姚瓊 鄭炎焱 吳曙智 林一均 吳森翔 戴顯寧 張旭
隨著我國經(jīng)濟的發(fā)展和人民生活水平的提高,高脂血癥患者逐年增加,據(jù)《中國成人血脂異常防治指南(2016年修訂版)》報道,2012年我國高膽固醇血癥的患病率為4.9%,高甘油三酯血癥的患病率為13.1%,低高密度脂蛋白膽固醇血癥的患病率為33.9%,血脂異??偦疾÷矢哌_40.4%[1]。高脂血癥可引起動脈粥樣硬化、斑塊形成、血管狹窄,增加冠心病、腦梗死等心腦血管意外的發(fā)生,給人們的生命健康和經(jīng)濟帶來嚴重的危害[2]。高脂血癥患者常用他汀類藥物治療。載脂蛋白E(apolipoprotein E,ApoE)基因位于19號染色體,有E2、E3、E4 3種主要的異構體,分別由3個等位基因ε2、ε3、ε4編碼而成,組成 6種基因型:E2型(E2/2、E2/3)、E3型(E2/4、E3/3)、E4 型(E3/4、E4/4)[3-4]。目前發(fā)現(xiàn) ApoE基因與阿爾茨海默病、冠心病、腦梗死等疾病有關。近年研究發(fā)現(xiàn)ApoE基因多態(tài)性與高脂血癥患者的血脂水平和他汀類降低膽固醇有關[5-7]。本研究旨在探討ApoE基因多態(tài)性與高脂血癥患者降脂療效的相關性,以指導臨床合理用藥。
1.1 對象 選取2016年7月至2017年12月在溫州市人民醫(yī)院神經(jīng)內科和心內科門診診斷為高脂血癥的患者 100例,其中男66例,女 34例;年齡 32~89(66.62±12.82)歲。高脂血癥診斷標準參照《中國成人血脂異常防治指南(2016年修訂版)》[1]:(1)TC≥6.2mmol/L;(2)TG≥2.3mmol/L;(3)LDL-C≥4.1mmol/L;以上 3 項中符合一項即可。排除標準:(1)嚴重肝腎功能不全患者;(2)心腦血管疾病患者;(3)腫瘤患者;(4)糖尿病血糖控制欠佳者;(5)阿托伐他汀過敏的患者;(6)精神病患者。本研究經(jīng)溫州市人民醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會批準通過。
1.2 方法
1.2.1 治療方法 患者每晚睡前口服阿托伐他?。绹x瑞制藥有限公司,20mg×7片)20mg降脂治療,治療 4周,服藥期間囑咐患者采用低脂飲食。
1.2.2 血液標本采集 治療前后分別于清晨空腹抽取患者外周靜脈血3ml用于血脂檢測;治療后同時再抽取外周靜脈血3ml,置于EDTA-K2抗凝管中,放入-20℃冰箱中冷凍保存,用于ApoE基因檢測。
1.2.3 血脂檢測 阿托伐他汀治療前后檢測患者血清TC、TG、HDL-C和LDL-C水平,計算LDL-C下降率,下降率=(治療后-治療前)/治療前×100%。以LDL-C在治療前后下降率40%為界,分為他汀治療高療效組56例和他汀治療低療效組44例。他汀治療高療效組男38例,女 18 例;年齡 46~89(68.26±11.42)歲;其中合并高血壓10例,糖尿病15例,高血壓伴糖尿病5例。他汀治療低療效組男 28例,女 16例;年齡 32~84(64.78±12.96)歲;其中合并高血壓8例,糖尿病11例,高血壓伴糖尿病4例。兩組患者性別、年齡、合并高血壓、糖尿病比例等比較差異均無統(tǒng)計學意義(均P>0.05)。
1.2.4 ApoE基因檢測 采用實時熒光定量PCR法。樣本采用全血基因組提取試劑盒(批號:20180803,蘇州天隆生物科技有限公司)提取全基因組DNA,提取過程嚴格按照試劑盒操作說明書進行。提取DNA后用SMA-4000核酸濃度分析儀(美國Merinton公司)測定其濃度和純度(DNA 推薦濃度為 5~15ng/μl,吸光度 A260/280為 1.8~2.0),待測 DNA-20℃保存。取待測 DNA 2μl加至熒光定量PCR反應體系中,至7500熒光定量PCR儀(美國ABI公司)進行擴增,反應條件:37℃ 10min,95℃ 5min,95℃ 15s,62℃ 60s,采集熒光信號,40 個循環(huán)。根據(jù)FAM、VIC不同熒光通道采集不同ApoE基因型熒光信號,進行結果判讀。ApoE基因分型試劑盒購自武漢友芝友有限公司(批號:18092808)。
1.3 統(tǒng)計學處理 采用SPSS 23.0統(tǒng)計軟件。計量資料以表示,組間比較采用兩獨立樣本t檢驗;計數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
