劉天民 童玲玲

制作一張高質(zhì)量的石蠟切片是一個(gè)多步驟，多因素的過(guò)程。造成石蠟制片污染的因素主要分為兩大類：組織的污染和試劑的污染，以及人為的因素。本文主要根據(jù)石蠟制片的步驟，總結(jié)歸納可能出現(xiàn)污染的情況。

1.取材

活體新鮮組織離體后，應(yīng)立即放人10%中性福爾馬林中固定，送至病理科。組織送到后，專門(mén)人員應(yīng)將組織標(biāo)本與送檢單一一對(duì)應(yīng)，核對(duì)病人的基本信息，送檢組織，若有不符，病理科有權(quán)拒收，待J臨床科室更正后再次接受，并將每日接受的標(biāo)本進(jìn)行登記。病理科標(biāo)本的接收核對(duì)是活檢組織處理的第一步，也是關(guān)鍵之一，如果一旦核對(duì)有誤，將出現(xiàn)嚴(yán)重而不可挽回的后果。

對(duì)于某些較小或者較碎的組織，如診刮的子宮內(nèi)膜組織、門(mén)診活檢的破碎宮頸組織等，取材時(shí)應(yīng)將組織包在擦鏡紙里，以免掉出包埋盒。對(duì)于某些體積過(guò)大的組織，如胎盤(pán)組織等，需固定至第二天才取材，待標(biāo)本核對(duì)結(jié)束后，一定要重新粘貼標(biāo)本袋上的標(biāo)簽，以免因福爾馬林水溶液將標(biāo)本簽打濕，造成字跡不清楚，無(wú)法確認(rèn)標(biāo)本的來(lái)源。

每次完成一個(gè)標(biāo)本的取材后，一定要對(duì)取材用的工具，如刀，鑷子，剪刀，取材板，直尺等用流水沖洗，保證不會(huì)將第一次取材的組織帶人第二次取材。取材的大小以1.5cm×1.5cm×（0.2-0.3）cm為宜，過(guò)大過(guò)厚脫水較軟，切片易破碎，過(guò)小組織脫水較硬，切片易出現(xiàn)橫紋。取材的合格與否直接影響后續(xù)組織的固定、脫水、透明、浸蠟及制片。

2.脫水機(jī)處理

取材完成后，組織放人全自動(dòng)脫水機(jī)中處理，主要包括組織的固定、脫水、透明。取材結(jié)束，須確保每個(gè)包埋盒的蓋子已蓋緊，以免組織在脫水機(jī)處理過(guò)程中掉出。脫水機(jī)中的甲醛，二甲苯，梯度酒精，液體石蠟，清洗試劑需及時(shí)更換，一方面保證脫水機(jī)每日的正常運(yùn)行，另一方面確保不因試劑的污染而造成組織的污染。

3.包埋

包埋的原則需遵循打開(kāi)一個(gè)脫水盒，包埋一個(gè)組織，杜絕一次性打開(kāi)多個(gè)脫水盒的現(xiàn)象，以免組織掉落或不慎掉人下一個(gè)包埋盒中。包埋過(guò)程的污染主要來(lái)源于組織的污染，在相鄰組織塊之間，完成一次包埋后需要將鑷子擦拭干凈，或者直接將鑷子插入包埋機(jī)的專屬鑷子加熱孔中，多把鑷子交替使用，以免上一個(gè)組織被人為帶入下一個(gè)組織中。如包埋診刮的子宮內(nèi)膜組織，由于是破碎組織，一方面鑷子上很容易粘連，另一方面組織易懸浮于底蠟中，需要及時(shí)將組織靠壓在一起。對(duì)于管狀結(jié)構(gòu)的組織，如輸卵管、臍帶等，管狀面與包埋面垂直，按“品”型包埋;對(duì)于皮紙組織，如外陰等，包埋面必須與表明垂直，這樣才能包埋皮膚的各層結(jié)構(gòu)都能被看觀察。

4.凍塊

石蠟組織完成包埋，制作成組織塊后，需放入一4℃冷凍一段時(shí)間，易于切片。在凍塊過(guò)程中，將一個(gè)病理號(hào)的每個(gè)組織按取材小號(hào)依次放置，方便后續(xù)切片。

5.切片

切片時(shí)，先核對(duì)玻片上的病理號(hào)與蠟塊組織上的病理號(hào)是否一致，保證相同無(wú)誤的前體下，再行切片。切片時(shí)，首先要保證毛筆刷、鑷子干凈，無(wú)污染物，尤其是一些含血凝塊較多的組織，在切片時(shí)容易產(chǎn)生大量細(xì)小的碎屑，進(jìn)而影響下一個(gè)蠟塊的切片。此外，在分片時(shí)，一定要注意鑷子上污染物不能掉入切片上。

展片時(shí)，需用硬紙將水面上漂浮的多余組織打撈干凈，尤其對(duì)于脂肪組織等這類在水中極易散開(kāi)的切片，以防污染。若相鄰的蠟塊是同一類型的組織，可能就會(huì)無(wú)法識(shí)別。每日完成切片工作后，需將水浴缸清洗。

6.HE染色

HE染色污染主要是試劑的污染，如常見(jiàn)的蘇木精沉查。蘇木精被氧化后在染液表面會(huì)形成氧化膜以及在媒染劑的作用下形成的氧化鋁結(jié)晶，在進(jìn)行蘇木素上色時(shí)，容易黏附在切片上，尤其是含黏液較多的組織。所以，除了定時(shí)更換或過(guò)濾蘇木素，每日染色前需將蘇木素表層的氧化膜打撈干凈，再行染色。此外，若出現(xiàn)某些切片烤片不當(dāng)，組織掉落在染色試劑中，也可能會(huì)造成污染。

7.裱片

裱片時(shí)采用的中性樹(shù)膠的濃度要實(shí)驗(yàn)，太濃膠水不易散開(kāi)，太淡容易出現(xiàn)氣泡且溢出。此外，裱片時(shí)一定要使膠水全部覆蓋組織，尤其是某些鈣化或含有顆粒體的組織時(shí)，由于該類組織表面不平整，易出現(xiàn)大氣泡，膠水?dāng)U散不均勻。

8.核對(duì)

在日常工作中，核對(duì)會(huì)花耗大量的時(shí)間，核對(duì)是制片的最后一步，也是關(guān)鍵步驟。處理上述在切片時(shí)核對(duì)蠟塊跟玻片的一致性，染色完成后需核對(duì)切片與取材記錄時(shí)的數(shù)目是否一致。

9.保存

門(mén)診標(biāo)本需保存15年，住院標(biāo)本需保存30年，所以每日的石蠟塊切片完畢后，需要及時(shí)的進(jìn)行封塊，以免組織暴露在空氣中被氧化。封塊時(shí)一定要注意時(shí)間，尤其是一些極小的組織，動(dòng)作要快，避免蠟塊融化組織掉出。

綜上，從組織送檢至病理科開(kāi)始，就應(yīng)該嚴(yán)格的按照規(guī)范流程操作，重視每一個(gè)操作步驟。在實(shí)際工作中，每日的切片量較大時(shí)，在保證制片質(zhì)量的前體下，需合理分配時(shí)間，秉承認(rèn)真負(fù)責(zé)的態(tài)度，稍有一個(gè)環(huán)節(jié)出現(xiàn)差錯(cuò)，就會(huì)影響整體效果造成污染，影響最終的病理診斷。

通訊作者：童玲玲。