張秋豐

摘 ?要：該文針對(duì)植物甾醇酯、植物甾醇和脂肪酸酯，合成體系中各組分的同時(shí)定性、定量分析方法，建立了氣相色譜和高效液相色譜同時(shí)監(jiān)測(cè)合成反應(yīng)過(guò)程的新型色譜分析模式。對(duì)植物甾醇酯的合成實(shí)驗(yàn)和工業(yè)化生產(chǎn)都能起到實(shí)時(shí)監(jiān)控和指導(dǎo)作用，對(duì)醫(yī)藥、工業(yè)、食品等行業(yè)都有重要的現(xiàn)實(shí)意義。

關(guān)鍵詞：植物甾醇酯 ?氣相色譜 ?高效液相色譜

中圖分類號(hào)：O657 ? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A ? ? ? ? ? ?文章編號(hào)：1672-3791（2019）05（c）-0233-02

植物甾醇酯是一種新型的功能性食品添加劑，具有很好的降低膽固醇效果[1]。目前國(guó)外對(duì)植物甾醇酯的合成發(fā)展迅速，國(guó)內(nèi)仍較滯后[2，3]。但合成過(guò)程中一般采用氣相色譜或液相色譜實(shí)時(shí)監(jiān)控，分析方法比較單一，各有缺點(diǎn)。該文同時(shí)采用氣相色譜和液相色譜聯(lián)用分析，能更全面、準(zhǔn)確地對(duì)合成反應(yīng)監(jiān)控，彌補(bǔ)單一分析的不足。

儀器與材料：安捷倫6820氣相色譜儀，氫火焰離子檢測(cè)器;安捷倫1100高效液相色譜儀，安捷倫1100紫外檢測(cè)器;植物甾醇酯對(duì)照品采購(gòu)于德國(guó)康尼士生物公司，經(jīng)檢測(cè)純度大于95%，樣品由大連醫(yī)諾生物制品有限公司提供，實(shí)驗(yàn)中采用試劑為色譜純。

1 ?氣相色譜條件

色譜柱：DB-5高溫毛細(xì)管柱（15m×0.319mm×0.10?m）。

檢測(cè)器：氫火焰離子檢測(cè)器，其溫度為350℃。

柱溫條件：采用程序升溫方式，初溫定為170℃，持續(xù)3min，然后以每分鐘升高5℃的速度到320℃，持續(xù)25min。

進(jìn)樣量：0.5?L。

2 ?氣相色譜對(duì)照品配制

稱量樺木醇純品100mg置于100mL容量瓶，用異丙醇定容到刻度線，可得內(nèi)標(biāo)溶液待用。稱量植物甾醇酯對(duì)照品200mg，用正庚烷定容至100mL，得到植物甾醇酯對(duì)照品儲(chǔ)備液待用。取2.0mL、4.0mL、6.0mL、8.0mL儲(chǔ)備液分別置于10mL容量瓶中，再向四杯儲(chǔ)備液瓶中各加樺木醇內(nèi)標(biāo)液1.0mL，并定容到刻度線。

3 ?氣相色譜標(biāo)準(zhǔn)曲線

在上述條件下進(jìn)樣分析，將植物甾醇酯對(duì)照品溶液中甾醇酯與樺木醇峰面積之比作為橫坐標(biāo)，甾醇酯與樺木醇濃度之比作為縱坐標(biāo)，得相關(guān)曲線線性回歸方程：Y=1.2176X+0.0137，R=0.9973。

4 ?氣相色譜樣品分析

稱量100mg植物甾醇酯樣品放置于50mL容量瓶中，再加入1.0mL樺木醇內(nèi)標(biāo)液，用正庚烷定容，取0.5?L進(jìn)樣檢測(cè)（見(jiàn)圖1）。

5 ?液相色譜條件

色譜柱：硅膠正相柱（250mm×4.6mm，5μm）。

流動(dòng)相∶正己烷∶異丙醇∶甲醇=98∶2∶1.5%。

流速：1mL/min。

檢測(cè)波長(zhǎng)：210nm。

進(jìn)樣量：20μL。

6 ?液相色譜對(duì)照品配制

稱量植物甾醇酯對(duì)照品100mg溶于100mL流動(dòng)相，0.45?m濾膜濾過(guò)，可得對(duì)照品儲(chǔ)備液。

7 ?液相色譜標(biāo)準(zhǔn)曲線

取對(duì)照品儲(chǔ)備液2.0mL、4.0mL、6.0mL、8.0mL，分別置于4個(gè)10mL容量瓶，用流動(dòng)相稀釋至刻度，各取20?L進(jìn)樣分析。濃度作為橫坐標(biāo)，峰面積作為縱坐標(biāo)，可得標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程：Y=178351X+28959，R=0.9894。

8 ?液相色譜樣品分析

取樣品溶液20?L，在上述色譜條件下進(jìn)樣分析（見(jiàn)圖2）。

9 ?討論

氣相色譜法操作簡(jiǎn)便，3種植物甾醇酯能分別出峰，對(duì)合成實(shí)驗(yàn)進(jìn)展情況，及各組分變化情況能夠及時(shí)了解。而高效液相色譜法或其他方法往往很難將他們較好分離。但HPLC法對(duì)植物甾醇酯能快速分析檢測(cè)，方法簡(jiǎn)便、易行，而且穩(wěn)定、重現(xiàn)性好。如果不要求對(duì)各組分單體準(zhǔn)確分析，此方法是同時(shí)分析植物甾醇、植物甾醇酯和脂肪酸酯最為理想的方法。

上述兩種分析方法不僅可以對(duì)植物甾醇酯準(zhǔn)確定性、定量分析，而且可以同時(shí)對(duì)樣品中的甾醇和脂肪酸酯及雜質(zhì)準(zhǔn)確分析。這兩種方法對(duì)甾醇酯的合成實(shí)驗(yàn)和工業(yè)化生產(chǎn)都能起到實(shí)時(shí)監(jiān)控和指導(dǎo)作用，具有重要意義。

參考文獻(xiàn)

[1] 唐傳核，彭志英.一種新型功能性食品一植物甾醇酯[J].中國(guó)油脂，200l，28（3）：60-63.

[2] Millqvist Anna.Lipase catalyzed alcoholysis of triglycerides for the preparation of 2 monoglycerides[J].Enzyme Microbial Technology，1994，16（12）：1042-1047.

[3] Berlin.E.Effect of omega-3 fatty acid and vitamin E supplementation on erythrocyte membrance fluidity tocopherols，insulin binding，and lipid composition in adult me[J].Journal of Nutritional Biochemistry，1992，3（8）：392-400.