雷春龍，李 娟，吳永勝，曹雨辰，邱時(shí)秀，陳亞迎，劉瀚揚(yáng)，朱佳文，徐麒麟，許禎瑩

（成都市農(nóng)林科學(xué)院畜牧研究所，四川成都 611130）

桑樹作為傳統(tǒng)的“藥食同源”植物，在中國具有悠久的栽種歷史。桑葉中含有豐富的粗蛋白質(zhì)、維生素、礦物元素及多種天然生物活性物質(zhì)[1]。同時(shí)，桑葉中富含生物堿、黃酮和多糖類物質(zhì)，對(duì)動(dòng)物機(jī)體具較強(qiáng)的抗氧化等功效，特別是獨(dú)特的生物堿1-脫氧野尻霉素（1-DNJ）具有顯著的降血糖作用[2]。目前大多將桑葉加工成風(fēng)干初粉作為飼料原料應(yīng)用于畜禽養(yǎng)殖中，但初粉中粗纖維含量較高，且含有單寧、植物凝集素等抗?fàn)I養(yǎng)因子[3]，使其在動(dòng)物生產(chǎn)中的應(yīng)用受到極大限制。運(yùn)用現(xiàn)代植物提取工藝對(duì)桑枝葉提取后可有效降低其粗纖維含量，并可以較好保留其生物活性物質(zhì)。本試驗(yàn)旨在研究桑枝葉提取物對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能、血清免疫指標(biāo)與抗氧化能力的影響，為桑枝葉提取物作為一種新型蛋雞飼料添加劑提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料 桑枝葉初粉來源于成都市農(nóng)林科學(xué)院畜牧研究所科研基地。首先對(duì)矮化密植的灌木生長形態(tài)的桑樹嫩枝（長度≤ 1 m）進(jìn)行刈割：桑枝下端留茬30～40 cm，剩余上端部分（含葉）全部刈割，將刈割后的桑枝葉一起翻曬，均勻失水，干燥后粉碎成30～50 目的顆粒物，得到桑枝葉混合初粉，常溫干燥環(huán)境下保存待提取，桑枝葉初粉的營養(yǎng)成分見表1。試驗(yàn)用桑枝葉提取物為上述桑枝葉初粉的乙醇浸提產(chǎn)物，提取得率約為10%，其提取產(chǎn)物干物質(zhì)含量為92.36%， 粗蛋白含量為18.36%，粗纖維含量為4.6%，粗灰分含量為8.9%。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 采用單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)，將324 只47 周齡體重相近、健康、采食正常的羅曼粉蛋雞隨機(jī)分成4組，每組3 個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)27 只雞。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)日糧，試驗(yàn)組分別在基礎(chǔ)日糧中添加0.2%、0.4%、0.8% 的桑枝葉提取物。試驗(yàn)基礎(chǔ)日糧參照中國產(chǎn)蛋雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)（NY/T 33—2004）配制。試驗(yàn)基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)成分見表2。

表1 桑枝葉初粉的營養(yǎng)成分（風(fēng)干基礎(chǔ)） %

表2 試驗(yàn)基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)成分（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.3 飼養(yǎng)管理 試驗(yàn)在四川省成都市大邑縣韓場(chǎng)鎮(zhèn)成都華昌禽業(yè)有限公司養(yǎng)殖場(chǎng)進(jìn)行。試驗(yàn)預(yù)試期7 d，正試期57 d。試驗(yàn)雞飼養(yǎng)方式為3 層階梯式籠養(yǎng)，每籠3 只雞，自由采食，每日喂料2 次，自由飲水，每日13:30 收集雞蛋并記錄，每日觀察雞只的精神狀態(tài)，食欲和排糞情況。

1.4 測(cè)定指標(biāo)與方法

1.5.1 生產(chǎn)性能 以每日為單位記錄產(chǎn)蛋數(shù)、次蛋（沙皮蛋、軟殼蛋、薄殼蛋、雙黃蛋、破殼蛋）數(shù)、采食量和平均蛋重，并計(jì)算產(chǎn)蛋率、平均日采食量、料蛋比和次蛋率。

