張紅芬 周剛

摘 ?要：目的 建立固相萃取高效液相色譜同時(shí)測(cè)定肉制品中檸檬黃、新紅、胭脂紅、莧菜紅、日落黃、誘惑紅、亮藍(lán)、赤蘚紅8種合成色素。方法 樣品采用乙醇-乙腈-甲醇-氨水=30：30：30：10提取，陰離子固相萃取小柱凈化，經(jīng)Inspire C18色譜柱分離，乙腈和 0.02 mol/L乙酸銨為流動(dòng)相梯度洗脫，流速1.0mL/min。采用二極管陣列檢測(cè)器，采集254nm色譜合成圖進(jìn)行外標(biāo)法定量，并通過(guò)與對(duì)照品的光譜比對(duì)進(jìn)行確證。結(jié)果 8種合成色素在30min內(nèi)可有效分離，平均回收率為80.3%～98.0%，。結(jié)論 該方法前處理簡(jiǎn)單、檢測(cè)快速、回收率滿意且重復(fù)性好，可作為肉制品中8種合成色素的檢測(cè)方法。

關(guān)鍵詞：肉制品;固相萃取;色素

食用合成著色劑簡(jiǎn)稱合成色素，為增進(jìn)人們的食欲，保持食品色澤鮮艷而添加的非營(yíng)養(yǎng)成分，多以煤焦油中提煉出的苯胺染料為原料研制而成，有含R-N=N-R鍵、苯環(huán)或氧雜蒽等結(jié)構(gòu)[1-3]。合成色素色澤鮮艷、用量少、性質(zhì)穩(wěn)定、易著色，且價(jià)格相對(duì)便宜，但超標(biāo)、超范圍等不規(guī)范使用則會(huì)造成人體被動(dòng)的攝入過(guò)量的食用合成色素，導(dǎo)致出現(xiàn)噯氣、偏頭痛、多種過(guò)敏癥狀以及中毒等癥狀，更有甚者造成致癌、致畸、致突變等危害。目前食品合成色素的檢測(cè)主要參照國(guó)標(biāo)GB/T5009.35-2003《食品中合成著色的測(cè)定》[4]、GB/T5009.141-2003《食品中誘惑紅的測(cè)定》[5]、SN/T1743-2006《食品中的誘惑紅、酸性紅、亮藍(lán)、日落黃的含量檢測(cè)》[6]需采用多個(gè)液相系統(tǒng)才能完成對(duì)8合成色素的檢測(cè)，且樣品前處理較復(fù)雜，檢測(cè)耗時(shí)長(zhǎng)。文獻(xiàn)報(bào)道[7-8]的這些檢測(cè)方法多是針對(duì)這些人工合成色素中的一種或幾種，而沒(méi)有關(guān)于這8種人工合成色素在肉制品中同時(shí)檢測(cè)的報(bào)道。并且這些檢測(cè)方法的樣品凈化過(guò)程一般都采用聚酰胺吸附法或是液液萃取法（赤蘚紅）等，這些前處理方法具有操作環(huán)境差、操作費(fèi)時(shí)繁瑣、回收率低等特點(diǎn)。鑒于此，本方案采用ProElut PWA固相萃取小柱對(duì)樣品進(jìn)行前處理，對(duì)8種常見的合成色素進(jìn)行檢測(cè)。

一、本方案適用范圍

本方案適用于肉腸（不含淀粉或含淀粉較少的火腿腸）中人工合成著色劑的檢測(cè)。同樣適用于其他熟食類樣品中色素的測(cè)定。

二、樣品提取

（1）取1.0 g樣品，加入20 mL提取液A*，振蕩2 min，超聲提取10 min，6000 rpm下離心2 min，收集上清液

（2）取下層殘留物，加入10 mL提取液A，振蕩2 min，超聲提取15 min，6000 rpm下離心2 min，收集上清液;

（3）將下層殘留物用10mL提取液A按照步驟（2）重復(fù)提取一次，合并三次上清液;

（4）將上清液在40℃水浴條件下，減壓蒸至約3 mL，再加入2 mL水混勻，用甲酸調(diào)pH至5.0左右，待凈化。

備注：提取液A：乙醇-乙腈-甲醇-氨水=30：30：30：10

三、固相萃取柱凈化

1）活 ? ?化： 依次用5 mL甲醇、5 mL水活化固相萃取柱;

2）上 ? ?樣： 加入待凈化液，棄去流出液;

3）淋 ? ?洗： 依次加入5 mL2%甲酸水溶液、5 mL水、5 mL甲醇，棄去流出液，真空泵抽干2min;

4）洗 ? ?脫： 加入5 mL15%氨水甲醇溶液，收集流出液;

5）重新溶解： 將洗脫液在50 ℃下氮吹至約500 μL，用0.02 mol/L乙酸銨溶液定容至1 mL，供HPLC分析。

四、色譜條件

色譜柱：Inspire C18，250 mm×4.6 mm，5μm

流 ?速：1.0 mL/min ? ?進(jìn)樣量：20 μL ? 柱 ?溫：35 ℃

檢測(cè)器：PDA 254 nm

流動(dòng)相：A：乙腈 ? B：0.02 mol/L 乙酸銨溶液

結(jié)束語(yǔ)：

本方案建立了 SPE-HPLC 方法同時(shí)測(cè)定肉制品中8種合成色素。該方法較國(guó)標(biāo)方法，大大簡(jiǎn)化了前處理過(guò)程，，該方法回收和穩(wěn)定性良好，實(shí)現(xiàn)了一個(gè)液相系統(tǒng)對(duì)8種合成色素的快速測(cè)定。本方案優(yōu)于國(guó)標(biāo)方法，可用于肉制品中8種合成色素的測(cè)定。

參考文獻(xiàn)

[1] ?趙飛. 食用合成色素及其檢測(cè)技術(shù)的研究進(jìn)展[J]. 食品安全導(dǎo)刊，2012（1）：32-33.

[2] ?李明靜，王紅梅，張志偉，等.食用合成色素檢測(cè)技術(shù)研究進(jìn)展 [J]. 肉類研究，2006（5）：29-31.

[3] ?SN/T 1743-2006 食品中的誘惑紅、酸性紅、亮藍(lán)、日落黃的含量檢測(cè) 高效液相色譜法[S].

[4] ?黃志強(qiáng)，王飛，俞文妍，等.固相萃取-液相色譜法測(cè)定蜜餞中7種常見合成色素[J].食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào)，2015，（5）：1941-1947

[5] ?戚榮平，孟琪，桑嫻，等. 聚酰胺粉吸附-高效液相色譜法測(cè)定蜜餞中合成著色劑[J]