上，實現(xiàn)初步純化。MCI GEL柱純化：取氧化鋁柱所得二氯甲烷一甲醇（70：30）洗脫部分濃縮樣品，用稀甲醇適量溶解，濾過，上MCI GEL柱，依次用水→10%甲醇→30%甲醇→50%甲醇→70%甲醇→90%甲醇→甲醇→丙酮洗脫，收集不同流份得鐵棒錘生物堿純化后流份，用于HPLC-MS分析。

2.HPLC-MS分析

供試品溶液的制備：樣品溶液制備：取1.1.2項下鐵棒錘生物堿純化后流份，加適量甲醇溶解，用0.45um有機微孔濾膜濾過，作為供試品溶液。儀器：德國Thermo FischerScientific高分辨液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀。色譜條件：WatersSymmetryCl8色譜柱（5um，250mm×4.6mm），柱溫：25%，流速800ul/min，檢測波長：230nm，進樣體積：5ul。流動相：以乙腈為流動性A，以0.1%氨水為流動性B，按下表規(guī)定進行梯度洗脫。

質(zhì)譜條件：LTQ-Orbitrap XL型質(zhì)譜，ESI離子源，鞘氣50arb，毛細管溫度275%，輔助氣lOarb，毛細管電壓25V，噴霧電壓4.0kV。正離子模式掃描，m/z掃描范圍100-1000。

3討論

鐵棒錘為常用毒性藥材，但通過炮制可以實現(xiàn)解毒增效。現(xiàn)代醫(yī)藥研究開發(fā)的藏成藥中，鐵棒錘亦為常用藥材，僅《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準》藏藥第1冊（1995年版）中收載的成藥方劑中，就有31個處方含有鐵棒錘，占藏成方的15.5%，如安神丸、三十五味沉香丸、二十五味肺病膠囊、十一味金色丸、二十九味能消散、青鵬軟膏等。鐵棒錘主物質(zhì)主要毒性成分為為二萜生物堿，根據(jù)基本骨架所含的碳原子數(shù)不同，可分為c19-二萜生物堿、C20-二萜生物堿。前者是目前發(fā)現(xiàn)的最具毒性的植物成分之一，又稱烏頭堿型生物堿，其結(jié)構(gòu)和活性密切相關(guān)，取代基種類、數(shù)目、位置的差異等均可導(dǎo)致藥理作用、毒性方面的差異。其中烏頭堿型雙酯堿>牛扁堿型酯堿>烏頭堿型單酯堿>C19及C20醇胺型堿>內(nèi)酯型堿;雙酯型>單酯型>醇胺型。雙酯型烏頭堿c8位上的乙?；?，得到苯甲酰單酯型生物堿，其毒性為雙酯型烏頭堿的1/50～1/500本實驗采用高分辨液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀對鐵棒錘中生物堿成分進行檢測，確定18個酯型生物堿：去甲基尼奧靈、螺翠寧、heterophyllidine、尼奧靈、daphnezomine s、echivulgarine、歐烏頭堿、yuzurine、苯甲酰去氧烏頭堿、16-epi-pyroaconitine、去乙酰烏頭堿、阿替辛、philogaline、烏頭堿、daechuine-$3、14-O-vera/roylneoline、多裂烏頭堿D、苯甲酰烏頭原堿。