1.5.2 血清免疫與抗氧化指標(biāo) 試驗(yàn)期第63 天晚上停止喂料，第64 天早上每組隨機(jī)選取15 只（每個(gè)重復(fù)5 只）健康蛋雞，翅靜脈采血，采集完的血液靜置3～4 h 待血液凝固后，3 000 r/min 離心10 min，收集血清，裝入EP 管中，于-20℃保存?zhèn)溆?，用于測(cè)定血清免疫與抗氧化指標(biāo)。血清測(cè)定指標(biāo)包括免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白M（IgM）、白細(xì)胞介素-1（IL-1）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）、腫瘤壞死因子（TNF-α）、補(bǔ)體C3、補(bǔ)體C4 以及總抗氧化能力（T-AOC）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）、丙二醛（MDA）均采用北京奇松生物有限公司的酶聯(lián)免疫試劑盒進(jìn)行測(cè)定，其標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R≥0.99。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析 采用Excel 2007 和SPSS 19 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析和LSD 多重比較。所有結(jié)果均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。P＜0.05 為差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同添加水平桑枝葉提取物對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能的影響 由表3 可知，與對(duì)照組相比，各添加組蛋雞的日采食量無顯著差異，但各添加組蛋雞的次蛋率分別降低36.30%、57.30% 和63.70%（P＜0.05）。 同 時(shí)，0.4%組和0.8%組蛋雞的產(chǎn)蛋率較對(duì)照組顯著提高，料蛋比顯著降低。

2.2 不同添加水平桑枝葉提取物對(duì)蛋雞血清免疫指標(biāo)的影響 由表4 可知，與對(duì)照組相比，各添加組的蛋雞血清補(bǔ)體C3 和補(bǔ)體C4 無顯著差異，但各添加組血清IgG 均顯著提高，其提高比例分別為3.09%、8.24%和10.42%。同時(shí)，0.4% 組和0.8% 組蛋雞血清IgA、IgM、IL-6 和TNF-α 較對(duì)照組均顯著提高，對(duì)應(yīng)提高比 例 分 別 為9.24% 和19.50%、27.61% 和31.98%、20.70%和36.97%、19.34%和22.77%。此外，0.8%組蛋雞血清IL-1 較對(duì)照組顯著提高。

表3 不同添加水平桑枝葉提取物對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能的影響

2.3 不同添加水平桑枝葉提取物對(duì)蛋雞血清抗氧化能力指標(biāo)的影響 由表5 可知，與對(duì)照組相比，各添加組的蛋雞血清SOD 無顯著差異，但隨著桑枝葉提取物添加量的增加蛋雞血清SOD 有逐漸升高的趨勢(shì)。同時(shí)，0.4% 組和0.8% 組蛋雞血清T-AOC 較對(duì)照組均提高（P＜0.05），其提高比例分別為9.11% 和17.25%。此外，0.8%組蛋雞血清GSH-Px 較對(duì)照組提高（P＜0.05），血清MDA 降低（P＜0.05）。

3 討 論

3.1 桑枝葉提取物對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能的影響 本試驗(yàn)蛋雞為47 周齡，屬于產(chǎn)蛋高峰后期階段，不同桑枝葉提取物添加量對(duì)產(chǎn)蛋高峰后期的日采食量均無顯著影響，但各添加組的次蛋率均顯著降低，同時(shí)0.4%和0.8%添加量可顯著提高產(chǎn)蛋率，顯著降低料蛋比。蘭翠英[4]研究發(fā)現(xiàn)，添加桑葉粉會(huì)造成蛋雞采食量降低，認(rèn)為與桑葉粉中粗纖維含量較高而代謝能較低有關(guān)。趙春曉[5]研究發(fā)現(xiàn)，添加不同比例桑葉粉會(huì)造成蛋雞產(chǎn)蛋量和飼料效率出現(xiàn)一定程度的降低，并且發(fā)現(xiàn)在飼喂桑葉粉的前5 d 其采食量會(huì)有所降低，初期之后逐步適應(yīng)。王軍等[6]研究發(fā)現(xiàn)，在羅曼蛋雞日糧中添加2%桑葉粉其采食量明顯減少，但產(chǎn)蛋量和蛋重均有提高，蛋殼破損率顯著降低。邱時(shí)秀等[7]也有類似的研究結(jié)果。本試驗(yàn)中桑枝葉提取物對(duì)增強(qiáng)蛋雞產(chǎn)蛋率和降低次蛋率的效果與上述研究具有一致性。黃靜等[3]研究發(fā)現(xiàn)，桑葉中含有單寧、植物凝集素等抗?fàn)I養(yǎng)因子，大量添加桑葉會(huì)導(dǎo)致畜禽生產(chǎn)性能下降。本試驗(yàn)采用桑枝葉風(fēng)干初粉的乙醇浸提產(chǎn)物，桑枝葉粗纖維含量有效降低，而桑枝葉中的營養(yǎng)成分和有益生物活性物質(zhì)得到較好保留?？梢姡Ｖθ~提取物對(duì)蛋雞的生產(chǎn)性能提升具有較好效果，特別是對(duì)產(chǎn)蛋高峰后期保持產(chǎn)蛋率的穩(wěn)定性具有較好的作用，同時(shí)對(duì)降低次蛋率有顯著效果。因此，這為桑枝葉提取物作為一種新型蛋雞飼料添加劑提供了參考依據(jù)。