2.1 高脂血癥患者ApoE基因分布 100例高脂血癥患者共檢出 E2/3、E2/4、E3/3、E3/4 4 種基因型,E2/2、E4/4 2種基因型未檢出。其中E3/3基因型66例(66.0%),E3/4基因型20例(20.0%),E2/3基因型 9例(9.0%),E2/4基因型 5例(5.0%)。ε2、ε3、ε4 3種等位基因檢出率:ε3 為 80.5%(161/200),ε4 為 12.5%(25/200),ε2 為7.0%(14/200)。
2.2 不同基因型高脂血癥患者血脂比較 將4種檢出的基因型分為 E2型(E2/3)9例、E3型(E2/4、E3/3)71例和E4型(E3/4)20例。因E3型樣本量最多,屬于大眾基因型,故E2型基因組、E4型基因組TC、TG、HDL-C、LDL-C均與E3型基因組進行比較。結果顯示,E2型基因組、E4型基因組TC、HDL-C、LDL-C水平與E3型基因組比較差異均有統(tǒng)計學意義(均P<0.05),其中E4型基因組TC、LDL-C水平最高,而E2型基因組TC、LDL-C水平最低。E2型基因組、E4型基因組TG水平與E3型基因組比較差異均無統(tǒng)計學意義(均P>0.05),見表1。
表1 不同基因型高脂血癥患者血脂比較(mmol/L)
2.3 兩組患者ApoE基因型分布情況比較 他汀治療低療效組E3/3基因型檢出率低于他汀治療高療效組,E3/4基因型檢出率高于他汀治療高療效組,兩組比較差異均有統(tǒng)計學意義(均P<0.05);但兩組患者E2/3基因型和E2/4基因型比較差異均無統(tǒng)計學意義(均P>0.05),見表 2。
表2 兩組患者ApoE基因型分布情況比較[例(%)]
2.4 兩組患者ApoE等位基因分布情況比較 他汀治療低療效組ε3等位基因檢出率低于他汀治療高療效組,ε4等位基因檢出率高于他汀治療高療效組,兩組比較差異均有統(tǒng)計學意義(均P<0.05);但兩組患者ε2等位基因檢出率比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),見表3。
表3 兩組患者ApoE等位基因分布情況比較[例(%)]
ApoE早在1973年被Shore等從極低密度脂蛋白(VLDL)中分離出來[8],是由299個氨基酸組成的多肽鏈,其分子量為34 145。ApoE作為配體與LDL受體、ApoE受體結合,3種異構體的受體結合能力不同,ε4等位基因的ApoE與LDL受體親和力明顯高于ε2、ε3。肝臟攝入較多含ε4等位基因的ApoE,使乳糜微粒(CM)和VLDL殘粒代謝加速,提高肝細胞內游離膽固醇含量,通過負反饋調節(jié)降低肝細胞表面LDL-C受體數(shù)量,減緩LDL分解代謝,最終使血中CM、VLDL下降,TC、LDL-C升高,從而導致脂代謝紊亂[9-11]。
文獻表明ApoE基因頻率具有特征性分布,E3/3基因型檢出率最高,ε3等位基因在3種等位基因中分布最高[12]。本研究發(fā)現(xiàn)100例高脂血癥患者共檢出E2/3、E2/4、E3/3、E3/4 4種基因型,其中E3/3基因型檢出率為66.0%,E3/4基因型為20.0%,E2/3基因型為9.0%,E2/4基因型為 5.0%。ε2、ε3、ε4 3 種等位基因檢出率:ε3為80.5%,ε4為12.5%,ε2為7.0%,與國內大部分文獻報道的3個基因型分布比例大致相同[13-14],細微差異可能與不同地區(qū)人群民族構成、飲食結構不同等因素有關。E2型基因組、E4型基因組與E3型基因組TC、HDL-C、LDL-C水平比較差異均有統(tǒng)計學意義,其中E4型基因組TC、LDL-C水平最高,而E2型基因組TC、LDL-C水平最低,結果與既往文獻報道[15]相符。本研究還發(fā)現(xiàn)不同ApoE基因型人群對他汀藥物的敏感性不同,E3/3基因型他汀治療效果好,E3/4基因型他汀治療效果差,且ε4等位基因在他汀治療低療效組檢出率高,擁有這個基因型的人群為了血脂達標,可能需要他汀加量或加用其他降脂類藥物比貝特類、煙酸類。
高脂血癥是引起動脈粥樣硬化的高危因素,而動脈粥樣硬化是導致冠心病、腦梗死等心腦血管意外發(fā)生的主要原因。ApoE基因是目前較熱門的研究對象,參與機體脂蛋白代謝,其多態(tài)性與高脂血癥密切相關。通過本研究進一步證實ApoE基因分布具有特異性,ApoE基因多態(tài)性與高脂血癥患者降脂療效相關性較大,同時還發(fā)現(xiàn)ε4等位基因影響阿托伐他汀降低血脂的效果,E3/4基因型他汀治療效果差。故臨床治療高脂血癥患者時需密切注意ApoE不同位點突變情況,對于他汀治療效果差的患者進行基因檢測明確基因型,E3/4基因型如果使用他汀類藥物降脂需要加量使用,治療期間需注意不良反應[16-17],指導臨床合理用藥。