3.2 桑枝葉提取物對(duì)蛋雞血清免疫指標(biāo)的影響 本試驗(yàn)表明，蛋雞日糧中添加桑枝葉提取物均在不同程度上提高了血清免疫指標(biāo)的含量。與對(duì)照組相比，3 個(gè)添加組的雞蛋血清IgG 均顯著提高，0.4%組和0.8%組IgA、IgM、IL-6 和TNF-α 均顯著提高。許禎瑩等[8]研究發(fā)現(xiàn)，桑枝葉干粉可一定程度提高蛋雞血清免疫球蛋白和白細(xì)胞介素的含量。蘇海涯等[9]研究發(fā)現(xiàn)，桑葉的天然活性物質(zhì)對(duì)畜禽具有免疫保健作用，可提高畜禽的抗病力，并能夠防止禽流感的發(fā)生。研究發(fā)現(xiàn)，多糖類物質(zhì)可提高動(dòng)物機(jī)體的淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率，促進(jìn)淋巴細(xì)胞數(shù)量增殖[10]。此外，桑葉蛋白中富含動(dòng)物機(jī)體必需和半必需的氨基酸，其中蛋氨酸、賴氨酸以及谷氨酸是維系腸道免疫功能的重要原料[11]?？梢姡Ｖθ~提取物富含的多糖成分可有效調(diào)節(jié)增強(qiáng)蛋雞的免疫功能，同時(shí)其氨基酸成分對(duì)維系蛋雞腸道免疫具有保健功效，但桑枝葉提取物提高蛋雞免疫功能是一個(gè)復(fù)雜的綜合生理效應(yīng)，其詳細(xì)機(jī)理有待進(jìn)一步研究。

表4 不同添加水平桑枝葉提取物對(duì)蛋雞血清免疫指標(biāo)的影響

表5 不同添加水平桑枝葉提取物對(duì)蛋雞血清抗氧化能力指標(biāo)的影響

3.3 桑枝葉提取物對(duì)蛋雞血清抗氧化能力指標(biāo)的影響本試驗(yàn)表明，與對(duì)照組相比，各個(gè)添加組均不同程度提高了蛋雞血清T-AOC、GSH-Px 和SOD 含量，降低了蛋雞血清MDA 含量。許禎瑩等[8]研究發(fā)現(xiàn)，在日糧中添加桑葉干粉，蛋雞血清SOD 呈現(xiàn)升高趨勢(shì)，而MDA有降低趨勢(shì)，但GSH-Px 未呈現(xiàn)升高趨勢(shì)；添加6%桑葉粉顯著地提高了蛋雞血清T-AOC。黃靜等[3]在胡須雞飼糧中添加桑葉粉，發(fā)現(xiàn)胡須雞血清T-AOC 和GSHPx 均有增加趨勢(shì)。張敏[12]研究發(fā)現(xiàn)，桑葉粉可顯著降低鏈脲佐菌素糖尿病模型大鼠血液MDA 含量。本試驗(yàn)與上述研究具有一致性，但由于試驗(yàn)動(dòng)物不同，因此顯著性效果有差異。Doi 等[13]從桑葉中分離出多種類黃醇生物活性物質(zhì)，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)黃醇具有清除機(jī)體脂質(zhì)過氧化物和自由基等作用。同時(shí)，有學(xué)者發(fā)現(xiàn)黃酮類和多糖類物質(zhì)本身就是天然的強(qiáng)抗氧化劑，可直接清除機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過氧化物和超氧離子自由基，特別是對(duì)清除酶類物質(zhì)不能清除的羥自由基具有良好效果[14]。因此，桑枝葉提取物對(duì)提高蛋雞血清抗氧化能力具有的良好效果原因可能是由于其富含的類黃醇、黃酮類和多糖類等生物活性物質(zhì)發(fā)揮良好的清除氧自由基的生理效應(yīng)。

4 結(jié) 論

本試驗(yàn)結(jié)果說明，日糧中添加0.4% 和0.8% 桑枝葉提取物均可提高蛋雞的總體生產(chǎn)性能，可以顯著降低次蛋率，同時(shí)對(duì)蛋雞機(jī)體的免疫功能和抗氧化能力均有一定的增強(qiáng)效果?？紤]到添加成本，建議蛋雞日糧中桑枝葉提取物最佳添加量為0.4%。